In vitro and in vivo antioxidative and hepatoprotective activity of aqueous extract of Cortex Dictamni

AIM To investigate the antioxidant and hepatoprotective effects of Cortex Dictamni aqueous extract(CDAE) in carbon tetrachloride(CCl4)-induced liver damage in rats.METHODS The in vitro antioxidant effect of CDAE was investigated using α,α-diphenyl-β-picrylhydrazyl(DPPH), 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)(ABTS), β-carotene bleaching, reducing power, and thiobarbituric acid reactive substance assays. A linoleic acid system, including ferric thiocyanate(FTC) and thiobarbituric acid(TBA) assays, was used to evaluate the inhibition of lipid peroxidation. The in vivo hepatoprotective and antioxidant effects of CDAEagainst CCl4-induced liver damage were evaluated in Sprague-Dawley rats. Silymarin was used as a positive control. Liver damage was assessed by determining hepatic histopathology and liver marker enzymes in serum. Enzyme and non-enzyme antioxidant levels and lipid peroxide content were measured in the liver. Cytochrome P450 2E1(CYP2E1) protein expression was measured via immunohistochemical staining. Nuclear factor E2-related factor(Nrf2), heme oxygenase-1(HO-1), NAD(P)H quinine oxidoreductase 1(NQO1), and γ-glutamylcysteine synthetase catalytic subunit(γ-GCSc) protein expression was measured by Western blot.RESULTS Our results showed that CDAE exhibited a strong antioxidant activity in vitro. CDAE scavenged DPPH and ABTS radicals in a dose-dependent manner. CDAE inhibited lipid peroxidation with a lipid peroxide inhibition rate of 40.6% ± 5.2%. In the FTC and TBA assays, CDAE significantly inhibited lipid peroxidation(P < 0.01). In vivo histopathological studies indicated that CCl4-induced liver injury was alleviated following CDAE treatment in rats of both sexes. CDAE(160 and 320 mg/kg) significantly prevented CCl4-induced elevations of alkaline phosphatase, glutamate pyruvate transaminase, aspartate aminotransferase, and total bilirubin levels in rats of both sexes(P < 0.05, 0.01, or 0.001). Moreover, CDAE restored the decreased activities of hepatic antioxidant enzymes, including superoxide dismutase, catalase, and glutathione peroxidase, as well as non-enzyme antioxidant glutathione, which were induced by CCl4 treatment. CDAE significantly suppressed the up-regulation of CYP2E1 and promoted Nrf2, HO-1, NQO1, and γ-GCSc protein expression.CONCLUSION CDAE exhibits good antioxidant performance in vitro, with marked radical-scavenging and anti-lipid peroxidation activities. CDAE is effective in preventing CCl4-induced hepatic damage in rats of both sexes. The hepatoprotective activity of CDAE may be attributable to its antioxidant activity, which may involve Keap1-Nrf2-mediated antioxidant regulation.

白鲜皮免疫调节机制的网络药理学分析及验证

本试验旨在探究白鲜皮的免疫调节能力及其机制。通过TCMSP数据库筛选出11个白鲜皮活性成分,利用GeneCard数据库和OMIM数据库预测到318个相关联的靶点基因,通过对药物靶点的筛选,获得63个疾病与药物共同的靶点。通过Cytoscape软件构建药物-活性成分-靶点网络。使用Perl计算机程序语言对GO功能富集结果进行筛选和KEGG通路富集分析。通过腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型,用1.3、2.6、5.2 g/kg BW(按生药量计)的白鲜皮提取物灌胃免疫抑制小鼠2周后检测小鼠体重、免疫器官指数、血清细胞因子含量、血常规指标。结果显示:白鲜皮中的黄芩素、β-谷甾醇、木犀草素、白鲜明碱、前茵芋碱、槲皮素等化合物通过调节AKT1、IL6、IL1B、JUN、PTGS2、VEGFA等重要靶点,参与调节白细胞介素-17信号通路、肿瘤坏死因子信号通路,进而起到免疫调节的效果。小鼠免疫抑制试验发现,相比模型组,5.2 g/kg BW白鲜皮提取物对小鼠的体重没有产生显著影响(P>0.05),但极显著增加了小鼠的肝脏指数和脾脏指数(P<0.01);此外,5.2 g/kg BW白鲜皮提取物极显著提高了小鼠血清白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、免疫球蛋白A(IgA)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量(P<0.01)。本研究展现了白鲜皮免疫调节多成分、多靶点作用的特点,可为白鲜皮在畜禽健康养殖中的应用提供科学依据。

