双抗体夹心酶联免疫法检测不同样品中的蓖麻毒素

目的应用酶联免疫吸附分析方法(ELISA)检测待测样品中的蓖麻毒素。方法用蛋白G亲和层析柱纯化蓖麻毒素单克隆抗体(4C13,3D74,5E4和5H6),以3D74及辣根过氧化物酶(HRP)标记的4C13建立的双抗体夹心ELISA对含有蓖麻毒素的多种样品进行检测。结果抗蓖麻毒素的单克隆抗体经亲和层析纯化后具有较高的蛋白纯度,应用HRP标记的4C13与3D74建立双抗体夹心ELISA,对于溶解于磷酸缓冲液中的蓖麻毒素标准品的检测灵敏度可达2.5μg·L-1;对于土壤、面粉、牛奶、咸菜汁、雪碧、可乐和腐乳汁中的蓖麻毒素样品检测的灵敏度为2.5～5.0μg·L-1;与磷酸缓冲液样品相比较,含有相同浓度蓖麻毒素的小鼠和人血清样品ELISA的阳性结果明显减弱。结论双抗体夹心酶联免疫法能够有效用于含有蓖麻毒素样品的检测分析。

SARS患者康复期血清特异性抗体效价检测

目的 :SARS患者康复期血清特异性抗体的效价。方法 :采用间接酶联免疫法和双抗原夹心法。结果 :SARS患者康复期血清特异性抗体IgG水平在住院第 5周达最高值 ,IgM水平在住院第 3周达到最高值。SARS患者康复期血清IgG水平是IgM的 1～ 7倍。住院 5～ 7周的SARS康复期患者 ,其血清特异性抗体检测阳性率达 10 0 %。结论 :SARS患者康复期血清特异性抗体水平在住院第 5周达到最高值 ,其阳性检出率达 10 0 %。

首发阳性亚型精神分裂症患者血清神经调节蛋白1水平的研究

目的建立神经调节蛋白1(Neuregulin1,NRG1)蛋白测定方法并探测阳性亚型精神分裂症患者血清NRG1蛋白水平变化。方法应用双抗体夹心法原理,以单克隆IgG NRG1抗体作为标记抗体,与该单克隆抗体抗原结合表位不同的NRG1多克隆抗体作为包被抗体,125I作为放射标记物,建立间接NRG1蛋白放射免疫测定方法,并测定33名正常对照和21例首发阳性亚型精神分裂症患者治疗前、治疗1周末、2周末、3周末和4周末血清NRG1蛋白变化。所有患者服用维思通4～6 mg/d。结果双抗体夹心法可以用于间接测定血清NRG1蛋白;患者组治疗前、治疗1周末、2周末、3周末NRG1蛋白平均每分钟计数(countings per minute,CPM)低于对照组,差异均有统计学意义(t值分别为5.33、4.61、4.24、2.86,P值均小于0.01),第4周末与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。患者组不同治疗时间NRG1水平的差异有统计学意义(F=6.37,P<0.001),第4周与第1周、第2周、第3周相比差异有统计意义(P<0.05),余两两差异均无统计学意义(P>0.05)。PANSS减分率与CPM的变化无明显相关(r=0.27,P=0.25)。结论阳性亚型精神分裂症患者血清NRG1蛋白水平降低,经抗精神病药物治疗后可恢复。

定量测定硫酸软骨素的双抗体夹心ELISA的建立

目的建立定量测定硫酸软骨素(CS)的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并对其应用价值进行初步评价。方法以CS为抗原分别免疫Balb/c小鼠和日本大耳白兔,制备2种动物的多克隆抗体。用鼠抗体包被微孔板,兔抗体为第2抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔抗体为标记抗体,建立双抗体夹心ELISA,并对线性范围、精密度、回收率和方法学比较进行了评价。结果本研究建立的ELISA线性范围为2～500 mg/L,批内和批间精密度分别为4.48%和5.97%,回收率在99.52%～101.77%之间,与间苯三酚分光光度法测定结果具有良好的相关性(r=0.999 0,P<0.05)。结论建立的定量测定CS的双抗体夹心ELISA具有敏感性高、重现性好等优点,适合检测应用。

