人C-反应蛋白磁微粒化学发光酶免疫测定法的建立

人C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是炎症以及各种相关疾病如病毒感染、心血管疾病等诊断、治疗和预后的临床检测指标。为了建立一种快速、准确的CRP定量免疫测定方法,将表达纯化的重组CRP作为抗原免疫小鼠,获得了5株稳定分泌抗体的单克隆抗体细胞株,采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)初步鉴定筛选的抗人CRP单克隆抗体,并分别选择mAb 9D6和mAb 9G4作为捕获抗体与检测抗体,建立用于人CRP检测的化学发光酶免疫测定法(chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA),最后通过测定分析临床血清CRP样本,评价CLEIA的性能。结果显示,基于9D6/9G4-AP单克隆抗体对的CLEIA测定范围为0.1767~500μg/L(可扩展至100 mg/L);所建立的CLEIA与医院采用的免疫散射比浊法(R^(2):0.9496,P<0.0001)表现出良好的相关性,且Bland-Altman分析中96.36%(106/110)的点在95%一致性界限范围内显示两种检测方法具有较好的一致性。结果初步表明,建立的分析方法在临床诊断中具有较好的应用前景。

新型冠状病毒中和抗体与特异性抗体检测结果一致性分析

目的探讨新型冠状病毒(SARS-CoV-2)中和抗体与特异性IgM、IgG抗体的一致性,为疫苗接种人群特异性抗体检测结果的临床解读提供依据。方法选取排除SARS-CoV-2感染的健康医务人员148名,其中127名接种过SARS-CoV-2疫苗(按样本采集日期与第2剂疫苗接种日期的时间间隔分为14~30 d组、31~60 d组、61~90 d组、91~120 d组、121~150 d组、>150 d组),21名未接种SARS-CoV-2疫苗。采用胶体金免疫层析法(LFIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测SARS-CoV-2中和抗体,采用磁微粒化学发光免疫分析法检测特异性IgM、IgG抗体,分析3种方法检测结果的一致性。结果14~30 d组ELISA中和抗体、LFIA中和抗体、特异性IgG抗体的阳性率均为100.00%,特异性IgM抗体阳性率为27.27%。随着疫苗接种时间的延长,3种方法的抗体阳性率均逐渐下降。31~120 d各组特异性IgG抗体阳性率均最高,121~150 d组和>150 d组ELISA中和抗体阳性率最高。ELISA中和抗体检测结果与LFIA的总符合率为85.14%,一致性一般(Kappa=0.698);与特异性IgM抗体的总符合率为60.14%,一致性较差(Kappa=0.144);与特异性IgG抗体的总符合率为82.43%,一致性一般(Kappa=0.649)。特异性IgG抗体与LFIA中和抗体检测结果的总符合率为83.78%,一致性一般(Kappa=0.677)。结论磁微粒化学发光免疫分析法特异性IgG抗体检测结果与LFIA、ELISA中和抗体检测结果的符合率>80%,但一致性一般,需谨慎解读特异性IgG抗体阳性结果。

化学发光免疫法测定胰岛素的研究

作者以ABEI标记抗体,用双抗夹心法测定胰岛素含量,其固相化学发光采用 ABEI-CoCl_2-H_O_2体系,线性范围为每管0.3～150μU胰岛素,双对数回归方程的相关系数为0.985,绝对检测限为每管0.32μU胰岛素。

