Micro RNAs与急性心肌梗死关系的研究进展

急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)是冠状动脉疾病最严重的表现,其引起的心肌组织损伤可促进心力衰竭的发展。尽管近些年由于生活方式的改变、治疗方式(如经皮冠状动脉介入治疗)的发展使AMI的预后得到了改善,但是AMI依旧每年危害着全球700多万人的身心健康,AMI仍然是世界范围内高发病率和高死亡率的主要疾病之一[1]。微小RNA(micro RNAs,miRNAs)是在20世纪90年代被发现的,mi RNAs的研究已经迅速发展成为一个成熟而广阔的领域。mi RNAs存在于几乎所有类型的细胞和细胞的病理生理活动中,包括与心血管系统相关的细胞。本文将mi RNAs对AMI病理生理进程的影响进行综述,希望为临床治疗提供新思路。

血脂剩留风险、microRNA与发生ISR的相关性研究进展

经皮冠状动脉介入治疗术后冠状动脉支架内再狭窄是目前亟待解决的临床问题,严重时甚至危及患者生命。PCI术后发生ISR的机制尚不明确,因此,探究PCI后ISR发生的风险尤为重要。目前研究表明,血脂剩留风险、microRNA参与了PCI术后内皮损伤、炎症反应、血管平滑肌细胞过度增殖和内膜增生以及新的动脉粥样硬化形成过程,对ISR起到积极作用。本文就心血管剩留风险、microRNA与ISR相关性的研究进展进行分析、综述,以期对临床研究冠状动脉支架内再狭窄提供理论依据和指导意义。

MicroRNA-33b通过靶向调控SALL4的表达抑制肝细胞癌细胞增殖

目的:探索微小RNA-33b(micro RNA-33b,mi R-33b)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及调控HCC细胞增殖的相关分子机制。方法:收集配对的HCC及癌旁组织32对,分别采用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测人类婆罗双树样基因4(Sal-like 4,SALL4)RNA和蛋白表达,MTT实验检测HCC细胞增殖,萤光素酶报告基因检测验证mi R-33b与SALL4基因的靶点关系。结果:Mi R-33b在HCC组织中的表达显著低于癌旁组织(P<0.001)。过表达mi R-33b能显著降低HCC LH86细胞的增殖。SALL4是mi R-33b的靶基因,其蛋白表达被mi R-33b负调控。过表达SALL4能逆转mi R-33b对LH86细胞增殖的抑制作用。SALL4在HCC组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0.001)。结论:Mi R-33b对HCC细胞增殖的抑制作用是通过负调控SALL4的表达而实现。

microRNA let-7a对人晶状体上皮细胞凋亡的调控及其在白内障中的作用

目的探讨micro RNA let-7a对人晶状体上皮细胞凋亡的调控作用及其在白内障中的作用。方法利用Real time q-PCR方法,检测年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜和正常人眼晶状体前囊膜、人晶状体上皮细胞凋亡模型和正常人晶状体上皮细胞系let-7a的表达情况;利用Lipofectamine 2000瞬时转染let-7a mimic和let-7a inhibitor,分别上调和下调人晶状体上皮细胞中let-7a的表达,并利用Real time q-PCR方法验证转染效率,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组let-7a的表达显著低于正常对照组;人晶状体上皮细胞凋亡模型组let-7a的表达显著低于正常对照组;let-7a mimic转染组let-7a的表达显著高于对照组,let-7a inhibitor转染组let-7a的表达显著低于对照组;let-7a mimic转染组细胞凋亡率显著低于对照组,let-7a inhibitor转染组细胞凋亡率显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 micro RNA let-7a能够调控人晶状体上皮细胞凋亡,从而在白内障发病过程中发挥重要作用,micro RNA let-7a可能成为白内障非手术治疗的新靶点。

