聚肌胞苷酸复合游泳诱导的慢性疲劳综合征模型小鼠行为学中品系及性别差异研究

目的比较ICR和C57BL/6J两个品系小鼠建立的慢性疲劳综合征模型行为学中品系及性别的差异,为慢性疲劳综合征模型动物的选择提供实验依据。方法ICR和C57BL/6J小鼠,雌雄各半,通过每隔3 d腹腔注射聚肌胞苷酸(polyinosinic-polycytidylic acid,Poly I:C)复合每天游泳,连续造模15 d,造模期间测定小鼠体重、进食量并进行疲劳量表评分,造模结束后进行行为学测定,包括力竭游泳、悬尾、机械痛阈和高架十字迷宫。结果与对照组相比,两种品系模型组小鼠力竭游泳时间均显著缩短(P<0.05、P<0.01),悬尾不动时间显著延长(P<0.05、P<0.01),机械痛阈值显著降低(P<0.05、P<0.01),两品系雄性模型鼠高架十字迷宫进入开放臂时间及次数显著降低(P<0.05、P<0.01),C57BL/6J雄性模型鼠体重显著降低(P<0.05、P<0.01),ICR雌性模型鼠体重显著降低(P<0.05)后有所升高。C57BL/6J对照组小鼠力竭游泳时间显著低于ICR对照组小鼠(P<0.01)。C57BL/6J模型组小鼠悬尾不动时间显著高于ICR模型组小鼠(P<0.01)。结论两品系小鼠在体重、疲劳程度及抑郁程度方面均有差异;同品系小鼠的雌性与雄性之间存在差异,雄性鼠焦虑程度重于雌性鼠。

江西省2005～2006年甲1亚型流感病毒株与疫苗株的HA1区差异分析

[目的]分析江西省2005～2006年分离的甲1亚型流感病毒株与疫苗推荐株HA1区的差异,以了解江西省流感病毒变异情况及WHO推荐疫苗株对人体的保护作用。[方法]采集监测医院和疑似流感疫情的流感样病例鼻咽拭子标本进行流感病毒分离,对分离到的甲1亚型流感病毒进行核酸的提取,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒基因后进行核苷酸序列测定,用DNAStar5.0、BioEdit(Version5.0)、Mage生物软件对测序结果进行分析处理,并与WHO推荐疫苗株进行比对。[结果]20株甲1亚型流感病毒HA1区域核苷酸序列长度均为960bp,未发现核苷酸的丢失和插入,平均点突变率为2.94%。2005年甲1亚型流感病毒分离株与2005年WHO北半球流感甲1亚型疫苗推荐株A/New caledonia/20/99(H1N1)HA1区相比较,不同毒株氨基酸的同源性是96.9%～98.1%,替换数在6～10个之间,涉及2～3个抗原决定簇,抗原决定簇区的氨基酸变异数平均为2.33。2006年甲1亚型流感病毒分离株与疫苗推荐株HA1区相比较,不同毒株氨基酸的同源性是95.3%～97.2%,、替换数在9～15个之间,涉及4个抗原决定簇,抗原决定簇区的氨基酸变异数平均为6.0个。2006年我省甲1亚型流感病毒分离株与WHO疫苗推荐株之间在HA1区域的氨基酸差异以及抗原决定簇上氨基酸的差异,均显著大于2005年我省甲1亚型流感病毒分离株与WHO疫苗推荐株之间差异(P﹤0.0005)。[结论]2005年根据WHO疫苗推荐株生产的疫苗对该年度我省的甲1亚型流感总体上有较好的预防效果,而2006年根据WHO疫苗推荐株生产的疫苗对我省该年度的甲1亚型流感预防效果不够理想。

日本乙型脑炎病毒强、弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-NS2A诱导小鼠CD4^+T细胞应答的研究

为了解日本乙型脑炎病毒(JEV)强、弱毒株非结构蛋白的免疫效果,笔者分析了JEV强、弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-2A真核表达的差异。通过观察JE减毒活疫苗(SA14-14-2株)和JEV贵州分离株(GZ株)分别在BHK-21细胞上出现的CPE,并收集强、弱毒株的细胞悬液,提取总RNA,分别设计6对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-2A的编码基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-NS1r、pcDNA3.1(+)-NS2Ar、pcDNA3.1(+)-NS1-2Ar、pcDNA3.1(+)-NS1q、pcDNA3.1(+)-NS2Aq和pcDNA3.1(+)-NS1-2Aq,将构建成功的6种真核表达质粒免疫健康小鼠,最后采集小鼠的血液和组织分别进行JEV抗体检测和细胞免疫水平检测。研究结果显示:JEV GZ强毒株与JEV SA14-14-2弱毒株能在BHK21细胞上增殖并产生CPE现象;构建的6种真核表达质粒免疫小鼠后经血常规和T淋巴亚群检测可以极显著或显著增加CD4+和CD8+细胞的含量。表明JEV强毒株非结构蛋白所诱导的细胞免疫略优于弱毒株非结构蛋白诱导的细胞免疫,但差异不明显。本研究结果可为日本乙型脑炎病毒的病原基础研究提供参考。

