猫骨髓源神经干细胞的诱导分化

目的观察家猫骨髓源巢蛋白阳性细胞诱导分化情况,为家猫骨髓基质细胞(BMSC)作为自体神经干细胞种子细胞提供理论依据。方法抽取家猫的骨髓,从中分离得到骨髓基质细胞,在体外给予神经干细胞培养基培养增殖,然后用分化诱导因子进行诱导分化,倒置相差显微镜下观察活细胞及免疫细胞化学染色情况。结果猫骨髓基质细胞在体外培养中体型增大,继之出芽,贴壁生长,可形成克隆团,同时可传代培养,这些具有克隆能力的骨髓基质细胞能表达神经干细胞特异性抗原巢蛋白,与5-溴尿嘧啶(BrdU)共培养3d后可见部分大圆形细胞BrdU染色阳性,这些细胞经进一步的诱导可分化为神经元样细胞,而且表达神经元特异性抗原NSE和NeuN。结论家猫骨髓基质细胞具有干细胞特征,可诱导为巢蛋白阳性细胞,并可进一步分化为表达烯醇化酶(NSE)和NeuN的神经元样细胞。证实家猫BMSC可作为移植修复神经系统损伤的神经干细胞种子细胞。

高压氧对局灶性脑缺血损伤大鼠脑神经功能的影响

目的广泛应用高压氧(HBO)治疗脑卒中的疗效结果不完全一致。为证实HBO对脑缺血后的神经行为学产生影响的假设,观察HBO治疗前后实验大鼠的肌力及运动功能的变化。方法线栓法建立大鼠的大脑中动脉缺血模型(MCAO);观察脑神经功能的变化。结果HBO治疗后缺血大鼠的神经功能异常恢复较快,缺血HBO组(OH组)缺血6h神经症状评分在(1.22±0.40),较单纯缺血组(O组)(3.00±0.71)明显好转;OH组在缺血后72h网屏测验评分(4.68±0.48)与O组(3.58±0.69)差别有显著性意义(t=5.71,P<0.01);OH组在缺血后3周触觉刺激试验(32.49±7.54)与O组(63.52±14.29)差异有显著性意义(t=8.37,P<0.01);OH组在缺血后2周平衡木行走实验(5.00±0.67)与O组(3.95±0.52)差异有显著性意义(t=5.40,P<0.01)。结论HBO能促进脑缺血损伤后神经功能缺损的恢复。其机制考虑与增加缺血组织的氧供应、减轻脑水肿和减少组织病变有关。

清除补体对大鼠局灶性脑缺血的作用

目的观察抑制补体系统的活化或消除其影响抑制多形核中性粒细胞浸润,是否能减轻局灶性脑缺血损伤程度和神经功能缺损。方法采用局灶性脑缺血大鼠模型,用眼镜蛇毒因子(cobravenomfac-tor,CVF)消耗大鼠体内补体,于缺血第7天进行形态学观察,于缺血第1,4,7天测试实验动物的神经行为功能。结果与单纯缺血组比较,CVF处理组大鼠脑前囟前1.2mm和后0.8mm、1.8mm冠状平面梗死面积占同侧半球面积的百分数减小(29±3)%/(35±4)%,(32±5)/(45±8)%,(28±4)%/(38±4)%,达到非常显著性意义(t=3.13,4.30,4.47,P<0.01);缺血区域内中性粒细胞数均比单纯缺血组减少(3.4±1.4)/(5.3±2.0),达到显著性意义(t=2.35,P<0.05);CVF处理组的神经功能损害比单纯缺血组轻,达到显著性意义(P<0.05)或非常显著性意义(P<0.01)。结论清除体内补体对局灶性脑缺血损伤有保护作用,减轻神经功能缺损程度;局灶性脑缺血过程中补体系统活化,并对脑缺血损伤有贡献。