脊索瘤中microRNA的差异性表达及其RNA编辑

目的 :检测脊索瘤组织中micro RNA(mi RNA)的差异性表达情况,探讨其RNA编辑。方法 :使用RTq PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction)技术检测骶骨脊索瘤组织11种候选mi RNA的表达水平,将其与髓核组织中的表达水平进行比较,对表达异常的mi RNA前体(pri-mi RNAs)的DNA和c DNA序列进行对比,检测是否存在RNA编辑。使用蛋白印迹法(Western blot)检测脊索瘤组织中RNA编辑的关键酶RNA腺苷脱氨酶(adenosine deaminase acting on RNA,ADARs)的表达。构建ADAR的表达载体,同时构建ERBB2和HOXA1的3′-非翻译区报告载体并转染mi RNA模拟物和抑制物,将其和ADAR的表达载体共转染至人胚肾细胞293T(HEK293T细胞),用q RT-PCR检测mi RNA的表达水平,并通过荧光素酶报告基因活性分析法对已测得异常表达的mi RNA的靶基因ERBB2和HOXA1进行活性分析,检测ADAR与测得异常表达的mi RNA的靶基因的关系。结果:与髓核组织相比,脊索瘤组织中mi R-10a和mi R-125a的相对表达程度明显下调(P<0.05)。脊索瘤组织中mi R-10a和mi R-125a的前体c DNA序列中出现了腺苷酸向鸟苷酸(A-G)突变,而在髓核组织中mi R-10a和mi R-125a前体的c DNA序列中无此改变,mi R-10a和mi R-125a在成熟过程中出现了A-I RNA编辑。4组脊索瘤组织中有3组存在ADAR1过度表达,2组存在ADAR2过度表达。转染了mi RNA抑制物的HEK293T细胞中ADAR1表达出现上调,而mi R-10a和mi R-125a的表达出现下调,mi R-10a的靶基因ERBB2和mi R-125a的靶基因HOXA1的荧光素酶活性显著增高;相反,转染了mi RNA模拟物的HEK293T细胞中ADAR1表达出现下调,而mi R-10a和mi R-125a的表达出现上调,ERBB2和HOXA1的荧光素酶活性显著降低。结论:ADAR1的过度表达可能通过介导A-I RNA编辑影响mi R-10a和mi R-125a的成熟和表达,参与脊索瘤发生中的细胞异常增殖调控。

MicroRNA Let-7a在小鼠变应性鼻炎中的作用

目的探讨micro RNA Let-7a在小鼠变应性鼻炎中的作用。方法选取32只8周龄成熟雌性C57BL/6小鼠随机分成4组:Let-7a组、Let-7a对照组、OVA组和PBS组,每组8只。Let-7a组、Let-7a对照组及OVA组采用卵清蛋白(OVA)致敏激发,建立小鼠变应性鼻炎模型。Let-7a组于第1、2、3次激发前半小时给予Let-7a和脂质体2000混合物,而Let-7a对照组给予Let-7a对照和脂质体2000混合物。PBS组以PBS代替OVA。造模成功后计数小鼠搔鼻次数、鼻腔灌洗液中炎性细胞情况,取小鼠鼻腔黏膜固定后染色评估鼻黏膜杯状细胞增生病理学变化,检测小鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-13及IFN-γ水平。结果与Let-7a对照组小鼠相比,Let-7a组小鼠搔鼻次数明显增加,鼻腔黏膜嗜酸性粒细胞浸润及杯状细胞增生显著,具有明显统计学差异(P<0.05),鼻黏膜中IL-4及IL-13显著增高(P<0.05),而IFN-γ无明显差异(P>0.05)。结论 Let-7a促进变应性鼻炎的发生及发展。

MicroRNA在强直性脊柱炎成骨、破骨机制中的作用

炎性骨破坏和新骨形成是强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)的典型病理改变,AS早期以炎症为主,晚期出现异位骨化和骨破坏,异位骨化和骨破坏两种矛盾的表现反映了强直性脊柱炎患者成骨与破骨过程之间的动态平衡被打破。其发病机制尚不完全清楚,目前研究认为,AS复杂的新骨形成机制与Wnt/β-catenin信号通路及BMP/Smads通路密切相关,而破骨细胞则在骨破坏过程中起重要作用,RANKL/RANK/OPG系统中的细胞因子是调控破骨细胞分化成熟的关键因子。Micro RNA可调节成骨细胞、软骨细胞和破骨细胞的分化与功能,是骨形成、骨吸收、骨重塑和修复过程中的关键调节因子。研究MicroRNA在强直性脊柱炎成骨、破骨机制中的作用,可为AS的诊断和治疗提供新的依据。

外泌体源性microRNA在疾病诊疗中的研究进展

外泌体是一种纳米级别的生物膜结构,由机体的多种细胞分泌,广泛分布于唾液、血浆、乳汁等体液中。外泌体中有蛋白质、m RNA、microRNA、细胞因子、转录因子受体等多种生物活性物质。microRNA是短链非编码RNA,在转录后水平调节基因的表达,广泛参与个体发育、细胞增殖凋亡等生命活动。外泌体源性microRNA具有生物学特性和靶向特异性,不仅可作为肿瘤、神经退行性病变、重大精神疾病的分子诊断标志物,甚至有潜力成为上述疾病的新治疗靶点。