人β-hCG化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种检测人血清hCG浓度的双抗体夹心化学发光免疫分析方法。方法采用2种高特异性的抗β-hCC单克隆抗体，以一种包被微孔板制成固相抗体，另一种标记碱性磷酸酶，以金刚烷衍生物为底物，采用双抗体夹心法检测人血清hCG浓度，并与进口试剂进行比较。结果以5μg／ml单克隆抗体包被微孔板，酶结合物以1：10000稀释，在室温条件下检测，可测范围为5—540mIU／ml，灵敏度为0．143mIU／ml，批内、批间平均变异系数分别为5．28％和7．05％，平均回收率为98．77％，范围为92．3％．108．6％，与TSH、FSH和LH的交叉反应率均小于0．01％。与国外同类试剂有良好的相关性。结论该方法有较高的灵敏度、精密性和准确性。

基于钴金属有机骨架材料（ZIF-67）催化性能的牛奶中大肠杆菌O157:H7快速定量检测

建立一种基于金属有机骨架催化性能的快速定量检测牛奶中大肠杆菌O157:H7的方法。以2-甲基咪唑和CoCl2 6H2O为原料,Bola型两亲性表面活性剂为溶剂合成一种钴金属有机骨架材料(ZIF-67)。对ZIF-67的催化性能进行研究,发现ZIF-67具有和辣根过氧化物酶类似的催化活性,并能在无过氧化氢存在的情况下催化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺显色。基于此建立一种通过磁性微球进行特异性富集,通过检测与靶标结合的ZIF-67的量间接检测牛奶中大肠杆菌O157:H7的方法,该方法的检测范围为17~1.7×108 CFU/mL,检测限为17 CFU/mL,检测过程在1 h以内。该方法能快速、简单、高灵敏度、高选择性定量地检测出牛奶中的大肠杆菌O157:H7,在食源性致病菌的快速筛查中具有重要的应用价值。

健康成年人血清血管内皮生长因子生物学参考区间的确立

目的 探讨健康成年人血清中血管内皮生长因子的生物学参考区间.方法 收集2018年11-12月在该院体检的健康成年人为研究对象,收集其血清标本.采用双抗体夹心法进行血管内皮生长因子水平的测定,根据不同性别、不同年龄进行分组,比较不同组间血管内皮生长因子水平,并利用SPSS统计学软件进行统计学分析.结果 血管内皮生长因子水平在不同性别之间差异有统计学意义(P<0.05),不同年龄组之间差异无统计学意义(P>0.05).男性血管内皮生长因子水平参考区间为18.36~158.60 pg/m L,女性参考区间为16.11~121.46 pg/m L.结论 根据不同性别建立了该实验室血清中血管内皮生长因子的生物学参考区间,为临床的相关疾病诊断提供了参考标准.

双抗原夹心法和间接法检测丙型肝炎病毒抗体对比研究

目的:研究双抗原夹心法和间接法酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙型肝炎病毒(HCV)抗体的临床价值。方法:选取输血前、术前及孕前拟行HCV抗体检测的患者1674例,采用促凝管取患者空腹肘静脉血5ml,以3000r/min离心10min后取上清-20℃保存备用,分别采用间接ELISA法和双抗原夹心ELISA法检测抗-HCV抗体,所有操作均严格按照试剂盒内说明书要求完成,采用一致性Kappa检验分析间接法和双抗原夹心法诊断价值。结果:上海科华间接法、英科新创间接法和北京万泰双抗原夹心法对HCV检出率分别为4.30%、4.06%和3.52%(P>0.05),且三种检测试剂吸光度值/临界值(S/CO)差异均无统计学意义(P>0.05);以确证实验结果为“金标准”,间接ELISA法检测HCV灵敏度为94.00%,特异度为98.27%,阳性预测值为62.67%,阴性预测值为99.81%,准确率为98.15%,一致性Kappa为0.743;双抗原夹心法检测HCV灵敏度为97.91%,特异度为99.26%,阳性预测值为79.66%,阴性预测值为99.94%,准确率为99.22%,一致性Kappa为0.875;McNemar检验结果显示,间接法和双抗原夹心法检测HCV结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:双抗原夹心ELISA法用于HCV检测灵敏度和特异度均明显高于间接ELISA法,对控制HCV感染和传播具有较高临床价值和应用前景。