不同输注途径移植骨髓间充质干细胞对阿霉素肾病大鼠疗效初探

目的探索骨髓间充质干细胞(BMSCs)经不同输注方式移植入阿霉素慢性肾病大鼠体内对肾损伤的影响。方法SD大鼠左侧肾切除后以2.5 mg/kg剂量给大鼠尾静脉注射阿霉素,1次/周,连续2次,慢性肾病模型成功后,将成模大鼠36只随机均分为3组:阿霉素慢性肾病对照(ADR)组、干细胞经肾动脉移植(M-A)组、干细胞经外周静脉移植(M-V)组,另选12只正常大鼠设正常对照(N)组。BMSCs经体外培养后,以2×106个/mL经肾动脉注射到M-A组大鼠体内,2×106个/mL经尾静脉注射到M-V组大鼠体内,2周后再次同样方法注射等量BMSCs。检测移植当周、移植后1周、2周大鼠血尿素氮、血肌酐、24 h尿蛋白、24 h尿微量蛋白,末次注射干细胞后第1周于激光聚焦显微镜下观察大鼠肾脏病理和干细胞在肾脏内分布情况。结果M-A组、M-V组和ADR组在各观察时点血尿素氮、血肌酐、24 h尿蛋白总量、24 h尿微量蛋白均明显高于N组(P<0.01)。移植后1、2周M-A组的24 h尿微量蛋白低于ADR组(P<0.01),且M-A组的血肌酐较ADR组和M-V组均降低(P<0.01)。移植后1周,M-A组24 h尿蛋白、24 h尿微量蛋白明显低于M-V组(P<0.01);但2周时尿蛋白和微量蛋白与M-V组的差异无统计学意义。结论BMSCs移植可以改善阿霉素慢性肾病的肾损伤情况,在BMSCs移植后一段时间,BMSCs经肾动脉移植的效果优于经外周静脉移植。

细胞因子诱导的杀伤细胞基本特性及抗肿瘤效应研究

目的建立培养细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞方法,并评价其基本特点、体内外抗肿瘤活性及安全性。方法使用抗CD3单克隆抗体、rhIL-2及rhIFN-γ刺激PBMC细胞,使其在体外大量扩增,利用流式细胞术、体外杀伤实验及荷人卵巢癌小鼠模型检测CIK细胞的特点及抗肿瘤活性;并检测CIK细胞中外源性因子污染情况及其急性毒性作用。结果体外培养21 d后,CIK细胞总数可达1010以上,其主要成分为CD3+CD8+T细胞及CD3+CD56+NKT细胞,CIK细胞在体外对Ho8910、A549、K562及HepG2细胞均有较高的杀伤活性,并对荷瘤小鼠具有治疗作用。同时在CIK细胞中未检测到外源性病原体污染。结论 CIK细胞在体内外均具有较高的抗肿瘤活性且无毒性作用。

不同白酒对大鼠肝组织及血清透明质酸和Ⅳ型胶原的影响

目的:探讨饮用不同白酒对大鼠肝脏及中血清透明质酸和Ⅳ型胶原的影响。方法:雄性SD大鼠131只分为对照组、A酒组(高加低剂量组)、B酒组(高加低剂量组),于2、4、6月末各组随机抽取2只大鼠处死,取肝脏观察组织学改变;6月末,用黄曲霉素B1(AFB1)腹腔注射建立体内肝癌短期模型,6周后,处死大鼠,观察大鼠肝脏病理学变化,取血清进行透明质酸(HA)及Ⅳ型胶原(CⅣ)含量检测。结果:(1)在单纯灌酒后,A酒组发生肝纤维化的比例比B酒组低,AFB1造模后肝纤维化、肝硬化并肝癌的发生率A酒组低于B酒组;(2)与对照组相比,A酒组和B酒组纤维结缔组织增生明显(P<0.05);(3)HA、CⅣ在B酒组中的含量比A酒组中的含量高。结论:2种白酒对肝纤维化、肝硬化模型大鼠的血清及肝组织HA和CⅣ的影响不同,引起的肝损伤程度也不同,B酒可增加HA和CⅣ的水平,相对而言,A酒的作用要轻得多。

