DNATyper^(TM) 15试剂盒直接扩增检验纸质样本的研究

目的检验DNATyperTM15直接扩增系统的有效性。方法使用DNATyperTM15直接扩增系统对我国DNA数据库建库4种常见样本类型进行直接扩增检验。结果获得了血滤纸、公安部物证鉴定中心采血卡、博坤采血卡和FTA卡等样本类型的完整DNA分型。结论 DNATyperTM15直接扩增系统能够用于常见纸质样本的检验。

甜菜DAMD-PCR体系的建立及优化

为了建立甜菜DAMD扩增体系,以期利用DAMD引物应用于甜菜品种指纹图谱的构建及分子标记辅助育种。本实验利用单因素变量的方法对甜菜DAMD体系进行优化。同时选用12个甜菜品种,利用优化的体系对25条DAMD引物进行扩增。获得甜菜的最适DAMD体系:总体积为20μL,包含模板DNA 10~80 ng、0.75 U的DNA聚合酶、0.2μL的d NTPs(2.5 mmol/L each)以及2.0μL的引物(10μmol/L)。同时25条引物均扩增出了清晰条带,除了个别引物多态性较差外,其余引物多态性都非常的丰富,其中引物62H(-)就可以把实验中用到的12个甜菜品种全部区分开。由此可见,DAMD引物的扩增效率很高,并且扩增结果稳定,条带清晰,非常适合甜菜品种指纹图谱的构建及遗传多样性分析。

单链扩增复性法定向克隆蛇毒C型凝集素类蛋白基因

为克隆尖吻蝮蛇C型凝集素类蛋白基因至表达载体pBV2 2 0 ,在该载体的多克隆位点上选择适当的酶切位点 ,设计PCR引物 :在目的基因上、下游引物的 5′ 端分别加上对应于载体的粘性末端序列 ,建立两个单独反应体系 ,每个反应体系中只加入一种引物 ,用PfuDNA聚合酶催化模板DNA单链扩增 ;将所得的两种单链产物在适当条件下进行复性后直接与经过酶切的载体DNA连接 ,并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 ,获得足够数量的转化子 .经PCR鉴定单菌落中有目标DNA片段插入 ,测序表明克隆连接正确 .该方法以其简捷性和有效性 。

应用水稻叶片直接PCR扩增的方法

本研究以新鲜和冷冻的水稻幼苗叶片为材料,探索水稻叶片直接作为模板进行PCR扩增的方法。结果表明,与对照SDS法提取的DNA相比,应用新鲜或冷冻的1~2 mm2水稻叶片直接作为模板在缓冲液为10 mmol/L KCl,2.5 mmol/L Mg Cl2,25 mmol/L(NH4)2SO4,40 mmol/L Tris-HCl(p H 9.0),0.8%PCR增强剂的反应体系中扩增,PCR扩增效果无明显差异;研究结果表明,该方法省去DNA体外提取过程,节约成本,操作简便,可以直接利用水稻叶片作为DNA模板进行PCR扩增。

荒漠植物PCR模板3种制备方法的初步研究

采用2×CTAB法、NaOH法及直接PCR扩增法,以准噶尔无叶豆〔Erem osparton songoricum（L itv.）Vass.〕为例,对沙生植物PCR模板制备方法进行了比较研究。结果表明：2×CTAB法提取的DNA产量及质量较高,PCR扩增谱带稳定、清晰,但方法繁琐,单个样品处理时间长,耗时耗力;NaOH法制备模板DNA简单快速、经济高效,在1-2 h可提取10-20个样品,比常规方法快3-5倍,并可产生稳定、可靠、重复性好的PCR扩增谱带;直接扩增法是一种更加快速、简便、廉价的制备方法,适宜制备大批量的PCR模板。研究结果对其他荒漠植物,尤其是叶片极端退化或珍稀濒危植物的PCR模板制备具有指导意义。

扩增Y染色体α类卫星序列鉴定胎儿性别

该文介绍用2组寡核苷酸引物X_1,X_2和Y_1,Y_2分别扩增人类X染色体和Y染色体的α类卫星DNA重复序列来鉴定胎儿性别。PCR扩增产生的Y染色体特异DNA片段可进一步用限制酶Dde Ⅰ和Hinf Ⅰ消化来分析鉴定。本方法灵敏而准确,作者应用此法对2例DMD高危胎儿进行了性别鉴定。