Dot immunogold filtration assay for rapid detection of anti-HAV IgM in Chinese

INTRODUCTION The hepatitis A virus specific immunoglobulin M(IgM)antibody is a specific serological marker forearly diagnosis of hepatitis A..At present,themethods used at home or abroad for detecting anti-HAV IgM are RIA,ELISA and SPHAI.The dotimmunogold combination assay that has beendeveloped since 1989 is a new technique with theproperty of simple and rapid immunologicaldetection,by using the red colloidal gold particles tolabel the antibodies as indicator,and the

Preliminary study of a dot immunogold filtration assay for rapid detection of anti-HCV IgG

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＨｅｐａｔｉｔｉｓＣｉｓａｗｏｒｌｄｗｉｄｅｅｐｉｄｅｍｉｃｄｉｓｅａｓｅｓｔｅｍｍｉｎｇｆｒｏｍｔｈｅｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ（ＨＣＶ）．ＨＣＶｉｓｎｏｔｏｎｌｙｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆａｃｔｏｒｏｆｈｅｐａｔｉ...

四种抗原用于Dot-IGSS和Dot-ELISA诊断日本血吸虫病的比较

以日本血吸虫可溶性成虫抗原(AWA)、尿素溶解性成虫抗原(JWU)、硫酸铵沉淀成虫抗原(AW)和可溶性虫卵抗原(SEA),用斑点免疫金银染色试验(Dot-IGSS)和Dot-ELISA诊断日本血吸虫病.结果显示:Dot-IGSS法,4种抗原分别检测50例日本血吸虫病人血清,抗体检出率均达100.0%,50例正常人阴性符合率98.0%—100.0%,与肝吸虫病人的交叉反应率0%—2.0%(P>0.05),Dot-ELISA法、AWA、AW和SEA阳性符合率均为100.0%,JWU为90.0%,低于其它抗原(P<0.05),与正常人阴性符合率及肝吸虫病人交叉反应率分别为94.0%—100.0%及0%—6.0%.各抗原检出抗体滴度,Dot-IGSS均高于Dot-ELISA(P<0.05—0.01).抗原浓度在500.0μg/ml,两法抗体检出结果无差异(100.0%),至6.25μg/ml,酶标法检出率为0,而金标法仍为70.0%—80.0%(P<0.01).

三种抗原用于斑点免疫金银染色试验(Dot-IGSS)诊断华支睾吸虫病的研究

应用斑点免疫金银染色技术(Dot-IGSS),以华支睾吸虫成虫抗原(AWA)、尿素溶解性成虫抗原(CWU)和硫酸铵沉淀成虫抗原(AW)诊断华支睾吸虫病,60例血清抗体检出率均达100.0％,与正常人血清反应(60例)阴性符合率为93.3～96.6％,与日本血吸虫病人(60例)的交叉反应为0～5.0％,与囊虫病人(30例)和肝炎病人(15例)的交叉反应分别为3.3～6.7％和0。各抗原间未见显著性差异(P>0.05)。但与混合阳性血清反应,AW活性似较AWA和CWU强。

Dot-IGSS检测脑脊液中循环抗原诊断脑囊虫病的研究

应用斑点免疫金银染色法(Dot-IGSS)和Dot-ELISA检测96份确诊为脑囊虫病患者脑脊液(CSF)中的循环抗原(CAg),阳性率分别为94.79%和92.71%.检测51例非囊虫病者和62例其他脑部疾病患者的CSF,两种方法均为阴性.诊断指数分别为194.79%和192.71%,检测CAg的最小量Dot-IGSS为244ng/ml,Dot-ELISA为488ng/ml.试验表明两法诊断脑囊虫病均具有敏感性高、特异性强、重复性好和方法简便易行,有希望用于脑囊虫病的临床诊断.