后循环缺血时前庭神经内侧核5-羟色胺的变化

目的:本实验利用微透析技术研究椎基底动脉缺血动物模型前庭神经内侧核5-羟色胺(5-HT)的变化,探讨5-HT在后循环缺血眩晕发生中的作用。方法:纯白红目豚鼠12只,采用穿线法阻断基底动脉制作椎基底动脉供血不足动物模型。采用自身对照法进行研究,利用微透析技术动态监测12只豚鼠在椎基底动脉供血障碍前、后前庭神经内侧核5-HT的变化。结果:豚鼠椎基底动脉缺血前前庭内侧核5-HT基础水平为(22.5±1.6)fmol/10μl,椎基底动脉缺血显著地引起前庭内侧核5-HT水平的升高,在10 min后升到最高,达到基础值的(195±19)%。然后略有下降,在30 min 5-HT水平降至基础值的(155±24)%,缺血后30 min内各测试点与缺血前比较差异有显著性(P<0.05)。结论:前庭神经内侧核5-HT的显著性升高可能与椎基底动脉短暂缺血性眩晕的产生有关。

内毒素休克狗肺解聚功能受损机制探讨

麻醉狗注内毒素前左心血TXB_2/6-keto-PGF_(1α)及PAR均明显低于右心血;内毒素休克时,左、右心血TXB_2/6-keto—PGF_(1α)及PAR明显上升,且左、右心血之间的浓度梯度差消失;消炎痛明显减轻内毒素休克时的前述改变。注内毒素前及内毒素休克早期TXB_2/6-keto-PGF_(1α)与PAR之间呈显著正相关。结果提示:肺解聚功能与肺代谢TXA_2、PGI_2有关;内毒素休克早期,肺代谢TXA_2,PGI_2的失调是肺解聚功能受损原因之一。

细粒棘球蚴B抗原对1型糖尿病牙龈白细胞介素-2、白细胞介素-4表达的影响

目的研究细粒棘球蚴B抗原(EgB)对链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病(T1DM)模型小鼠牙龈组织中白细胞介素-2(IL-2)及白细胞介素-4(IL-4)表达产生的影响。方法雌性10周龄STZ诱导的T1DM模型小鼠20只,随机分为2组,每组10只,处理组给予EgB 100μg/10 g连续5 d腹腔注射,对照组给予同等剂量0.9%氯化钠注射溶液腹腔注射,取其牙龈组织,用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测牙龈中IL-2、IL-4 mRNA表达。结果 IL-2 mRNA在EgB处理组较对照组表达明显下降(P<0.05);IL-4 mRNA在EgB处理组较对照组表达明显上升(P<0.05)。结论 EgB处理STZ诱导的T1DM模型小鼠,使其牙龈中IL-2 mRNA表达降低,IL-4 mRNA表达升高,影响T1DM免疫应答机制。

气滞血瘀与气虚血瘀心肌梗死大鼠模型的生物学标记物表达差异

目的探讨心肌梗死气虚血瘀和气滞血瘀证动物模型的生物学特点。方法雄性Wistar大鼠36只随机分为正常组6只、心肌梗死组10只、气虚血瘀组10只、气滞血瘀组10只。冠状动脉左前降支结扎造成心肌梗死模型,在此基础上,采用饥饿、疲劳、寒湿刺激建立心肌梗死气虚血瘀证模型,采用昼夜失调、闪烁光刺激和夹尾刺激联合冰水处理建立心肌梗死气滞血瘀证大鼠模型,观察大鼠的一般情况、心肌组织病理染色等情况;检测血小板聚集率、血浆血小板膜蛋白140(GMP-140)、降钙素基因相关肽(CGRP)及去甲肾上腺素(NE)水平。结果气虚血瘀组大鼠倦怠嗜睡,活动量少;气滞血瘀证组大鼠活动量增多,精神亢奋,极易激惹。心肌组织NBT染色显示心肌梗死组、气虚血瘀组和气滞血瘀组大鼠均可见灰白色梗死区域。心肌梗死组、气虚血瘀组及气滞血瘀组在60 s、180 s、300 s及最大值的血小板聚集率均高于正常组(P<0.01),心肌梗死组、气虚血瘀组及气滞血瘀组各时点的血小板聚集率两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。心肌梗死组、气虚血瘀组及气滞血瘀组GMP-140高于正常组(P<0.05或P<0.01),且气虚血瘀组及气滞血瘀组GMP-140水平均高于心肌梗死组(P<0.05);气虚血瘀组CGRP水平低于其他各组(P<0.05);气滞血瘀组NE水平显著高于其他各组(P<0.01)。结论心肌梗死气滞血瘀证与气虚血瘀证生物学标记物表达存在差异性,气虚血瘀证血浆GMP-140、血小板聚焦率升高,CGRP降低;气滞血瘀组血浆GMP-140、血小板聚焦率及NE升高。

