淋病双球菌DIF染色和酶染色观察

利用多株淋球菌作抗原免疫动物，建立了直接免疫荧光和直接酶标染色检测淋病双球菌方法。并与革兰染色和淋菌培养进行对照。结果：急性淋病１６例，革兰染色和淋菌培养阳性率分别为９３．７６％和１００％，ＤＩＦ和酶标染色阳性率均为１００％。慢性淋病１０例，ＤＩＰ和酶标染色阳性率均为７０％，革兰染色和淋菌培养阳性率分别为４０％和５１．１４％。作者认为直接免疫荧光和酶标法较能避免一般菌种不断变异的影响，可获得较为特异、能提高男性慢性及女性淋病患者，特别是无症状带菌者的淋菌检出率，而且诊断快速，方法简便。

PCR 与 DIFA 检测沙眼衣原体的比较研究

用所建立的沙眼衣原体质粒引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测１１６例泌尿生殖道沙眼衣原体，并与直接免疫荧光法（ＤＩＦＡ）进行比较。结果ＰＣＲ阳性３８例，ＤＩＦＡ阳性的３２例中有３１例ＰＣＲ阳性。ＰＣＲ敏感性为９６．９％，特异性为９１．７％。ＰＣＲ阳性者于治疗结束１～２周后复诊２１例，其中４例ＰＣＲ仍然阳性。结果显示，ＰＣＲ可快速、敏感、特异地检测泌尿生殖道沙眼衣原体ＤＮＡ，然而对治疗后短期内复诊患者，似乎不宜仅以ＰＣＲ阳性结果作为重复治疗的依据。

直接免疫荧光技术联合组织病理及血清抗体检测应用于黏膜类天疱疮的诊断准确性探究

目的探讨在组织病理学及血清特异性抗体检测基础上,联合直接免疫荧光技术(DIF)对黏膜类天疱疮(MMP)诊断效能的影响。方法纳入MMP患者29例,对照组29例,切取活检组织分别进行苏木精-伊红(HE)及DIF染色,对仅使用组织病理学及血清特异性抗体检测,和联合使用DIF后两种诊断方法进行诊断效能评价,分析多种因素对组织病理学及DIF诊断准确性的影响。结果联合使用DIF后可以提高MMP的诊断敏感度、阴性预测值、诊断符合率和受试者操作特征(ROC)曲线下面积。病程长短对DIF诊断准确性有显著影响,病程越长,DIF诊断准确性越高(P<0.05)。结论DIF联合组织病理学及血清抗体检测可以提高MMP的诊断准确性。对于疑难病例可能需要通过多次、多部位的活检提高DIF对MMP的诊断率。

犬冠状病毒Ⅱ毒株的分离鉴定及其基因的遗传进化分析

自长春市某宠物医院临床症状为肠胃炎的幼犬腹泻粪便中分离到1株病毒,该分离毒株在CRFK细胞上出现明显的细胞病变,经RT-PCR、序列测定和直接免疫荧光鉴定可知该分离毒株为犬冠状病毒株(Canine coronavirus,CCV),命名为CCV-CC01。利用PCR技术扩增CCV-CC01 S基因序列全长4273 bp,ORF-3序列1071 bp,N基因序列全长1202 bp。对分离毒株与其他冠状病毒毒株进行同源性比对并绘制系统进化树,结果显示该毒株与美国分离的CCV S378株亲缘关系最近,处于同一分支,与SARS-CoV-2亲缘关系较远,该毒株的出现可能与国际贸易相关。该毒株的分离鉴定为犬冠状病毒病的诊断、防治及后续疫苗研发奠定了基础。