双抗原夹心法和间接法检测丙型肝炎病毒抗体的结果分析

目的比较双抗原夹心法和间接法检测丙型肝炎病毒抗体的结果。方法以血站进行无偿献血的人次作为研究对象,其中28982份标本使用双抗原夹心法检测作为实验组,27603份标本使用间接法检测作为对照组。比较两组的阳性检出率、复检率以及复检合格率,分析两种试剂的临床检测结果。结果实验组标本中检测出16份双试剂阳性标本,27份单试剂阳性可疑标本,对27份可疑标本进行复检后,有26份合格,1份不合格;对照组标本中检测出14份双试剂阳性标本,42份单试剂阳性可疑标本,对42份可疑标本进行复检后,有22份合格,20份不合格。实验组复检率为0.09%,复检合格率为96.30%;对照组复检率为0.15%,复检合格率为52.4%。实验组复检率低于对照组,复检合格率高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。实验组双试剂阳性率为0.06%,对照组双试剂阳性率为0.05%,比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论在血站对无偿献血人群进行检测时,可以选择双抗原夹心法对丙型肝炎病毒抗体进行检测,检测有效率要高于间接检测方法,降低了假阳性结果的出现几率,避免了血液浪费的现象出现,也减少了献血者淘汰的几率,值得在今后血站进行推广使用。

花生致敏蛋白Ara h 1双抗体夹心ELISA法的建立

为建立用于花生致敏蛋白Ara h 1快速、灵敏、特异检测的双抗体夹心ELISA法,以Ara h 1鼠源单抗(mAb)为捕获抗体,以Ara h 1兔源多抗(pAb)为检测抗体,通过棋盘法优化抗体工作浓度建立方法,并对方法的灵敏度、特异性、准确度、稳定性等检测特性进行鉴定。结果表明,双抗体夹心ELISA法的mAb和pAb最佳工作浓度分别为1∶10000稀释和1∶8000稀释;ELISA标准曲线线性范围为4~256 ng/mL,检测限为4.16 ng/mL;样品添加回收试验的平均回收率为85.9%~94.5%,且该方法与其他常见致敏蛋白无交叉反应;并能在4℃条件下避光密封保存90 d内保持检测结果稳定。说明所建立的双抗体夹心ELISA法灵敏特异、准确稳定,能够用于花生致敏蛋白Ara h 1的快速筛查。

血清促红细胞生成素的双抗体夹心ELISA法和ELISA试剂盒的建立及其方法学研究

目的建立血清促红细胞生成素(EPO)的ELISA试剂盒及一种检测血清EPO的双抗体夹心ELISA方法,并对其临床检测方法学进行研究。方法EPO抗体用缓冲液稀释,150μL/孔滴加到96孔板,用以包被。以正常人血清和临床血清为标本,用ELISA法观察其灵敏度、回收率、线性试验、稳定性。结果最佳包被抗体浓度为1∶600,最佳抗原工作浓度为1∶100,酶标抗体工作浓度为1∶5000。标准曲线的回归方程为:y=0.017x+0.3002,r=0.9710,P<0.05。灵敏度为0.46U/L,高、低浓度样品平均回收率分别为106.74%、104.78%。血清标本20、80U/L批内变异分别为3.044%、7.964%,批间变异分别为1.379%、12.915%。结论双抗体夹心ELISA法检测血清EPO,其敏感性、特异性、准确度均良好,为临床快速、准确、方便检测EPO提供了实验依据。