大鼠高肺血流量肺动脉高压模型的建立

目的建立大鼠高肺血流量肺动脉高压模型。方法采取左颈总动脉-颈外静脉分流、左肺动脉结扎以及左颈总动脉-颈外静脉分流联合左肺动脉结扎3种手术方式建立大鼠高肺血流量模型，观察术后8周肺动脉平均压（mPAP）、右心室肥厚指数（RV／LV＋S）、肺血管管壁厚度占血管外径的百分比（WT％）和管壁面积占血管总面积的百分比（WA％）；以及左颈总动静脉分流联合左肺动脉结扎术后4、8、12周上述指标的变化。结果与对照组比较，左颈总动脉-颈外静脉分流联合左肺动脉结扎在术后8、12周产生明显肺动脉高压，mPAP及RV／LV＋S逐渐增加，且差异有统计学意义（P〈0．01），WT％和WA％差异也均有统计学意义（P〈0．01）。结论左颈总动脉．颈外静脉分流联合左肺动脉结扎可建立高肺血流量肺动脉高压模型，且操作简单。

人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤癌旁肿瘤相关基因表达及意义

目的通过对人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤癌旁肿瘤相关基因表达的检测，探讨筛选癌旁正常卵巢组织的可行性。方法人卵巢上皮癌OVCAR3细胞皮下种植获取瘤源并卵巢原位移植后，取癌组织、癌旁近端组织、癌旁中段组织、癌旁远端组织及正常裸鼠卵巢组织，采用免疫组化法检测以上组织的CKG、CA125、P53、survivin、MMP-2、T1MP-2的表达量。结果40例人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤模型中获取35份活检正常的癌旁残余卵巢组织，获取率87．5％（35／40）。癌组织中cK．7、CA125、P=53、suivin、MMP4及TIMP-2的表达率分别为95．O％（38／40）、95．0％（38／40）、75．0％（30／40）、85．0％（34／40）、77．5％（31／40）及77．5％（31／40）；癌旁近端组织的表达率分别为71．4％（25／35）、68．6％（24／35）、57．1％（20／35）、62．9％（22／35）、60．0％（21／35）及57．1％（20／35）；癌旁中段组织的表达率分别为34．3％（12／35）、31．4％（11／35）、31．4％（11／35）、31．4％（11／35）、34．3％（12／35）及31．4％（11／35）；癌旁远端组织的表达率分别为25．7％（9／35）、22．9％（8／35）、25．7％（9／35）、25．7％（9／35）、28．6％（10／35）及31．4％（11／35）；23份癌旁正常卵巢组织CK．7、CAl25、P53、suivin、MMP4及ⅡMP-2的表达均为阴性。免疫组化检测结果为癌旁近端组织中cK-7、CAl25、P=53、suivin、MMP-2及TIMP-2的表达低于癌组织（P〈0．05），高于癌旁中段组织及癌旁远端组织（P〈0．01）；癌旁中段组织及癌旁远端组织表达差异无统计学意义（P〉0．05）；cK-7、CAl25、suivin的强阳性表达率明显高于P53、MMP4、11MP-2（P〈0．01）；不同病变程度获取的癌旁正常卵巢组织中的表达量差异无统计学意义（P〉0．05）。20例正常裸鼠卵巢组织CK-7、CAl25、P53、suivin、MMP4、TIMP-2的表达均为阴性。结论CKG、CAl25、P53、suivin、MMP-2及11MP-2等分子指标的表达向无癌方向呈递减趋势，其肿瘤相关基因表达阴性可作为筛选癌旁残余正常卵巢组织的标准，卵巢上皮癌旁可以获取相对安全的正常卵巢组织。