3种方法诊断口腔黏膜类天疱疮的有效性比较

目的:比较组织病理(HE)、直接免疫荧光(DIF)和血清抗BP180/BP230 ELISA抗体检测(BP180/BP230)诊断口腔黏膜类天疱疮(MMP)的有效性。方法:纳入MMP患者53例的病例资料,分析、比较以上病例中HE、DIF、血清BP180/230检查结果。结果:综合3种检查的结果,最终48例患者确诊为MMP。其中男性8例(16.7%),女性40例(83.3%),年龄34~76岁(中位年龄62岁),病程中位数9月(四分位数3~12月)。6例患者病损累及口腔外部位,依次为皮肤(n=3,6.3%)、生殖器(n=2,4.2%),咽喉(n=1,2.1%)。口腔黏膜主要受累部位为牙龈(n=40,83.3%)、腭部(n=22,45.8%)、颊部(n=15,31.3%)、舌部(n=4,8.3%)、唇部(n=3,6.3%)。HE诊断率为83.3%(40/48),漏诊率为16.7%(8/48);DIF诊断率为85.4%(41/48),漏诊率为14.6%(7/48);BP180/230 ELISA诊断率47.9%(23/48),漏诊率为52.1%(25/48)。HE与DIF的一致性Kappa系数为0.354(95%CI:0.060,0.648),BP180/230与DIF的一致性Kappa系数为-0.112(95%CI:-0.328,0.104),HE与BP180/230 ELISA的一致性Kappa系数为0.031(95%CI:-0.181,0.243)。结论:HE和DIF对MMP诊断的有效率接近,二者可互补;ELISA检测酌情作为补充检查,以提高MMP诊断的准确性。

大疱性皮肤病53例免疫荧光和组织病理检查结果分析

目的探讨直接免疫荧光(DIF)和盐裂皮肤DIF技术在诊断大疱性皮肤病中的价值。方法采用DIF和盐裂皮肤DIF技术检测53例大疱性皮肤病标本,并与其组织病理检查结果进行比较。结果 DIF和盐裂皮肤DIF技术诊断该类疾病的阳性率(90.57%)显著高于对其进行组织病理检查的阳性率(73.58%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DIF和盐裂皮肤DIF技术仍是目前诊断和鉴别诊断大疱性皮肤病的可靠方法。

广东中山地区55240例儿童7项呼吸道病毒抗原检测的结果分析

目的探讨广东中山地区儿童呼吸道病毒感染与性别、年龄、季节、疾病等的关系,为儿童呼吸道病毒感染的诊断提供临床依据。方法采用直接免疫荧光法对该院从2011年11月25日至2016年9月30日共55 240例患儿进行流感病毒A、B(IFA、IFB)、副流感病毒1、2、3(PIV1、PIV2、PIV3)、呼吸道合胞病毒(RSV)及腺病毒(ADV)7种常见病毒抗原的检测,并对结果进行分析。结果在55 240例患儿中病毒感染阳性率为23.25%,其中RSV 53.75%、IFA13.83%、ADV10.81%、PIV3 10.77%、IFB 6.49%、PIV1 2.37%、PIV2 1.14%、混合感染0.84%。男、女感染的阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。0~≤1岁和1~≤3岁患儿感染病毒的阳性率均高于其他组,差异有统计学意义(P<0.05),两个年龄段中均以RSV的阳性率较高(71.92%,46.23%)。此7种病毒在冬、春季感染的阳性率高于夏、秋季,差异有统计学意义(P<0.05),且均以RSV的阳性率最高。55 240例患儿中,此7种病毒阳性率以患支气管炎的患儿组高于其他组,差异有统计学意义(P<0.05),且以感染RSV阳性率最高。108例混合感染患儿中,也以混合感染RSV的患儿最多(90例)。结论 RSV是中山地区儿童呼吸道病毒感染的主要病原体,3岁以下儿童阳性率最高,冬、春季为感染高发季节。

抗犬瘟热病毒荧光标记单抗的制备和初步鉴定

[目的]建立利用单克隆抗体检测犬瘟热病毒的直接免疫荧光诊断方法。[方法]通过搅拌法,用异硫氰酸荧光素标记G蛋白纯化的抗犬瘟热病毒单抗CE3,对荧光抗体进行纯化、鉴定,并确定其最适工作浓度。对61份临床可疑犬瘟热病料进行直接免疫荧光检测。[结果]吸收试验、阻断试验和特异性试验结果显示,标记抗体具有高度的敏感性和特异性,与犬细小病毒(CPV)、犬副流感病毒(CPIV)、犬腺病毒(CAV)、狂犬病毒(RV)无交叉反应,其最优化工作浓度为1∶80。对临床可疑犬瘟热病料的阳性检出率是48%。[结论]该研究建立的直接免疫荧光方法具有快速、特异和简便的优点,对犬瘟热疾病的早期诊断具有重要意义。