基于金属-生物分子骨架(Bio-MOF-11)材料催化性能的牛奶中大肠杆菌O157:H7快速定量检测

本研究的目的是建立一种基于金属-生物分子骨架催化性能的快速定量检测牛奶中大肠杆菌O157:H7的新方法。以腺嘌呤和醋酸钴为原料,N,N-二甲基甲酰胺(DMF)为溶剂合成一种钴金属-生物分子骨架(Bio-MOF-11)。对Bio-MOF-11的催化性能进行研究,发现Bio-MOF-11具有和辣根过氧化物酶(HRP)类似的催化活性,并能在无过氧化氢(H2O2)存在的情况下催化3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)显色。基于此建立一种通过磁性微球进行特异性富集,通过检测与靶标结合的Bio-MOF-11的量间接检测牛奶中大肠杆菌O157:H7的方法,该方法的线性范围为3×10^3-6 CFU/mL,检测限为8 CFU/mL,检测时间为25 min。该方法能快速,简单,高灵敏度、高选择性定量地检测出牛奶中的大肠杆菌O157:H7,在食源性致病菌的快速筛查中具有重要的应用价值。

胃粘膜癌前病变患者胃液中CEA、CA19-9、CA72-4检测的临床意义

目的:通过对胃粘膜癌前病变患者胃液CEA、CA19-9、CA72-4的单检及联合检测,探讨其临床意义。方法:采用双抗体夹心法对胃液中CEA、CA19-9、CA72-4进行检测,并对胃粘膜癌前病变患者进行分组,包括萎缩性胃炎伴非典型增生共90例:分轻(B)、中(C)、重度(D)三组,分别各30例,萎缩性胃炎伴肠上皮化生30例(E组),萎缩性胃炎伴肠上皮化生及非典型增生30例(F组),与对照组(A组):慢性浅表性胃炎或正常胃粘膜30例进行对比分析,结果进行统计学处理。结果:萎缩性胃炎伴非典型增生,萎缩性胃炎伴肠上皮化生,萎缩性胃炎伴肠上皮化生及非典型增生各组与浅表性胃炎或正常胃粘膜对照组比较有显著性差异。CEA、CA19-9、CA72-4三种肿瘤标志物单检及联合检测的灵敏度、特异度分别为:CEA:56.32%,61.28%,CA19-9:63.28%,63.20%,CA72-4:69.27%70.32%,CEA+CA19-9:69.90%,70.92%,CEA+CA72-4:72.56%,73.36%,CA19-9+CA72-4:72.98%,73.32%,CEA+CA19-9+CA72-4:75.26%,76.38%。结论:胃液中CEA、CA19-9、CA72-4单检或联合检测均能反映出胃粘膜癌前病变的程度,提示对胃的癌前疾病进行追踪随诊,对早期发现胃癌有重要的临床意义。

ELISA中和(竞争)抑制法检测HBeAb试剂盒共系统检测HBeAg结果分析

目的探讨用中和(竞争)抑制法检测HBeAbEIA[(预包被纯化乙肝e抗体(HBeAb]商品试剂盒共系统检测乙肝e抗原(HBeAg)的可行性及结果判定方法。方法用中和(竞争)抑制法检测HBeAbELISA试剂盒共系统检测1000份随机血清(浆)标本HBeAb与HBeAg,并与常规ELISA双抗体夹心法检测HBeAg试剂盒检测HBeAg作平行对照。结果ELISA共系统检测HBeAg,其阳性检测孔显色较HBeAg阴性参比对照孔明显加深,甚至比HBeAb阴性对照孔还深(或明显加深),易于目测;其比色判定临界值(COV)易于设定(或使用HBeAg临界值血清或HBeAb阴性对照),与常规ELISA检测HBeAg比色判定无显著性差异(配对计数资料比较的χ2检验:相关检验均为P<0.005,υ=1,a=0.05;优劣检验依次为HBeAg临界值血清①P>0.900,υ=1,a=0.05;HBeAb阴性对照②0.100>P>0.050,υ=1,a=0.05;ELISA共系统检测HBeAgCOV③0.100>P>0.050,υ=1,a=0.05;但χ12<χ22<χ32)。结论用中和(竞争)抑制法检测HBeAbELISA商品试剂盒能够兼测HBeAg,在有优质现代酶标仪的实验室,可以省去常规ELISA双抗体夹心法检测HBeAg试剂盒,实用价廉,值得推广。