人骨钙素检测化学发光法的建立及性能评价

目的建立一种灵敏的定量检测人骨钙素的方法。方法采用磁微粒化学发光法定量检测人血清中的骨钙素含量,反应模式为双抗夹心法,生物素化捕获抗体,辣根过氧化物酶标记检测抗体与血清(校准品)及包被有链霉亲合素的磁微粒构成完整的分析系统。并对本方法进行条件优化、性能评估以及相关性分析。结果建立的人骨钙素磁微粒化学发光法线性范围为0.46～280.25 ng/mL,空白限为0.23 ng/mL,重复性和期间精密度(CV)分别小于8%和10%,回收试验回收率在103%～108%之间;血红蛋白、总胆红素和三酰甘油对骨钙素检测无干扰作用;在120例临床血清样本中,该方法检测骨钙素结果和罗氏电化学发光法结果相关系数(r)为0.992。结论建立的定量检测人骨钙素的磁微粒化学发光法精密度好、线性范围宽、灵敏度高,达到临床测定的需求。

人β-hCG化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种检测人血清hCG浓度的双抗体夹心化学发光免疫分析方法。方法采用2种高特异性的抗β-hCC单克隆抗体，以一种包被微孔板制成固相抗体，另一种标记碱性磷酸酶，以金刚烷衍生物为底物，采用双抗体夹心法检测人血清hCG浓度，并与进口试剂进行比较。结果以5μg／ml单克隆抗体包被微孔板，酶结合物以1：10000稀释，在室温条件下检测，可测范围为5—540mIU／ml，灵敏度为0．143mIU／ml，批内、批间平均变异系数分别为5．28％和7．05％，平均回收率为98．77％，范围为92．3％．108．6％，与TSH、FSH和LH的交叉反应率均小于0．01％。与国外同类试剂有良好的相关性。结论该方法有较高的灵敏度、精密性和准确性。

血清cPSA、tPSA及C/TPSA比值在前列腺癌诊断中的应用

目的探讨血清复合态的PSA(complexed PSA,cPSA)、血清总PSA(total PSA,tPSA)及cPSA/tPSA(C/TPSA)比值对前列腺癌(prostatic cancer,PCa)与良性前列腺增生(benign prostatic hypertrophy,BPH)的鉴别诊断价值。方法对30例PCa(PCa组)患者和50例BPH(BPH组)患者采用Bayer公司的双抗体夹心磁微粒化学发光免疫法检测cPSA、tPSA的水平,并计算C/T PSA比值。应用ROC曲线图分析C/T PSA比值对PCa的诊断意义。结果 BPH组患者C/T PSA比值及血清cPSA、tPSA水平均显著低于PCa组(均P<0.01)。以0.82筛选界值时,敏感性为83.3%(25/30)。结论 cPSA、C/T PSA比值对PCa和BPH有重要的鉴别诊断价值。

单核细胞增生性李斯特菌化学发光免疫检测法的建立及验证

目的建立检测单核细胞增生性李斯特菌(简称单增李斯特菌)化学发光法并进行验证。方法以单增李斯特菌免疫原分别免疫BALB/c小鼠及新西兰大白兔,制备鼠源单抗和兔血清多抗,建立检测单增李斯特菌化学发光免疫法,优化兔血清多抗包被浓度及单增李斯特菌反应时间,验证方法的检测范围、灵敏度、特异性、准确性及稳定性。结果制备的单增李斯特菌兔血清多抗及鼠源单抗效价分别为1∶256 000和1∶128 000。兔血清多抗最适包被浓度为0.05 mg/mL,与单增李斯特菌最适反应时间为40 min。该方法检测单增李斯特菌浓度范围为1×10^(1)~1×10^(7)C^FU/m L,灵敏度小于10 CFU/mL;除单增李斯特菌ATCC19115外,单增李斯特菌CMCC54003、CMCC54004、英诺克李斯特菌也可检测到,金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌,沙门菌未检出;添加1×10^(4)CFU/mL单增李斯特菌的火腿肠、牛奶及冰激凌溶液中回收率分别为90.3%、101.6%和969.3%;包被好的化学发光板密闭封装37℃放置28 d后,单增李斯特菌发光值为初始包被值的75.3%。结论成功建立了检测单增李斯特菌化学发光法,该方法具有检测时间短、范围宽,特异性强等特性,为促进食品安全检测提供了参考依据。