茂名市2015-2016年儿童呼吸道病毒流行特征分析

目的通过对茂名市呼吸道感染患儿呼吸道病毒的筛查,探讨呼吸道感染患儿的病毒病原情况,掌握该地区呼吸道患儿病毒感染的流行趋势,为呼吸道感染患儿的疾病诊断提供依据。方法采用直接免疫荧光法对13 148例呼吸道感染患儿的鼻咽分泌物进行7种常见呼吸道病毒的检测,包括腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒A(FLUA)、流感病毒B(FLUB)及副流感病毒(PIV)。结果 13 148例患儿中,检出呼吸道病毒阳性者3 308例,总阳性率为25.16%,RSV阳性检出率最高(17.39%),呼吸道病毒阳性检出率存在明显的季节性,以第1季度检出率最高,且感染人群主要集中在3岁以下的婴幼儿。结论所检测的7种呼吸道常见病毒中,RSV阳性检出率居于首位,该地区病毒感染与年龄及季节有关。

Preparation and Preliminary Identification of Fluorescein Labeled Monoclonal Antibody against Canine Distemper Virus

[Objective] The aim of the present study was to develop a direct immunofluorescence method for the diagnosis of canine distemper （CD） with FITC-conjugated monoclonal antibodies （FITC-McAb）.[ Metbod] The McAb against CDV, designated as CE3, was purified with protein G and labeled with FITC through agitation method. After purification and identification, the optimal working concentration of FITC-labeled CE3 was determined. Then 61 clinical samples of suspected canine distemper were detected by direct immunofluorescence assay. [ Result] The absorption test, blocking test and specificity test showed that the labeled antibody had high specificity and sensitivity, but didn＇t have cross reaction with canine parvovirus （CPV）, canine parainfluenza virus （CPIV）, canine adenovirus （CAV） and rabies virus （RV）. The optimal working concentration was 1：80. The positive rate of clinical suspected samples was 48%. [ Conclusion] The direct immunofluorescence assay developed in this study was rapid, specific and convenient, and had great significance for the early diagnosis of canine distemper.

高致病性猪蓝耳病直接免疫荧光诊断方法的建立及其应用

以临床"高热综合征"病例中分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR变异株接种试验猪制备抗血清,采用硫酸铵盐析法提取血清中免疫球蛋白(IgG),并用异硫氰酸荧光素(FITC)对IgG进行荧光标记,建立了一种直接免疫荧光诊断方法(FA),用于检测病毒感染单层细胞及动物脏器组织切片中PRRSV抗原。本试验对PRRSV感染MARC-145细胞增殖动力学检测结果表明,接种后16h可检测到抗原阳性细胞,接种后60h～72h达到病毒增殖高峰;对病毒人工感染猪脏器组织抗原分布检测结果显示,腹股沟淋巴结、空肠、睾丸、脾脏、下颌淋巴结、肠系膜淋巴结和扁桃体抗原阳性检测率较高;对临床10个猪场送检的38份病料平均阳性检出率为63.2%(24/38)。该方法具有特异性强、敏感性和重复性好等特点,与RT-PCR检测结果符合率为96.3%,对几种已知猪病毒抗原无交叉反应,标记的荧光抗体于4℃保存6个月稳定。IFA为PRRS的临床诊断提供了一种快速、便捷、敏感、特异的检测方法。

7360例呼吸道感染儿童病毒抗原七联检的临床结果分析

目的 通过对四川大学华西第二医院就诊的7360例急性呼吸道感染患儿进行呼吸道病毒抗原检测,分析不同病毒在急性呼吸道感染中的分布情况,为儿童呼吸道感染的早期诊治提供流行病学依据。方法 提取患儿鼻咽拭子,采用直接免疫荧光法(DFA)检测7种呼吸道病毒抗原,包括流感病毒A型(FluA)、流感病毒B型(FluB)、副流感病毒1型(PIV1)、副流感病毒2型(PIV2)、副流感病毒3型(PIV3)、呼吸道合胞病毒(RSV)和腺病毒(ADV)。结果 7360例急性呼吸道感染患儿中,检出呼吸道病毒783例,检出率为10.64%。其中检出率最高的是RSV545例(7.40%),其次分别为PIV3107例(1.45%),ADV62例(0.84%),FluB25例(0.34%),FluA24例(0.33%),PIV118例(0.24%),混合型8例(0.11%),PIV22例(0.03%)。结论 7项呼吸道病毒检测可以明确引起患儿急性呼吸道感染的病原体,为临床用药提供合理诊断依据,对临床药物合理使用具有指导意义。