豆科植物上分离的黄瓜花叶病毒（CMV）五个分离物的比较研究

从豌豆、扁豆、菜豆和赤豆分离到五个ＣＭＶ分离物，除寄主反应及核酸组分外，５个分离物在体外抗性、蚜虫传毒、提纯病毒粒体形态和稳定性、衣壳蛋白分子过和病毒粒体迁移率等方面无明显差异．在琼脂糖双扩散试验中五个分离物与ＣＭＶ抗血清形成的沉淀线相互融合，在Ａ蛋白双抗体夹心ＥＬＢＡ测定中，也无明显差异。根据在四种豆科植物上的症状反应，五个分离物可归为两个型：Ⅰ型在豌豆、蚕豆、菜豆和豇豆上产生局部枯斑症状；Ⅱ型在这四种植物上产生系统症状。五个分离物中，ＣＭＶＰ＿２含有五个枝酸组分，其它分离物为四个组分，即ＣＭＶＰ＿２可能含有卫星ＲＮＡ．

猪瘟病毒流行株与疫苗株主要抗原编码基因差异研究

从全国 7个省市 1 2 0 0多份可疑猪瘟病料中分离出 9个猪瘟病毒 ( HCV)野毒株 ,编号分别为 HCV- 0 1～ 0 9。将 9株野毒分别通过 PK15细胞传 6代 ,测其毒价 ,并提纯做电镜观察 ,结果表明 :毒价范围在 1 0 -2～ 1 0 -7TCID50 ,电镜观察均可清晰地见到直径为 2 5～ 70 nm,略呈圆形的病毒颗粒 ,具有较完整的囊膜和纤突结构。从 9株野毒中选取 5株经猪瘟阴性猪各传 3～ 4代 ,测其毒力、病原性、致死性 ,结果表明 :各毒株在传代中其上述生物学特性上有变化和差别。用猪瘟兔化弱毒疫苗分别对这 5株野毒做免疫保护相关性试验 ,结果证明 :攻毒后的疫苗接种猪 1 0 0 %保护 ,而攻毒对照猪 1 0 0 %死亡 ,且对照猪在攻毒 1周后便出现猪瘟野毒感染 ,而免疫猪在整个观察期均未见到野毒感染。用不同剂量的猪瘟兔化弱毒细胞活疫苗分别接种不同妊娠期的怀孕母猪 ,从母猪所产 0～ 1 4日仔猪体内均未分离到猪瘟兔化弱毒 ,表明猪瘟兔化弱毒不通过胎盘垂直感染仔猪。将猪瘟野毒株、石门系强毒株、兔化弱毒株及 1 982年分离的郑州野毒等毒株进行主要抗原编码基因差异研究 ,结果表明 :猪瘟病毒可分为 2个基因组 6个基因亚组 ,HCV- 0 2、0 3、0 6、0 7等 4个野毒株与国内的 C株、石门强毒株、国外的 C株、日本 GPE株、ALD株、意?

O型口蹄疫病毒不同宿主适应毒株P1和3A基因的差异分析

为了明确O型口蹄疫病毒不同宿主适应毒株P1和3A基因位点的差异性,研究其遗传变异趋势,找出不同宿主适应毒株在P1和3A基因水平上位点的变异情况,将O型口蹄疫病毒O/XJ/10-11株分别接种于牛、乳鼠、猪及BHK-21细胞,获得相应的宿主适应毒株,提取RNA,反转录并扩增P1和3A基因,目的片段产物经琼脂糖凝胶电泳回收,并将其克隆到pMD19-T载体上,筛选阳性菌落,测序并分析其基因序列。结果表明:牛、乳鼠、猪、BHK-21细胞四种宿主适应毒株,核苷酸和氨基酸序列均未发生缺失,主要抗原位点稳定;P1基因发生了部分变异,变异程度依次为VP1、VP2>VP3>VP4,VP4基因最为保守;3A基因较稳定,变异较少;不同宿主适应毒株的变异程度依次如下:猪适应毒株>BHK-21细胞适应毒株>牛适应毒株>鼠适应毒株。O型口蹄疫病毒在不同宿主传代过程中造成VP1基因的变异,但主要抗原位点稳定;VP2基因的变异均位于抗原表位上;鼠适应毒株作为口蹄疫原始毒种的保存更为有利。

1988-2005年甲3亚型流感流行株与疫苗株的HA1区差异探讨

目的从基因层面探讨18年来我国及欧美国家甲3亚型流感流行株与当时WHO疫苗推荐株之间的差异。方法收集1988-2005年间我国以及欧美国家的甲3亚型流感流行株与疫苗株的血凝素重链(HA1)区域的氨基酸序列,用BioEdit生物软件进行比较,分析其与当时疫苗推荐株在HA1以及HA1抗原决定簇区域的氨基酸差异。结果在HA1区以及HA1区抗原决定簇位点,我国甲3亚型流感流行株与当年疫苗株之间的差异,均大于它与下一轮疫苗株之间的差异,且已达到十分显著的程度(P<0．01)。而欧美国家甲3亚型流感流行株与当年疫苗株之间的差异,虽然稍大于它与下一轮疫苗株之间的差异,但尚不显著(P>0．05)。此外,使用多年的疫苗株,无论在我国还是欧美,随着疫苗使用年数的增加,流行株与疫苗株之间的差异不断增大。结论WHO推荐的甲3亚型疫苗株与我国甲3亚型流行株之间,从基因层面进行分析,存在明显的滞后现象。