糖尿病心肌病患者血清差异表达microRNA及作用的研究

目的筛选糖尿病心肌病患者血清差异表达的micro RNA(mi RNA),明确mi R-186-5p和mi R-516a-5p在DCM发生发展中的作用和机制。方法选择30例DCM患者为实验组,60例年龄相当的身体健康者为正常对照组,分别从两组随机选取3例作为研究对象行micro RNA芯片初筛差异表达mi RNA,然后荧光定量q PCR验证这些mi RNA的差异表达;在高糖诱导人AC16心肌细胞损伤模型中,mi R-186-5p和mi R-516-5p的mimics和inhibitors分别干预,观察对高糖引起的心肌细胞毒性的影响。结果 micro RNA芯片检测发现,糖尿病心肌病患者血清有51个差异表达的mi RNA,经荧光定量q PCR验证为mi R-186-5p、mi R-516a-5p等8个差异表达mi RNA;显著高表达的mi R-516-5p和明显低表达的mi R-186-5p介导了高糖所致心肌细胞毒性损伤。结论糖尿病心肌病患者血清mi RNA表达谱发生改变,有8个差异表达mi RNA,mi R-516a-5p和mi R-186-5p可能参与糖尿病心肌病的心肌损伤发病过程。

MicroRNA-146a与风湿性疾病

MicroRNAs（miRNAs）是一类短小（20～24nt）的非编码RNA,通过对基因表达的转录后调节参与很多生物学过程。越来越多的研究证明,miRNAs尤其miRNA-146a在免疫和自身免疫中发挥着重要作用。本文将miRNA-146a在风湿性疾病中的生物学功能及研究进展作一综述。

胆固醇代谢相关蛋白及相关特异microRNAs在胆固醇型胆囊结石患者血清中的表达及意义

目的探讨胆固醇型胆囊结石患者和健康对照人群血清中胆固醇代谢相关蛋白,以及可能靶向ABCA1的相关micro RNAs(mi RNAs)表达差异及意义。方法选取60例胆固醇型胆囊结石患者(结石组)和60例健康对照人群(非结石组)的血清样本,采用Western blot检测胆固醇代谢相关蛋白(SREBP-2、FXR、LXR、ABCA1、ABCB11)的表达,利用生物信息学软件预测可能靶向调控ABCA1的相关mi RNAs,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)对相关mi RNAs的表达进行检测。结果结石组血清中SREBP-2、FXR、LXR、ABCA1、ABCB11蛋白的表达量较非结石组降低(P<0.05),结石组血清中mi RNA-26a、mi RNA-144、mi RNA-758表达较非结石组升高(P<0.05)。结论胆固醇代谢相关蛋白差异性表达及可能靶向ABCA1的相关mi RNA在胆固醇型胆囊结石的发病过程中可能发挥极为重要的作用。

乳腺癌microRNA表达谱的初步研究

目的:探讨miRNA基因表达谱的筛选及其在乳腺癌发生发展中的作用。方法:收集8例患者的新鲜乳腺癌组织及配对癌旁组织,利用miRNA芯片对其进行实验分析,并采用realtime-PCR验证芯片结果的准确性,生物信息学分析其作用靶点。结果:通过SAM软件,相对癌周组织在乳腺癌组织中查出上调的miRNA基因3个,下调的miRNA基因23个。其中显著上调的为hsa-miR-155和hsa-miR-193b。显著下调的为hsa-miR-145,hsa-miR-381,hsa-miR-132,rno-miR-10b,hsa-miR-199b-5p,hsa-miR-100,hsa-miR-335,hsa-miR-497和hsa-miR-99a。实时定量验证芯片结果准确可靠,生物信息学发现不同miRNA对应的靶基因分别为FOXA1、HOXA1、SMAD7和PSTON等。结论:筛选得到乳腺癌miRNA的差异表达谱靶点非常广泛,涉及到细胞周期调控,转录调控等,可能在乳腺癌的发病机制中发挥潜在作用。