Dot-IGSS和Dot-ELISA检测班氏微丝蚴血症者血清特异性抗体的比较研究

以马来丝虫成虫可溶性抗原作为靶抗原，采用斑点免疫金银染色（Dot－IGSS）和斑点酶联免疫吸附试验（Dot－ELISA）检测班氏微丝蚴血症者血清特异性抗丝虫抗体。Dot－IGSS和Dot－ELISA的检测阳性率分别为100％（50／50）和90％（45／50）。两法均为阳性反应的45份血清的滴度为1∶100－1∶2560．其平均滴度在Dot－IGSS为1∶184，在Dot－ELISA为1∶150。两法检测滴度相同者30例，Dot－IGSS滴度高于Dot－ELISA的13例，低于Dot－ELISA的2例。Dot－IGSS和Dot－ELISA所检测抗体滴度呈直线相关（r=0．8433）。与Dot－ELISA相比，Dot－IGSS具有操作简便、容易判断结果等优点，还具有更高的敏感性和特异性，且不使用酶反应底物。建议将Dot－IGSS作为丝虫病免疫学诊断和血清流行病学调查的方法。

兔病毒性出血症Dot-IGSS检测方法的建立

[目的]建立一种检测兔病毒性出血症IgG抗体的斑点免疫金银染色法(Dot-IGSS)。[方法]选择抗原包被浓度20μg/ml,被检血清稀释度11∶60;鼠抗兔IgG稀释度1∶200、金标羊抗鼠IgG稀释度1∶20的工作条件,用所建立的Dot-IGSS与血凝抑制试验(HI)对96头份被检血清进行平行检测。[结果]Dot-IGSS和HI的检测阳性率分别为94%和31%。[结论]所建立的Dot-IGSS是一种灵敏、特异和稳定的血清学检测方法,适用于兔病毒性出血症的诊断和抗体检测。

快速微量Dot—IGSS检测日本血吸虫病人血清中抗体的研究

本文用日本血吸虫可溶性虫卵抗原点于微孔滤膜上,以快速微量斑点免疫金银染色法(Rapid microvolume Dot-IGSS,Rm Dot-IGSS)检测血吸虫病患者血清中相应抗体,并与Dot-IGSS相比较,检测血吸虫病人血清69份,两法阳性率均为100％。检测正常人血清50份,两法阴性率均为100％。检测华支睾吸虫病人血清10份,两法均未出现交叉反应。检测肺吸虫病人血清10份,Rm Dot-IGSS未出现交叉反应,Dot-IGSS有1例出现交叉反应。

应用斑点免疫金渗滤法检测旋毛虫病患者血清IgG

目的 研究应用斑点免疫金渗滤法 (DIGFA)快速检测旋毛虫病患者血清抗旋毛虫IgG抗体。 方法 采用旋毛虫肌肉期幼虫膜抗原 ,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体 ,以颜色深浅为判断阳性标准。 结果 纯化的旋毛虫肌肉期幼虫膜抗原与患者血清中特异性抗旋毛虫IgG抗体通过渗滤在硝酸纤维素膜上反应 ,1 0min内即可直接观察结果。在 76份患者血清的检测中 ,阳性率为 94 .74 % ,与ELISA法的检出阳性率 86 .84 %相比差异无显著性 ( χ2 =2 .83,P >0 .0 5)。交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性。

滴金免疫测定法(DIGFA)检测血吸虫抗体的研究

目的建立一种简便、快速、敏感、特异的检测血吸虫抗体的新方法。方法用滴金免疫测定法（DIGFA）检测血吸虫病人血清抗体，并以ELISA作平行对照。结果DIGFA和ELISA的敏感性分别为97．1％和95．7％；特异性分别为99．1％和100％，两法无显著差异（P＞0．05）。62份其它寄生虫感染血清，除肺吸虫1例，ELISA呈阳性反应外，其余均为阴性。结论实验结果不仅显示了DIGFA的敏感性和特异性与ELISA相似，而且具有简便、快速、不需要特殊设备等优点，是一种值得推广应用的检测血吸虫抗体的新方法。

肺吸虫特异性IgG4快速检测方法的建立与应用

目的创建简易、快速、准确的肺吸虫病免疫诊断方法。方法用卫氏并殖吸虫成虫粗提液为抗原,以胶体金标记抗人IgG4单抗为检测探针,采用自行设计的垂直流渗滤装置,创建快速检测人血清肺吸虫特异性IgG4方法(P-IgG4-DIGFA),平行检测IgG作比较分析;以经典ELISA为对照,评价其诊断价值,应用P-IgG4-DIGFA检测有效治疗后病人血清,评价其疗效考核价值。结果P-IgG4-DIGFA检测人血清中肺吸虫特异性IgG4的敏感性和特异性分别为95.2%(40/42)、100%(50/50),与血吸虫病患者血清的交叉反应率仅为2%(1/50),未发现与华支睾吸虫病有交叉反应。P-IgG4-DIGFA的敏感性和特异性略高于经典ELISA,差异无统计学意义(χ2=0.25,P>0.05);应用P-IgG4-DIGFA检测有效治疗后3个月、6个月和12个月病人血清特异性IgG4,阴转率分别为0%、16.7%(1/6)和100%。结论金标渗滤法快速检测肺吸虫特异性IgG4,不仅操作简便、快速,而且敏感性高、特异性强,适用于临床检验和现场查病,对治疗后1年病人具有疗效考核价值,有待进一步开发应用。