中国南方地区乙型流感流行株与疫苗株的HA1区氨基酸差异研究

目的探讨1991—2007年中国南方地区乙型流感流行株与WHO疫苗推荐株在HA1区的氨基酸差异。方法收集近17年间中国南方地区乙型流感流行株与WHO疫苗推荐株的血凝素重链(HA1)区的氨基酸序列,用BioEdit生物软件进行比较,分析两者之间在HAl及其抗原决定簇位点的氨基酸差异。结果在这17年中,有近1/3的年份,中国南方地区流行株与疫苗株之间的谱系不符;而在谱系相同的状况下,WHO疫苗推荐株与前两年流行株的符合性较与当时流行株的符合性更好(P<0.05)。从系统进化树也可看出这一趋势。结论 WHO推荐的乙型流感疫苗株与中国南方地区乙型流感流行株之间,存在明显的滞后现象,中国应当推出适合于自己的流感疫苗株。

贵州省狂犬病病毒流行毒株与疫苗毒株糖蛋白基因差异研究

目的分析贵州省狂犬病病毒流行毒株与疫苗毒株的糖蛋白基因（G基因）差异，为狂犬病疫苗研制及有效防控措施的制定提供科学依据。方法以RT-PCR扩增贵州省近几年人和犬狂犬病病毒阳性脑组织标本G基因序列，对扩增产物进行序列测定后采用生物信息学软件对序列与疫苗株G基因序列进行比较分析。结果贵州省狂犬病病毒阳性标本经RT-PCR扩增、测序与拼接后得到8株狂犬病病毒G基因全长序列，与我国常用狂犬病疫苗毒株在核苷酸和推导的氨基酸水平上的同源性分别为82．0％～94．1％和87．6％-97．5％，与人用疫苗株中的CTN株G基因核苷酸和氨基酸序列同源性最高（分别为87．0％～94．1％和93．7．％～97．5％），而在兽用疫苗株中与Flury株的核苷酸和氨基酸同源性最高（分别为83．9％～84．6％和91．1％～93．0％）。在所测定序列中以来自贵州省2005年的GZ09与人用疫苗毒株CTN和动物用疫苗株Flury株G同源性最高，而以2010年的GZ30与人用疫苗毒株CTN和动物用疫苗株Flury株G基因同源性最低。系统进化树分析显示，本次所测定的序列和9株疫苗株与狂犬病病毒基因1—7型中的基因1型代表毒株聚类在同一分支，与疫苗毒株中的CTN亲缘进化关系最近，而与其他疫苗株相对较远，所测定序列中以2005年的GZ09与CTN疫苗株同源性最近，而其他序列与CTN毒株的亲缘进化关系相对较远。结论本研究从狂犬病病毒G基因水平证明贵州省狂犬病病毒流行毒株与常用的疫苗株同属狂犬病病毒基因1型，与人用疫苗株中的CTN毒株及兽用疫苗株中的Flury株差异最小，且随着时间的推移贵州省狂犬病病毒流行毒株与疫苗毒株G基因的差异越来越大，该研究结果将为狂犬病疫苗研制及有效防控措施的制定提供科学依据。

单纯疱疹病毒Ⅰ型基因修饰突变株M3与野生型毒株Mckrae感染特征的比较分析

目的通过系统比较观察一个利用CRISPR/Cas9系统构建的单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus,HSV-1)基因修饰减毒株M3和野生型毒株Mckrae感染BALB/c小鼠的感染特征,进一步确定M3毒株的减毒表型。方法利用基因修饰的减毒株M3和野生型毒株Mckrae,经角膜、滴鼻、肌内注射途径感染BALB/c小鼠,模拟急性感染模式;经足垫途径感染BALB/c小鼠,模拟慢性感染模式,观察感染小鼠的相应病理学指征。结果实验小鼠的观察结果表明,虽然Mckrae经不同途径感染的小鼠存活率存在差异,但这些小鼠所出现的弓背、倒毛、单侧眼失明、单侧后肢瘫痪等临床特征和一定的死亡比例等现象,在M3减毒株感染的小鼠中均未出现;q-PCR检测表明,M3不同途径感染小鼠的心、脑、肺、肾、肝组织病毒载量的增殖趋势均显著低于Mckrae感染的小鼠;组织病理学检查结果提示,Mckrae感染小鼠的肝、肺组织出现的病理损伤程度明显强于M3减毒株感染的小鼠。免疫组织化学结果提示,M3减毒株感染小鼠的肝组织病毒抗原表达和Mckrae感染小鼠存在明显差异。结论 HSV-1 M3基因突变株相较于Mckrae野生型毒株表现了明显的临床病理意义上的减毒表型。