Quality standard study on Dictamni Cortex

As a traditional Chinese medicine （TCM）, Dictamni Cortex is widely used for the treatment of rheumatism and skin diseases. To promote the internationalization of Dictarnni Cortex, we established a recommended quality standard of Dictamni Cortex according to the European Pharmacopoeia （EP） in the present study. Foreign matter, loss on drying, total ash and ash insoluble in hydrochloric acid were determined according to the procedures of EP 8.0. The thin layer chromatography （TLC） identification method was established by using obacunone and fraxinellone as the reference substances. The content of dictarnnine, obacunone and fraxinellone was assayed by reversed phase high performance liquid chromatography （RP-HPLC）. Furthermore, we tested 21 batches of the prepared slices of Dictamni Cortex from different regions. The results indicated that the established quality standard was specific, accurate and internationalized, which could be used for the quality control of Dictamni Cortex.

基于网络药理学和体内实验探究白鲜皮致急性肝损伤的机制

目的通过网络药理学与动物体内实验,探究白鲜皮致急性肝损伤的机制。方法通过TCMSP、TCMIP和SwissTargetPrediction数据库得到白鲜皮的化学成分和作用靶点,GeneCards和CTD数据库获取肝损伤疾病的相关靶点。利用STRING数据库对交集靶点进行蛋白质互作网络分析并筛选出核心靶点,利用DAVID数据库完成GO功能和KEGG通路富集分析,使用Cytoscape软件构建“药物-成分-靶点”多层次关联网络图。动物实验中,通过灌胃给予小鼠92.7 g/(kg·d)白鲜皮,7 d后取材。采用苏木精-伊红(HE)、Masson、油红O染色观察肝脏病理学变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β的表达情况;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝脏组织蛋白激酶B1(AKT1)、IL-6、TNF-α、肿瘤蛋白p53(TP53)、胱天蛋白酶3(CASP3)、IL-1β的m RNA表达。应用分子对接验证潜在毒性成分与靶点的结合情况。结果通过筛选共得到白鲜皮化学成分14个,预测靶点244个;与肝损伤的交集靶点202个。GO生物过程分析主要涉及基因表达正向调控、凋亡过程的负向调控等。KEGG通路富集分析主要包括癌症途径、磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶、TNF、IL-17等信号通路等。病理片结果显示,给予白鲜皮后,HE染色小鼠肝组织中可见重度出血,较大量的肝细胞坏死,核碎裂或溶解;Masson染色显示肝组织出现明显纤维化;油红O染色结果有大量脂滴生成。ELISA结果显示与空白组相比,给药组小鼠血清AST、ALT、ALP、LDH及肝脏MDA、TNF-α、IL-1β水平显著上升(P<0.05),肝脏SOD水平显著降低(P<0.05)。qRT-PCR结果显示给药组小鼠肝脏组织相关m RNA表达量均显著升高(P<0.05)。分子对接显示黄柏酮、白鲜碱、梣酮3个白鲜皮的潜在毒性成分与AKT1、IL-6、TNF-α、TP53、CASP3、IL-1β靶点结合性、亲和力良好。结论黄柏酮、白鲜碱、梣酮、柠檬苦素可能是白鲜皮致小鼠急性肝损伤潜在毒性成分,白鲜皮可能是通过改变AKT1、IL6、TNF-α、TP53、CASP3、IL-1β等蛋白的表达,影响能量代谢、细胞分化、炎症、氧化应激及免疫等多种途径来作用于肝脏,导致肝损伤。