曼氏裂头蚴可溶性抗原DIGFA法快速检测特异性抗体的潜在诊断价值

目的探索曼氏裂头蚴可溶性抗原金标免疫渗滤法快速检测曼氏裂头蚴特异性抗体的免疫诊断价值。方法从自然感染的青蛙中分离出曼氏裂头蚴,经口感染小鼠;于感染后第7周剖杀小鼠,收集鼠血清和虫体并计数。以曼氏裂头蚴可溶性抗原(PSA)为探针建立PSA-DIGFA,分别检测曼氏裂头蚴感染小鼠、健康小鼠、健康人群及其他寄生虫感染者血清中特异性抗体,并与常规ELISA法进行平行检测和比较。结果DIGFA法检测感染小鼠血清中特异性抗体的敏感性为100%(49/49)、特异性为100%(30/30),与ELISA法检测结果相同;不同虫荷数感染鼠间抗体水平差异无显著性(P>0.05),感染鼠与正常鼠之间抗体水平差异有显著性(P<0.01)。PSA-DIGFA检测健康人群血清100人份均为阴性,检测囊虫、包虫、旋毛虫、肺吸虫、华支睾吸虫病病人血清的阳性率分别为42.5%(17/40)、10.0%(2/20)、20.0%(5/25),80.0%(8/10)、8.0%(2/25)。结论用曼氏裂头蚴粗抗原检测感染动物血清中特异性抗体具有较好的敏感性和特异性,但与其他蠕虫感染存在较高的交叉反应。不同虫荷数感染鼠均产生较高水平抗体,组间差异无显著性。DIGFA法与ELISA法检测的敏感性和特异性相同,但前者更为简便、快速,无需特殊仪器设备,可单份检测,适合寄生虫病的临床检验和流行病学调查。若能进一步纯化检测用抗原,减少与其他蠕虫间的交叉反应,有潜在的应用价值。

斑点金免疫渗滤法在检测囊虫抗体中的应用

目的 将斑点金免疫渗滤法用于检测囊虫抗体 ,以制备囊虫病诊断试剂盒。方法 经透析的猪囊尾蚴囊液作为检验抗原 ,对 71份囊虫病患者、90份正常人和 2 0份其他病患者血清进行了斑点金免疫渗滤法检测并与酶联免疫吸附法比较。结果 斑点金免疫渗滤法的敏感性为 90 .1% (6 4 / 71) ,特异性为 95 .6 % (86 / 90 ) ,其他病患者血清反应中仅 1例脑肿瘤患者血清阳性 ,其余为阴性。斑点金免疫渗滤法和酶联免疫吸附法的符合率为94 .4 % (15 2 / 16 1)。

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜,然后用胶体金标记SPA,建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色,阳性者出现红色斑点,结果易于判断。整个试验过程仅需5min,操作简单,与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot-ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较,符合率达98.4％和98.9％。说明该法微量、特异、敏感可靠,检测时间短,效果直观,非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。

免疫胶体金标记技术及其在植物保护上的应用前景

综述了胶体金制备、质量鉴定方法 ,胶体金探针的制备、纯化方法 ,以膜为固相载体的免疫胶体金快速试验即免疫层析和免疫渗滤试验技术 ,以及免疫胶体金标记技术在植物保护研究领域中的应用前景。