ELISA竞争抑制法检测Anti-HBe试剂盒共系统检测HBeAg结果分析

目的探讨用竞争抑制法检测Anti-HBeEIA[预包被纯化乙肝e抗原]商品试剂盒共系统检测HBeAg的可行性及结果判定方法。方法用竞争抑制法检测Anti-HBeELISA试剂盒共系统检测1000份随机血清(浆)标本Anti-HBe与HBeAg,并与常规ELISA双抗体夹心法检测HBeAg试剂盒检测HBeAg作平行对照。结果ELISA共系统检测HBeAg,其阳性检测孔显色较Anti-HBe阴性对照孔(或HBeAg阴性参比对照孔)明显加深,易于目测;其比色COV易于设定(或使用HBeAg临界值血清),与常规ELISA检测HBeAg比色判定无显著性差异[配对计数资料比较的χ2检验:相关检验均为P<0.005,υ=1,a=0.05;优劣检验依次为HBeAg临界值血清(1)P>0.9000,υ=1,a=0.05、中和(竞争)抑制法检测Anti-HBeEIA商品试剂盒中Anti-HBe阴性对照(2)0.100>P>0.050,υ=1,a=0.05、ELISA共系统检测HBeAgCOV(3)0.100>P>0.050,υ=1,a=0.05,但χ21<χ22<χ23]。结论用竞争抑制法检测Anti-HBeELISA商品试剂盒能够兼测HBeAg,在有优质现代酶标仪的实验室,可以省去常规ELISA双Ab夹心法检测HBeAg试剂盒,实用价廉,值得推广。

大豆脂肪氧化酶同功酶联合鉴定技术的建立

本研究目的是建立一套适宜于育种后代材料脂肪氧化酶缺失类型筛选鉴定的方法。首先选择适用于近等基因系材料的消减免疫法,以单缺Lox2的J12-2作为耐受原,将含有3种Loxs的Soybean Lox(Type I-B)作为抗原,利用该方法筛选到1株能稳定分泌Lox2单抗的杂交瘤细胞株Lox2-1。在解决了Lox2单抗的基础上,进一步以纯化的Lox1和Lox3作抗原,按常规方法,制备并筛选到1株能稳定分泌Lox1单抗的杂交瘤细胞株Lox1-1,4株Lox3的杂交瘤细胞株Lox3-1、Lox3-2、Lox3-3和Lox3-4;利用腹水诱导法生产其细胞株抗体,腹水效价在1∶20 000与1∶800 000之间,经鉴定6株单抗均具有较强的特异性。以Soybean Lox(TypeI-B)作抗原制备兔多克隆抗体血清,其针对Lox1、Lox2和Lox3的效价均达到1∶76 800。最终建立了以兔多抗作固相抗体,Lox1-1、Lox2-1、Lox3-4分别作检测抗体的对大豆脂氧酶缺失类型进行联合鉴定的技术体系,该技术不但为无腥大豆育种提供了技术保障,还为其他同工酶检测技术的开发积累了宝贵经验。

一种糖类抗原242全自动管式化学发光定量免疫检测试剂的建立

目的建立一种全自动测定血清糖类抗原242(CA242)的管式化学发光定量免疫检测试剂。方法采用均相磁微粒标记技术与高灵敏的吖啶酯化学发光技术,依据双抗体夹心原理,以4株单克隆抗体为原料进行配对单抗筛选,从而建立CA242化学发光磁微粒测定试剂,并在全自动管式化学发光仪上对其灵敏度、精密度、回收率与相关性等进行初步评价。结果筛选的最优单抗配对7C10(包被)-3H1(标记)的反应活性最高,且CA19-9和CA50对CA242检测的干扰很小。该试剂的分析灵敏度为0.69 U/ml,高浓度样本精密度为3.0%,低浓度样本精密度为5.7%,回收率为101.5%。与当前主流的商品化试剂的定量相关性良好(y=1.027x–0.2991,r=0.9911,P<0.05)。结论利用抗CA242单抗为原料建立CA242全自动管式化学发光定量免疫检测试剂,该试剂性能良好,所有检测操作均由仪器自动完成,可满足目前临床医学的高通量检测需求。