湿毒清制剂肝损伤风险分析及思考

目的分析湿毒清制剂安全性风险,特别是致肝功能异常风险,为临床合理用药提供参考。方法对我国药品不良反应监测系统数据库(2004年1月1日至2023年12月31日)、国内文献数据库(建库至2023年12月31日)中的湿毒清制剂肝损伤相关不良反应/事件进行整理与分析。结果国家药品不良反应监测系统数据库共收到涉及湿毒清制剂肝胆损害相关不良反应/事件病例报告24例;临床研究文献未见肝胆损害相关不良反应;个例报道涉及的不良反应/事件表现为药物性肝病、肝损伤。结论临床使用湿毒清制剂应关注肝损伤风险,提高安全合理用药意识,加强用药监测。同时,药品上市许可持有人应加强药物警戒及风险管理,做好用药指导与宣传,切实保障患者用药安全。

国医大师禤国维运用皮类中药治疗皮肤病经验

基于“以皮治皮”理论,运用皮类中药治疗皮肤病是中医“整体辨证”与“取象比类”思维的体现。国医大师禤国维教授以阴阳为本,从皮肤病“阴阳失衡,外见于皮”的核心病机出发,将“以皮治皮”与“平调阴阳”理论相结合,发挥皮类中药在治疗皮肤病的独特优势。具体临证时,常采用蝉蜕配伍白鲜皮祛风止痒以治疗变态反应性皮肤病,乌豆衣配伍白鲜皮祛风补肾以治疗色素减退性皮肤病,牡丹皮配伍地骨皮滋阴清热活血以治疗自身免疫性皮肤病,桑白皮配伍地骨皮泻肺滋肾以治疗皮脂分泌异常性皮肤病。皮类中药具有祛风透疹、补肾滋阴等功效,“以皮治皮”的用药思路指导治疗皮肤病,可为皮肤科疾病的临床诊治提供借鉴。

白鲜皮中白鲜碱的提取工艺优化研究

通过单因素、正交实验设计优化白鲜皮中白鲜碱的提取工艺,白鲜碱作为对照品,制作标准曲线,采用高效液相色谱仪测定白鲜碱的含量。结果显示以乙醇作为溶剂时,白鲜碱的最佳提取工艺是乙醇浓度为90%,提取时间为1.5 h,料液比为1∶4,温度为70℃,在最佳提取工艺下,白鲜皮醇提取液中白鲜碱的含量为0.94 mg/g。标准曲线回归方程为y=215315x+740.97,R^(2)=0.999,在0.0005~0.02 mg/mL范围内呈良好线性关系。本工艺方法操作简便,易实现,为下一步提取白鲜碱进一步活性研究提供依据。

白鲜皮不同溶剂提取物的抗菌活性评价

目的:评价白鲜皮不同极性溶剂提取物的抗菌活性。方法:用乙醇、乙酸乙酯、石油醚三种溶剂制备白鲜皮提取物。观察三种提取物对金黄色葡萄球菌抗菌效果,选出抗菌效果最好的提取物,采用二倍稀释法测最小抑菌浓度,用鉴别试剂去鉴别该提取物可能含有的化学成分。结果:三种提取物中抑菌率强弱顺序为石油醚提取物、乙酸乙酯、乙醇提取物,其中乙醇提取物几乎没有抗菌效果。石油醚提取物的最小抑菌浓度为0.125g/mL。初步判定,石油醚提取物中可能含有生物碱、黄酮、油脂、甾体或三萜类化合物。结论:白鲜皮石油醚提取物对金黄色葡萄球菌有较好的抗菌效果,为进一步从脂溶性成分提取分离抗菌有效成分,提供了理论参考。

Qualitative and quantitative analysis of Arnebiae Radix and Dictamni Cortex and efficacy study of herbal extracts on allergic contact dermatitis using 3D human reconstructed epidermis