检测家畜血吸虫抗体的二步金标免疫渗滤法研究

将待检家畜血纸浸出液点在硝酸纤维素膜上，以金标记的血吸虫虫卵可溶性抗原为探针（以下简称血吸虫抗原胶体金），建立了检测家畜血吸虫抗体的二步金标免疫渗滤法（Two-step Dot Immunogold Filtration Assay，T—DIGFA）。家畜血吸虫病阳性血样在50-90S形成肉眼可观察的红色斑点，可进行快速诊断。该法可以检测出人工感染血吸虫尾蚴7d和7d以上的阳性牛和兔血纸抗体，与肝片吸虫、锥虫、蛔虫病之间无交叉反应。T—DIGFA检测粪孵血吸虫毛蚴阳性牛血纸139份、阴性牛血纸130份，与粪孵法阳性符合率为100％，阴性符合率为99．2％；T—DIGFA与斑点酶联SPA法阳性符合率和阴性符合率完全相同。血吸虫抗原胶体金在4～8℃保存期可达6个月、室温保存期为3个月。试验证实，T-DIGFA有很高的敏感性、特异性、重复性和稳定性，适合于基层单位和现场进行家畜血吸虫病抗体的快速诊断、普查和检疫。

斑点免疫金渗滤法同时检测猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征抗体的研究

在猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征单重斑点免疫金渗滤法的基础上,建立能同时检测HC和PRRS的双重斑点免疫金渗滤法。将提纯的HC和PRRS抗原同时包被在硝酸纤维膜上,利用胶体金标记SPA显色,当猪血清中含有HC、PRRS抗体时,则相应的点会显现红色(呈红色斑点),结果易于判断。且操作简单,耗时短,与猪细小病毒、口蹄疫和猪伪狂犬病毒阳性血清不发生交叉反应。

胶体金免疫渗滤法检测日本血吸虫病血清抗体的研究

应用建立的胶体金免疫渗滤法检测日本血吸虫病血清抗体,并以快速酶联免疫吸附试验(F-ELISA)方法检测作平行对照。现场和实验室试验表明,胶体金渗滤法与F-ELISA方法在敏感度和特异度的差异无统计学意义(P>0.05),两法具有较高的一致性。但胶体金免疫渗滤法操作简便快速,无特殊要求,在临床和现场防治工作中具有比较广泛的应用前景。

免疫胶体金技术效能评价

目的对 3种免疫胶体金技术 (DIGFA)检测试条 (卡 )检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒抗体 (抗HCV)、梅毒螺旋体抗体 (抗TP)和艾滋病病毒抗体 (抗HIV)的性能进行评价 ,为各血液中心传染病检测实验室选用提供参考。方法对多份质控血清和 4 2 1 4份患者血清或血浆分别采用 3个厂家的DIGFA试条 (卡 )和酶免疫法 (EIA)进行检测 ,以EIA技术为参照 ,对DIGFA试条 (卡 )的灵敏度、特异性、检测效率和物理性能等参数进行评价。结果多份质控血清 4个项目DIGFA试条 (卡 )检测特异性均为 1 0 0 % ,HBsAg、抗HIV、抗HCV和抗TPDIGFA试条 (卡 )检测的灵敏度分别为 86 .6 7%、93.33%、86 .6 7%和 90 .4 7% ;检测效率分别为 91 .1 1 %、96 .6 7%、93.33%和 94 .4 5 %。 4 2 1 4份患者血清 (血浆 )的HBsAg、抗HIV、抗HCV和抗TPDIGFA试条 (卡 )的检测特异性分别为 99.6 7%、99.76 %、99.5 6 %和 99.79% ;灵敏度分别为 6 8.35 %、1 0 0 .0 0 %、5 6 .4 1 %和 73.33% ;检测效率分别为 97.6 0 %、99.76 %、98.77%和 99.6 9%。结论DIG FA试条 (卡 )检测灵敏度比较低 ,花费成本较大。该技术可用于急诊病人的初步筛选 ,不适于献血员筛选试验。

快速斑点免疫金渗滤法检测血清中囊虫抗体的研究

为建立一种快速敏感、适于基层应用的检测囊虫抗体的方法 ,将囊尾蚴抗原点于硝酸纤维素膜 (NC)上 ,用来检测血清中囊虫抗体 ,通过胶体金标记的金黄色萄萄球菌A蛋白(SPA)直接显色 ,阳性者出现红色斑点 ,结果易于判断。结果表明 ,整个试验过程仅需 5分钟 ,操作简单 ,用该法与酶联免疫吸附试验对比检测 5 7份囊虫患者血清标本 ,2法均阳性为 5 4份 ,2法均阴性为 1份 ,总符合率为 95 %。结果提示斑点免疫金渗滤法简便、快速、适于基层应用 。