MicroRNA-145与肿瘤的关系及研究进展

随着人们对生命科学的认识不断加深,作为非编码RNA的重要代表micro RNA受到越来越多的青睐。人类多种肿瘤的发生发展及侵袭转移与micro RNAs（mi RNAs）存在着密切关系,mi RNAs可能成为一类新的致癌基因或抑癌基因,通过抑制靶m RNA翻译或诱导靶m RNA降解在转录后水平调控基因表达,参与肿瘤的发生、发展及侵袭转移。

MEF2C介导microRNA-214发挥抑制心肌细胞肥大的作用

目的:研究微小RNA-214(mi R-214)对心肌细胞肥大的调控作用及其可能的作用靶基因。方法:建立血管紧张素Ⅱ(angiotensin-Ⅱ,Ang-Ⅱ)诱导的C57BL/6乳小鼠心室肌细胞肥大模型;双萤光素酶报告基因实验检测mi R-214与潜在靶基因MEF2C 3’端非翻译区(3’UTR)的结合作用;实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western blot法分别检测MEF2C及肥厚标志物的m RNA和蛋白表达水平。结果:心肌肥厚标志物ANP、ACTA1和β-MHC,以及mi R-214的表达在Ang-II诱导肥大的小鼠心肌细胞中显著增强;双萤光素酶报告基因实验提示mi R-214与MEF2C 3’UTR相互作用,证实mi R-214可在转录水平抑制MEF2C的表达,MEF2C蛋白水平在肥大的心肌细胞中显著上调;过表达mi R-214及沉默MEF2C均能一致性地抑制Ang-Ⅱ诱导的心肌细胞中肥大标志物的表达。结论:MEF2C是mi R-214的靶基因,并介导了mi R-214发挥抑制心肌细胞肥大的作用。

特应性皮炎患者外周血microRNA-155和CD4^+ T细胞检测的临床意义

目的:研究特应性皮炎患者外周血mircoRNA-155表达量和CD4+T细胞百分率的变化特征,阐明mircoRNA-155定量检测和CD4+T细胞百分率检测的临床意义。方法:利用荧光定量PCR技术检测外周血中mircoRNA-155表达量,利用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群CD3+T细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞百分率。选择40例特应性皮炎患者、30例皮肤湿疹患者和30例健康对照组分别检测mircoRNA-155表达量和CD4+T细胞百分率,统计分析各组间的差异性。结果:特应性皮炎组mircoRNA-155相对表达量高于湿疹组和正常对照组(P<0.05)。特应性皮炎组CD4+T细胞百分率高于正常对照组和湿疹组(P<0.01及P<0.05)。结论:特应性皮炎患者外周血mircoRNA-155表达量明显上调,CD4+T细胞百分率升高。临床检测mircoRNA-155和CD4+T细胞具有重要临床意义。

结肠癌患者血清中microRNA-183及胸苷激酶1的表达及意义

目的检测结肠癌患者血清中mi RNA-183及胸苷激酶1(TK1)的表达并探讨其临床意义。方法收集结肠癌患者及健康体检者血清标本各52例,荧光定量PCR检测mi RNA-183表达,免疫印迹增强化学发光法检测TK1的表达,分析两者之间的相关性及与临床病理的关系。结果与正常对照组相比,结肠癌患者血清mi R-183的表达相对升高(P<0.01);中低分化腺癌者血清mi R-183的表达量高于高分化腺癌(P<0.01);Ⅲ~Ⅳ期结肠癌者血清中mi R-183的表达量高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.01),且在有淋巴结转移的患者中表达较高(P<0.01);受试者工作特征(ROC)曲线显示,以相对表达量1.15为临界点,血清mi R-183可能具有诊断结肠癌的价值,其敏感度为78.8%,特异度为67.3%,阳性预测值为78.9%,阴性预测值为70.2%。结肠癌患者血清中TK1的表达也较正常对照组升高,中低分化腺癌高于高分化腺癌(P<0.05),Ⅲ~Ⅳ期高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.01)。血清中mi R-183与TK1的表达呈正相关(rs=0.692,P<0.01)。结论血清中mi R-183及TK1可能是早期结肠癌的诊断标志物,并可用于判断肿瘤的恶性程度及预后。