Objective:To evaluate the quality of Arnebiae Radix(AR)and Dictamni Cortex(DC)and study the efficacy of herbal extracts of these two herbs on the treatment of allergic contact dermatitis(ACD).Methods:Qualitative and quantitative analysis of effective components was performed using High Performance Thin Layer Chromatography(HPTLC),High Performance Liquid Chromatography(HPLC),and HPLC-Quadrupole Time of Flight-Mass Spectrometry(HPLC-QTOF-MS).In vitro allergic ACD 3D model was established by incubating 3D reconstructed human epidermis(RHE)with skin sensitizer,potassium dichromate.A total of 65 gene expression that were associated with ACD,which included 24 antioxidant responsive element(ARE)and 41 SENS-IS genes were quantified by q RT-PCR.More than or equal to 10 ARE genes and 18 SENN-IS genes were induced by 1.3-fold,demonstrating the successful establishment of in vitro ACD model.Oil extracts of AR and DC were applied on the in vitro ACD model to study the efficacy.Results:Batch 3 of AR and batch 2 of DC showed presence of all active ingredients with the highest concentrations.Active ingredients of the herbs were extracted using a special oil and formulated into herbal oil extracts.The herbal oil extracts were able to down regulate the induced genes in the in-vitro ACD skin model,bringing the tissue back to homeostatic status.Conclusion:The oil extracts showed the potent efficacy of using AR and DC in ACD treatment.The combination study will be done to optimize the formulation ratio which will be developed into a topical cream.

白鲜皮及汉黄芩素治疗银屑病的网络药理学研究及细胞验证

【目的】通过网络药理学探讨中药白鲜皮及其主要活性成分汉黄芩素治疗银屑病靶点和机制,并进行细胞验证。【方法】通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、中医百科全书数据库检索白鲜皮化学成分,以口服生物利用度(OB)和类药性(DL)筛选其主要活性成分及作用靶点,在GeneCard数据库检索银屑病疾病靶点,对二者取交集得到白鲜皮潜在调控靶点。对这部分靶点进行基因富集分析,并使用STRING数据库、Cytoscape软件制作蛋白互作图,再进一步使用CytoHubba插件进行关键基因的筛选。选取调控关键基因最多的主要活性成分汉黄芩素进行细胞实验:制作HaCaT细胞银屑病样模型,确定汉黄芩素的半抑制浓度(IC50),以10%IC50干预银屑病样细胞模型,对关键基因进行实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测。【结果】白鲜皮共筛选出11种有效单体成分,共计对应106个有效靶点,银屑病包含4055个可供调控的靶点,取交集发现其中63个可能是白鲜皮治疗银屑病的潜在调控靶点。基因富集分析结果显示白鲜皮主要有效成分调控银屑病主要通过免疫与炎症相关通路。CytoHubba插件筛选出10个关键基因,主要受槲皮素、木犀草素、汉黄芩素调控。汉黄芩素进一步被作为研究对象,处理以1μg/mL脂多糖(LPS)诱导细胞4 h构建的HaCaT细胞银屑病样模型,汉黄芩素对HaCaT细胞的IC50为415μmol/L。以汉黄芩素10%IC50干预模型细胞,结果显示其可以显著提高PPARG mRNA表达,降低ESR1、HSP90AA1、IL-6、NF-κB、PTGS2、TNF-α、TP53 mRNA表达(P<0.005)。【结论】白鲜皮主要有效成分汉黄芩素可能通过调控TNF-α、IL-6、NF-κB、TP53、HSP90AA1、ESR1、PTGS2、PPARG mRNA表达,降低炎性水平,从而治疗银屑病。