直接免疫荧光法对多种呼吸道病毒检测的临床意义

目的为临床提供一种快速诊断呼吸道病毒感染的方法。方法采用直接荧光免疫法检测呼吸道分泌物的合胞病毒、腺病毒、流感病毒A、流感病毒B及副流感病毒1、2、3型。结果对195例呼吸道感染者的鼻咽分泌物标本采用直接荧光免疫法进行病毒原检测,结果显示本地区病毒感染率为57.94%,病毒原以呼吸道合胞病毒为主,副流感病毒1、3型次之,感染以冬季好发。结论该法具有快速、简便、特异性高等优点,对确定临床呼吸道病毒感染是一种非常好的方法。直接荧光免疫法操作简便,费用较低,适合基层医院推广使用。

人7型腺病毒的分离与鉴定

目的对哈尔滨医科大学附属第二医院呼吸道感染患者的痰或咽拭子标本进行检测、分离鉴定和分型。方法应用直接免疫荧光法对标本进行初步筛检,将筛检得到的腺病毒阳性标本接种到A549细胞进行病毒培养,并用空斑法进行纯化。采用PCR技术扩增腺病毒五邻体、六邻体基因,将扩增的PCR产物进行基因测序,并将测序结果 BLAST比对,初步判断其型别。结果从采集的标本中分离到1株人腺病毒毒株。BLAST比对五邻体、六邻体测序结果,表明该毒株与人7型腺病毒五邻体、六邻体的同源性为100%,初步判定该毒株为人7型腺病毒。结论从哈尔滨医科大学附属第二医院呼吸道感染患者的痰或咽拭子标本中分离到1株人7型腺病毒。

皮肤狼疮带试验与临床分析

目的 探讨狼疮带试验 (LBT)的临床意义。方法 用直接免疫荧光技术 (DIF)检测SLE患者外观正常皮肤或皮损的真、表皮交界处 (BMZ)免疫球蛋白或补体的沉积 ,并同时与SLE主要临床症状进行统计分析。结果 SLE患者 72例 ,LBT阳性率为 75 .0 % ;免疫复合物沉积种类以IgM阳性率最高 ( 79.6% ) ,C3 其次 ( 72 .2 % ) ,IgG ( 61.1% )位于第 3 ,IgA( 16.7% )最低。免疫复合物常见结合成份为IgM加C3 。免疫复合物沉积种类与疾病严重程度有一定关系。结论 LBT对SLE的诊断有较高的特异性 ,与临床一些主要症状的发生有一定相关性。但LBT用于临床诊断 ,应结合临床症状及实验室多项实验指标综合评估。

外周血单核细胞中肺炎衣原体特异性抗原的检测

目的 :肺炎衣原体 (Cpn)特异性抗原检测方法的建立及其应用。方法 :分离人外周血单核细胞 (PBMC) ,用直接免疫荧光 (DIF)检测PBMC中的Cpn特异性抗原 ,同时用间接微量免疫荧光 (MIF)检测Cpn抗体。结果 :颈动脉粥样硬化病人和正常人PBMC中Cpn特异性抗原检出阳性率分别为 6 2 %和 30 % (P <0 .0 1) ;血浆中CpnIgG的检出阳性率分别为 72 %和2 8% ,P值 <0 .0 0 1;血浆中CpnIgM的检出阳性率分别为 16 %和 12 % (P值 >0 .0 5 )。结论 :PBMC中的Cpn特异性抗原和血浆中Cpn -IgG的高检出率均见于颈动脉粥样硬化病人 ,但抗原的检测具有更大的临床意义。

