不同纯度携带干细胞胰岛转分化培养前、后PDX-1的表达研究

用不同纯化方法获取3种不同浓度大鼠胰岛,分离并转分化胰腺干细胞.用兔抗鼠PDX-1多克隆抗体鉴定胰腺干细胞,用免疫细胞化学、RT-PCR方法检测转分化前后胰腺干细胞PDX-1的表达.结果显示胰腺干细胞经转分化后PDX-1蛋白在胞核表达明显增多,并且转分化后PDX-1mRNA表达也增多.这说明胰腺干细胞经转分化培养后的子代细胞仍然保持干细胞的特征.

猪核移植供体细胞的分离培养及传代的研究

通过对猪的卵丘细胞和胎儿成纤维细胞的分离、培养和传代的研究，摸索出一套猪体细胞的分离、培养和传代的方法，建立了猪的供体细胞系。研究结果表明：猪的卵丘细胞单层的生长需要5～6d；运用组织块法和酶消化法获得胎儿成纤维细胞，组织块法单层的生长需要10～11d，酶消化法需要8～9d。猪的卵丘细胞和胎儿成纤维细胞均可以建立并获得稳定的细胞系，这些供体细胞培养方法的应用可为猪体细胞核移植研究提供丰富的供体细胞材料来源。

应用骨髓库HLA资料构建高匹配诱导多能干细胞库的可行性研究

目的研究利用骨髓库HLA资料建立高匹配诱导多能干细胞(iPS)库的可行性。方法通过对中华骨髓库湖南分库长沙实验室5 236(人)份HLA分型数据统计分析,找出O型HLA-A、-B、-DRB1三座位纯合子数据,计算以纯合子志愿者为假定iPS供者、5 236名随机志愿者为假定患者的匹配几率;同时计算随机志愿者HLA单体型频率,评估以O型HLA高频单体型纯合子志愿者为假设iPS供者的匹配几率。结果在5 236份骨髓供者资料中共发现O型HLA单体型纯合子14种,以此建库可以分别为49.81%(2 608/5 236)、61.29%(3 209/5 236)、79.51%(4 163/5 236)、75.76%(3 967/5 236)及97.78%(5 120/5 236)的假定患者提供5种匹配水平的iPS供者;共检出17种高频率(HF>1%)的单体型,以这些单体型的O型纯合子建库可以分别为64.06%(3 354/5 236)、75.55%(3 956/5 236)、81.11%(4 247/5 236)、78.76%(4 124/5 236)及98.28%(5 146/5 236)的假定患者提供5种匹配水平的iPS供者。结论利用中华骨髓库现有的HLA资料可以建立数量少、效率高的iPS细胞库。

儿童恶性肿瘤患者接受体外扩增HLA-半相合供者免疫细胞输注的不良反应分析

目的探讨儿童恶性肿瘤患者接受体外扩增人类白细胞抗原（HLA）-半相合供者免疫细胞输注（HDICIs）的不良反应，为如何护理此类患儿提供依据。方法2011年9月至2012年9月收治的12例儿童恶性肿瘤患者共接受92例次HDICIs，观察并记录每位患儿在HDICIs过程中、结束2h及24h内的不良反应，并为患儿提供心理护理，输注前护理，输注过程不良反应分析及护理，输注后出院宣教及随访。结果在92次HDICIs过程中，共出现20例次发热反应，其中有6例次伴畏寒、寒战，1例次伴高热惊厥，对症处理后缓解；共出现5例次轻微情绪改变；其余各例次HDICIs过程中及结束后生命体征均平稳，无恶心、呕吐、腹痛、腹泻、皮疹、水肿、过敏反应等异常反应的发生。每程HDICIs前后，所有患儿的血象及生化指标均未见明显异常。结论儿童恶性肿瘤患者接受HDICIs行免疫治疗是安全的；在整个治疗过程中重视心理护理，输注前的抗过敏治疗，重视体温监测、及时发现高热惊厥的前兆，重视不良反应的对症处理，重视随访和出院宣教对于儿童恶性肿瘤患者接受HDICIs行免疫治疗的顺利进行具有重要意义。

核移植与供体细胞

"多莉"羊的诞生是生物界的一个里程碑,它之所以引起如此大的轰动主要是因为它来源于培养的成年绵羊乳腺上皮细胞,这是人类第一次证明分化的体细胞可以被重编程后恢复全能性并最终分化发育成一个动物个体。这说明哺乳动物分化的体细胞核仍具有全套的遗传物质并能够被卵母细胞逆转恢复全能性。然而,关于多莉的供体细胞来源却一直是克隆领域的一个谜。由于体细胞克隆的效率非常低,而用于核移植的供体细胞悬液中往往含有多种类型的细胞,这使得我们很难确切地知道最终获得的克隆动物是来源于哪一种细胞。这种不确定性给我们研究核移植诱导体细胞重编程的机制带来了很大的困难,因此,对供体细胞的研究也是核移植研究领域的一个重要课题,这包括各种组织来源的体细胞是否均可以用于核移植,终末分化的体细胞是否能够用于核移植,组织干细胞是否更有利于体细胞重编程,供体细胞的分化状态是否与核移植的效率有关,死亡的体细胞是否也可以用于核移植等等。本文综述了核移植中与供体细胞相关的最新研究进展。