白鲜皮主要药效成分白鲜碱、黄柏酮、梣酮的抗皮炎作用比较及机制研究

目的:比较中药白鲜皮的3种主要活性成分白鲜碱、黄柏酮、梣酮在特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)治疗中的作用并探讨其机制。方法:利用2,4⁃二硝基氟苯(2,4⁃dinitrofluorobenzene,DNFB)构建小鼠皮炎模型,观察白鲜皮醇提物、白鲜碱、黄柏酮、梣酮、地塞米松对AD小鼠引起的慢性瘙痒的作用;采用皮损评分评估小鼠皮损严重程度。苏木精⁃伊红(hematoxy⁃lin⁃eosin,HE)和甲苯胺蓝染色评估小鼠表皮厚度和肥大细胞数目。酶联免疫吸附试验(enzyme⁃linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠皮损组织中白介素(interleukin,IL)⁃4、IL⁃31、IL⁃10水平;Western blot检测Janus激酶(janus kinase,JAK)1、p⁃JAK1、信号转导和转录激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)3、p⁃STAT3、STAT6、p⁃STAT6的蛋白水平。结果:AD小鼠引起的慢性瘙痒能明显被白鲜皮醇提物抑制。与模型组相比,白鲜皮的3种主要活性成分中:白鲜碱和梣酮能明显抑制AD小鼠引起的慢性瘙痒,改善皮损症状和炎症细胞浸润,下调IL⁃4、IL⁃31水平,上调IL⁃10水平,并抑制JAK1⁃STAT3/STAT6信号通路,但黄柏酮组与模型组比较差异无统计学意义。结论:白鲜碱和梣酮可能是白鲜皮发挥抗皮炎作用的主要活性成分。

中药白鲜皮的本草考证

[目的]研究本草中记载的中药白鲜皮的基源植物,为深入研究中药白鲜皮提供文献依据。[方法]查阅历代本草书籍,从名称、基源、产地变迁、药用部位、采收时期、功效等进行考证。[结果]历代本草中记载的白鲜可确定为芸香科植物白鲜,但《本草图经》中“江宁府白鲜”附图花序更为密集,《植物名实图考》中“白鲜皮”为一种木本植物;古代本草中对白鲜采收期有所分歧,现代本草认为应“春秋二季采挖,南方于立夏后采挖”。[结论]《本草图经》中“江宁府白鲜”与豆科植物刺果甘草极为相似,应为误用品或误传;《植物名实图考》中“白鲜皮”依据其描述和附图,与五加科植物楤木极为相似,应为误用品或代用品;其产地古时多在河北、四川、山东等地,而今多产于东北地区。

白鲜皮“异病同治”皮炎、湿疹和银屑病的作用机制预测

目的通过网络药理学和分子对接技术分析白鲜皮“异病同治”皮炎、湿疹、银屑病的分子靶点及其相关作用机理。方法运用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)检索并筛选白鲜皮的主要活性成分,并运用STP数据库预测有效成分的作用靶点。借助TTD、OMIM、DrugBank、GeneCards、DisGeNET数据库获取治疗皮炎、湿疹、银屑病的有关靶点,借助Venny软件获取皮炎、湿疹、银屑病的相同靶点以及与白鲜皮有效成分作用靶点的交集靶点。利用Cytoscape绘制网络图,STRING数据库构建白鲜皮治疗皮炎、湿疹、银屑病的相同靶基因的蛋白互作网络图。运用Metascape数据库进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并运用R语言进行可视化处理。通过Discovery Studio 2019 Client、AutoDock Tools、PyMOL进行分子对接和可视化。结果经筛选白鲜皮有效成分15个,与皮炎、湿疹、银屑病相同靶点的交集靶点共64个。白鲜皮活性成分治疗皮炎、湿疹、银屑病的核心靶点依次为肿瘤坏死因子(TNF)、Toll样受体4(TLR4)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、信号转导和转录激活因子1(STAT1)等。核心通路为高级糖基化终末产物-受体(AGE-RAGE)、白细胞介素17(IL-17)、酪氨酸激酶-信号传导及转录活化因子(JAK-STAT)信号通路等。结论白鲜皮可能通过IL-17、JAK-STAT、AGE-RAGE等多个通路作用于TNF、TLR4、VEGFA等多个靶点,从而在皮炎、湿疹、银屑病中起到抗炎止痒的作用。

白鲜皮提取物的体外生物学活性研究

本次研究以白鲜皮为原料,比较不同提取环境下的提取效果,并重点考察了白鲜皮提取物的体外生物学活性。通过高效液相色谱分析,超声波提取工艺具有最优的提取效果。体外生物学活性研究显示,白鲜皮提取物具有较强的清除DPPH自由基、ABTS自由基和-OH自由基的能力,并且对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、霉菌、酵母菌有较强的抑制作用,同时还具有使透明质酸酶活性降低的能力。白鲜皮提取物具有抗氧化、抑菌、抗炎的功效,具备一定的市场开发价值。