上海地区儿童急性下呼吸道常见病毒及鼻病毒感染的临床研究

目的了解上海地区急性下呼吸道感染(ALRTI)患儿病毒感染病原体的现状。方法收集2005年1月至12月住院确诊为ALRTI的342例患儿深部鼻咽分泌物(NPS)标本,建立套式RT-PCR的方法测定NPS中的鼻病毒(HRV)基因,用直接免疫荧光法(DFA)检测NPS中的呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒(IFV)、副流感病毒(PIV)、腺病毒(ADV)抗原,对各种病毒在小儿ALRTI中的流行特点及临床特征进行分析。结果342例ALRTI患儿NPS标本中,检测到HRV阳性46例(13.45%)。HRV阳性患儿中,3岁以下婴幼儿38例(82.6%),1岁以下27例(58.7%)。HRV致ALRTI全年可见,3到5月份为最高峰。RSV阳性64例(18.70%),1岁以下46例(71.88%)。1岁以下与1岁以上患儿RSV的检出率比较差异有统计学意义(χ2=4.03,P<0.05)。RSV的检出阳性率从2月份起逐渐下降,6到7月份达到最低,8月份起检出率逐渐升高,至12月份达到最高。ADV感染9例(2.63%),PIV感染8例(2.30%),IFV感染7例(2.0%)。本组患儿病毒混合感染共4例。130例病毒性ALRTI患儿诊断支气管肺炎122例,体温正常42例、低热34例、中度热50例、高热仅4例,以中度发热以下为主,末梢血白细胞<10×109/L93例(71.5%),中性粒细胞<50%94例(72.3%),CRP<8mg/L99例(76.2%),均符合病毒性肺炎的特点。64例RSV感染病例中有30例合并喘息(46.9%),36例HRV感染病例中24例合并喘息(52.2%)。结论病毒病原在上海地区小儿ALRTI中占有重要地位,小儿病毒性ALRTI以RSV及HRV为主,ADV、PIV及IFV相对少见,混合性病毒感染少见。HRV所致小儿ALRTI以3岁以下儿童多见,尤以1岁以下为多。上海地区HRV感染主要集中于春秋两季。RSV所致小儿ALRTI以1岁以下为主,以秋、冬、春气温较低的季节多发。除RSV外,HRV也是导致ALRTI患儿喘息的重要病原。

直接免疫荧光法检测阴道毛滴虫

目的 研究多克隆抗体直接免疫荧光法(direct immunofluorescence assay,DFA)检测阴道毛滴虫的最佳反应条件及临床应用意义。方法 确诊为阴道炎的患者取阴道分泌物,经培养收集虫体,稀释成悬液,制作抗原片。取阴道毛滴虫免疫山羊血清,按Marssall氏法用异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体,观察不同抗体稀释度(1:10～1:2560)、不同孵育时间(15,30,45,60,90,120 min)、不同封闭剂(1％牛血清白蛋白,10％牛血清白蛋白及10％小牛血清)对DFA检测阴道毛滴虫的影响。对102例阴道炎患者标本分别用培养法、悬滴法和DFA作临床检验。结果抗体稀释度1:160、37℃孵育45min、封闭剂1％或10％牛血清白蛋白为最佳反应条件。检测102例临床标本,3种方法均阳性的16例,均阴性的68例。有13倒悬滴法、3例DFA检测阴性,而另2法阳性。1倒悬滴法阴性,DFA阳性,培养法未能证实。以培养法为标准,DFA敏感性为87.9％,特异性为98.6％。结论 DFA可作为悬滴法的一种替代手段用于临床检验。

两种方法检测汉坦病毒滴度的比较研究

比较双抗体夹心ELISA法与直接免疫荧光(DFA)法在检测汉坦病毒灵敏度方面的差别。用汉坦病毒76—118株感染Vero—E6细胞,取不同时间点的病毒感染细胞制备细胞爬片或细胞培养物冻融上清,分别用本室制备的抗汉坦病毒单克隆抗体标记荧光素或辣根过氧化物酶(HRP),建立直接免疫荧光法和双抗体夹心ELISA法检测上述细胞中的病毒抗原,并比较两者的检测灵敏度。用空斑形成实验结果作为金标准,以评价两种方法在检测病毒抗原灵敏度方面的差异。结果:用两种检测方法测定不同时间点的汉坦病毒培养物抗原,双抗体夹心ELISA法不仅检出的时间早,而且其病毒滴度均较IFA法高(P<0.01)。说明ELISA法检测汉坦病毒滴度的灵敏度较IFA法更高,并且操作简单、可重复性好、便于大批量规模化检测,因此更适用于汉坦病毒的检测。

直接免疫荧光法快速检测甲型流感病毒抗原的临床意义

目的探讨直接免疫荧光法快速检测早期甲型流感病毒抗原及其临床应用。方法选择临床上诊断为急性呼吸道感染入院的患者,采集标本200例,将其分为两组:冬春两季流行季节儿童组(100例)和夏秋两季非流感流行期间儿童组(100例),使用美国D3Ultra甲型流感病毒抗原检测试剂,采用荧光标记的单克隆抗体对感冒患者进行甲型流感病毒抗原检测。结果在冬春两季流感流行期间,100例儿童检测有8例阳性,阳性率为8%;在夏秋两季非流感流行期间100例儿童检测有2例阳性,阳性率为2%;两组阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论运用直接免疫荧光法快速检测甲型流感毒感抗原是一种经济、高效、快速、特异的检测方法,能指导临床快速诊断,合理用药。