促甲状腺素酶联免疫吸附试验在新生儿疾病筛查中的应用

目的:探讨新生儿疾病筛查中促甲状腺素(TSH)酶联免疫吸附试验操作实验的影响因素,有效控制实验结果的准确度,避免假阳性结果的出现。方法:对每次实验结果进行认真分析,总结其实验结果的影响因素。结果:通过进行TSH酶联免疫吸附试验操作实验,有效提高了实验结果的准确性,减少了实验结果的假阳性和召回率,节约了人力和物力。结论:在实际TSH酶联免疫吸附试验操作实验中的经验总结简明、实用,能有效地控制好实验的精确度,提高实验结果的准确度,适宜推广。

PTH单克隆抗体的制备与初步应用

甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)是一种只有84个氨基酸(amino acid,aa)的直链多肽激素,是调节钙磷代谢的主要激素之一。临床上通过测定PTH来评估骨转换、肾脏疾病以及血液透析患者的预后。本研究旨在通过制备抗PTH的单克隆抗体建立一种快速检测PTH的方法。首先,以化学合成法合成PTH多肽并将多肽偶联至血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)上,通过皮下注射的方式免疫BALB/c小鼠。其次,经过细胞融合以及杂交瘤细胞的筛选,共获得5株稳定分泌抗PTH的单克隆抗体,并对其进行了制备和纯化。再次,采用方阵棋盘滴定法进行抗体配对筛选,并以9B6和22E8抗体分别作为捕获抗体与酶标抗体,建立了检测PTH的双抗体夹心酶联免疫吸附测定(double-antibody sandwich enzyme linked immunosorbent assay,dsELISA)方法。最后,在保证灵敏度的情况下对所建立的方法进行了工作浓度的优化,该方法的检测灵敏度可达0.14ng/mL;在0.5~8.0 ng/mL的范围内,其R2达到了0.9858,有着较好的线性;其精密度在10%以下,保证了批间的稳定性。综上所述,本研究成功制备了抗PTH的单克隆抗体,建立了PTH的ELISA检测方法,该方法具有良好的线性相关性、准确度和精密度,可用于PTH含量的检测。

ELISA(双抗体夹心法)共系统检测抗-HBe与HBeAg结果分析

目的探讨用双抗体夹心法检测HBeAgEIA商品试剂盒共系统检测抗-HBe与HBeAg的可行性及结果判定方法。方法用双抗体夹心法检测HBeAgELISA试剂盒结合配套中和(竞争)抑制法检测抗-HBeELISA试剂盒中的中和试剂(HBeAg)等试剂组分共系统检测1000份随机血清(浆)标本抗-HBe与HBeAg,并分别以常规ELISA检测抗-HBe与HBeAg作平行对照。结果ELISA共系统检测抗-HBe与HBeAg易于目测;它们的比色判定临界值同常规ELISA易于设定(或使用临界值血清,检测HBeAg时也使用抗-HBe阴性对照),与常规ELISA检测比色判定无显著性差异(配对计数资料比较的χ2检验:相关检验均为P<0.005,υ=1,a=0.05;抗-HBe优劣检验(ELISA共系统检测抗-HBe前两项COV与抗-HBe临界值血清)均为P>0.900,υ=1,a=0.05;HBeAg优劣检验依次为HBeAg临界值血清:(1)P>0.900,υ=1,a=0.05,抗-HBe阴性对照;(2)0.100>P>0.050,υ=1,a=0.05,ELISA共系统检测HBeAgCOV;(3)0.100>P>0.050,υ=1,a=0.05,但χ21<χ22<χ23)。结论用双抗体夹心法检测HBeAgELISA试剂盒与配套中和(竞争)抑制法检测抗-HBeELISA试剂盒试剂组分重组共系统检测抗-HBe与HBeAg是可行的,两种试剂盒能够相互替代,在有优质现代酶标仪的实验室,可以省去常规ELISA试剂盒其中之一,实用价廉,值得推广。