白鲜皮水提物改善迟发型变态反应性肝损伤的作用机理

白鲜皮水提物能作用于2 ,4 ,6三硝基氯苯所致迟发型变态反应的效应相,有效地改善迟发型变态反应性肝损伤,在肝损伤12 h 分离的肝非实质细胞和肝细胞共培养体系中,白鲜皮水提物预处理肝非实质细胞明显地阻断了上清中谷丙转氨酶的释放,作用呈量效关系和时效关系,而预处理肝细胞则无影响。同样,白鲜皮水提物对Con A 引起的脾淋巴细胞增殖无抑制活性,诱导相给药对肝损伤亦无保护作用。

白藓皮对几种害虫的毒杀作用

利用天然植物去创制新型杀虫剂已成为目前农药研究的热点。本文研究发现 ,太白山区的白藓皮具有良好的杀虫活性 ,对蟋蟀、蚱蜢的死亡率达 10 0 % ,对三龄粘虫的拒食率为 87 8% ,死亡率为 83 3% ,这表明白藓皮有望成为新的植物杀虫剂。

白鲜的生物学与化学成分研究进展

中药白鲜皮为芸香科植物白鲜的干燥根皮,为中国重要的大宗药材之一,有着悠久的药用历史。近年来国内外对药用白鲜展开了多方面的深入研究。论述了白鲜原植物、地理分布、形态结构、种子特性以及组织培养等生物学特性以及化学成分挥发油、生物碱、柠檬苦素类、白鲜粗多糖等方面的研究现状。指出市场对白鲜皮需求量的增加、人工栽培鲜有开展及无序的滥采乱挖,导致白鲜野生资源日渐枯竭,并从增强认识与合理保护、综合开发利用、快速繁殖以及规范化栽培等方面作了总结,以期为白鲜植物资源的合理保护和可持续开发利用提供参考。

白鲜皮药材指纹图谱研究

目的 :采运用反相高效液相色谱法 ,研究并建立白鲜皮药材的指纹图谱。方法 :用Kromasil 1 0 0C1 8色谱柱 ,乙腈 水梯度洗脱 ;流速 1 0ml/min ;检测波长 2 2 8nm。结果 :运用梯度洗脱得到的色谱图各色谱峰分离较好 ,达到指纹图谱的要求。结论

白鲜皮的免疫药理学研究——Ⅰ.对细胞免疫和体液免疫的影响

对白鲜皮水提取物的免疫药理学特性进行了探讨,结果发现:对半抗原picryl chloride所致的接触性皮炎(PC-DTH)及颗粒抗原羊红细胞(SRBC)所致的足跖反应(SRBC-DTH),白鲜皮在各抗原攻击后给药有明显的抑制作用,但攻击前给药则未能抑制两DTH。白鲜皮还明显地抑制二甲苯所致的小鼠耳壳及鸡蛋清所致的小鼠足蹠炎症反应。此外,白鲜皮对于小鼠抗SRBC抗体的产生,包括对抗体产生细胞(PFC)数和血清溶血素水平均有明显的抑制作用。这些结果表明,白鲜皮对细胞免疫和体液免疫均有抑制作用,对DTH反应的作用表现为对DTH反应的效应相,其中包括炎症过程的抑制作用。

白鲜皮药材HPLC指纹图谱研究

目的建立白鲜皮药材的HPLC指纹图谱,为该药材的质量评价提供实验依据。方法对白鲜皮甲醇提取液采用HPLC分析,色谱条件为依利特Hypersil ODS2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-水梯度洗脱,检测波长228 nm,体积流量1.0 mL/min,室温。以白鲜碱为参照峰。结果 13批不同产地的白鲜皮药材检出11个共有峰,不同批次药材指纹图谱相似度在0.9以上,但相对峰面积有明显差异。结论该方法准确可靠,重复性好,可为白鲜皮药材及其制剂质量控制提供帮助。