microRNA-373过表达可促进乳腺癌侵袭转移

目的:探讨microRNA-373在乳腺癌组织中表达与侵袭转移的相关性。方法:建立乳腺癌细胞MCF-7裸鼠移植瘤模型,采用qRT-PCR法检测癌组织和癌旁组织中miRNA-373的表达。分别转染空白试剂、miR-373阴性对照物、miR-373拟似物、miR-373阻遏物至MCF-7细胞,采用荧光实时定量PCR法检测细胞内miRNA-373含量,采用Transwell小室法检测MCF-7细胞侵袭能力。结果:qRT-PCR检测显示,乳腺癌组织miRNA-373表达显著低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR检测显示,转染后BC组和NC组miRNA-373表达差异无统计学意义(P<0.05),MT组miRNA-373表达显著高于BC组、NC组和RT组(P<0.05),RT组miRNA-373表达显著低于BC组、NC组和MT组(P<0.05)。MT组穿膜细胞数显著低于BC组、NC组和RT组,RT组穿膜细胞数显著高于BC组、NC组和MT组,差异均有统计学意义(P<0.05);BC组和NC组穿膜细胞数相比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:乳腺癌MCF-7细胞的侵袭和迁移能力受miR-373调控,增强miRNA-373可降低MCF-7细胞侵袭和迁移能力,为乳腺癌治疗的新基因靶点药物的开发提供了思路。

KDR基因多态性的杰出有氧耐力表型与运动应激诱导的循环microRNA差异表达谱的关联研究

目的:分析KDR基因SNP/rs1870377的A/A基因型的杰出有氧耐力表型与训练诱导的循环mi RNA表达特征的关联。方法:试验对象为33名现役国家级耐力项目男性运动员和58名体育教育专业男性大学生(二级运动员),均为汉族。递增负荷法检测最大摄氧量、个体乳酸阈;mi RNAarray及q RT-PCR检测训练诱导的c-mi RNA表达谱,Taqman法解析KDR基因SNP/rs1870377基因型,分析优势基因型及其杰出耐力表型与训练诱导的c-mi RNA表达特征的关联。结果:A/A基因型的杰出耐力表型差异表达17条c-mi RNA,9条上调,8条下调;mi RNA同步调控AMPK、p53、PPAR、MAPK、m TOR等信号通路多个基因表达。结论:差异表达的mi RNA的调控作用同步上调AMPK-PGC-1α通路和p53通路功能,促进线粒体合成和有氧代谢能力,在A/A基因型上调VEGF通路活性增强心肌/骨骼肌供血条件下进一步提高有氧代谢供能效率,对杰出耐力表型的形成具有促进作用;mi RNA的调控作用与rs1870377的A/A基因型的杰出有氧耐力表型存在关联,二者可作为预测有氧耐力发展潜力的表观遗传学分子标记,联合应用于运动选材。

MicroRNA和动脉粥样硬化的关系

MicroRNA是一组生物进化过程中高度保守的非编码的小RNA,在转录后水平调节基因表达。研究显示MircoRNA在心血管系统中高度表达,在动脉粥样硬化中起重要的作用。MicroRNA126,MicroRNA221/222,Mi-croRNA92-a参与调节内皮细胞功能与血管生成,MicroRNA217促进内皮细胞的衰老,MicroRNA221/222,MicroR-NA34对内皮祖细胞有调节作用,MicroRNA145/143,MicroRNA221/222参与调节血管平滑肌细胞的表型转化,增殖和迁移。MicroRNA-125a-5p参与巨噬细胞对致动脉粥样硬化脂质的炎症应答。本文简要介绍近年有关MicroRNA与动脉粥样硬化关系研究的部分进展。

microRNA-133a拮抗苯肾上腺素诱导的小鼠心肌肥大

目的利用心肌细胞肥大体外模型研究mi R-133a抗心肌肥大的作用机制。方法构建mi R-133a腺病毒表达载体,导入293细胞并收获高表达mi R-133a的病毒;取12只出生1~3 d内的小鼠心脏,采用酶消化及梯度离心法获得心肌细胞,分为对照组和模型组,模型组加入苯肾上腺素（PE）诱导;将高表达mi R-133a的腺病毒感染模型组的心肌细胞,观察细胞面积的变化,RTPCR检测Acta1、Actc1、Actb、Myh6、Myh7、BNP基因的表达。结果模型组心肌细胞加入PE培养后,较对照组面积增大3倍以上,Acta1等基因表达显著增高;肥大后模型组的心肌细胞采用mi R-133a病毒感染后较未加入mi R-133a病毒的模型组的心肌细胞的面积缩小,Acta1等基因表达显著降低。结论 mi R-133a是心肌肥大的重要调节因子,有拮抗心肌肥大的作用。