双香豆素对猪繁殖与呼吸综合征病毒的体外抑制作用

为探究双香豆素(DIC)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖的影响,本研究首先通过CCK-8法检测DIC对Marc-145细胞的细胞毒性,并计算其半数毒性浓度(CC_(50));进而使用荧光定量PCR和Western blot检测DIC对PRRSV增殖水平的影响;通过不同给药方式处理细胞进一步探究DIC针对的PRRSV增殖阶段。结果表明,DIC对Marc-145细胞的细胞毒性CC_(50)为96.11μmol·L^(-1),并在浓度为25μmol·L^(-1)时即表现出明显的抗PRRSV活性;DIC可以呈剂量依赖性地抑制不同时间和不同滴度的PRRSV增殖。DIC对PRRSV感染周期的吸附、入胞和释放阶段无影响,但是可明显抑制PRRSV的复制阶段。本研究证实DIC以较低浓度在Marc-145细胞中表现出明显的抗PRRSV活性,并主要针对PRRSV的复制阶段。本研究提示双香豆素具备开发成临床抗病毒药物或添加剂的潜力,为新的PRRSV抗病毒药物的研发提供理论依据。

化妆品中双香豆素和环香豆素的高效液相色谱二极管阵列检测器测定

建立了用高效液相色谱（HPLC）／二极管阵列检测器（DAD）测定化妆品中两种香豆素物质——双香豆素和环香豆素的方法。样品用乙腈-氢氧化钠溶液（0．1mol／L）（体积比9：1）的提取溶液超声提取，高效液相色谱DAD扫描检测，并在306nm波长进行分析。用保留时间结合二种香豆素的紫外光谱定性，外标法定量，并且采用液质联用（LC-MS／MS）确证。双香豆素的回收率为96％～105％，精密度RSD为0．51％～2．08％，定量下限为1ng；环香豆素的回收率为88％～104％，精密度RSD为0．51％～3．36％，定量下限为1ng。

双香豆素体外抗肿瘤活性筛选及相关机制初探

为初步探讨双香豆素抗肿瘤活性及相关机制,采用CCK-8法检测双香豆素对几种肿瘤细胞株生长的影响。以HepG2为研究对象,通过对几种生理生化指标的检测初步探讨其抗肿瘤的相关机制。结果显示,双香豆素对HepG2、Hccc-9810及MDA-MB-231细胞株的生长均呈剂量和时间依赖性的抑制作用,其中HepG2对双香豆素的敏感性最高(IC50=3.19±0.68μmol·L-1)。双香豆素可使HepG2细胞周期阻滞在S期,使Bcl-2蛋白的表达下调,cleaved caspase-9和Bax蛋白的表达升高。双香豆素可使HepG2细胞内还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量明显降低,丙二醛(malonaldehyde,MDA)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平明显升高。在低氧诱导下,双香豆素能使HepG2细胞中NAD(P)H醌氧化还原酶1[NAD(P)H quinone oxidoreductase 1,NQO1]、3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1,PDK1)及缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达量下调。上述结果表明,双香豆素可有效抑制HepG2细胞增殖,促进其周期阻滞及细胞凋亡;双香豆素可能通过抑制HepG2细胞中PDK1和NQO1的表达,导致HIF-1α下调、ROS聚集,从而产生细胞氧化应激促使HepG2细胞凋亡。