The Application of Quantum Dots Double-Labeling Immunofluorescence Technology in Detection of PR and CD146 in Paraffin-Embedded Tissue Sections of Endometrioid Adenocarcinoma

Objective: The aim was to detect the expression of PR and CD146 in paraf-fin-embedded tissue sections of endometrioid adenocarcinoma by using QDs double-labeling immunofluorescence, and evaluate the applied value of QDs double-labeling immunofluorescence in endometrioid adenocarcinoma. Methods: To detect the expression of PR and CD146 on 140 cases of paraffin-embedded tissue sections of endometrioid adenocarcinoma by using QDS double-labeling immunofluorescence. Results: The co-expression of PR and CD146 in the endometrioid adenocarcinoma can be detected by QDs double-labeling immunofluorescence, and there was no correlation between them (P > 0.05). Conclusion: QDs double-labeling immunofluorescence can detect the localization and co-expression of PR and CD146 in the endometrioid adenocarcinoma.

Nogo蛋白在正常大鼠视神经视网膜的表达

目的:采用免疫荧光组织化学方法观察Nogo蛋白在正常视网膜视神经的表达分布。方法:正常大鼠5只,多聚甲醛灌注固定,摘取双侧带视神经约0.5cm之眼球,冰冻切片,免疫荧光组织化学染色,激光共聚焦显微镜观察NogoA/B,NogoC的分布。结果:Nogo蛋白在正常视神经和视网膜水平切面均有表达,而且其分布不均匀,表达强度因组织层次不同而异。NogoA/B在视神经和视网膜的神经纤维层、节细胞层、内网层、内核层、外网层、外核层均出现,其中以节细胞层,内核层和外核层最明显。NogoC在视神经,视网膜的神经纤维层,节细胞层,内网层,内核层表达较为强烈,外网层、外核层有少量表达。结论:Nogo蛋白在视网膜,视神经均有表达,其特点可为进一步研究中枢神经系统损伤后再生与修复提供新的思路。

红景天苷对MPTP诱导的帕金森病小鼠黑质多巴胺转运蛋白的影响

目的:探讨红景天苷(salidroside,Sal)对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠黑质多巴胺转运蛋白(dopamine transporter,DAT)表达的影响。方法:将神经毒素1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phen-yl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)注入C57BL/6小鼠腹腔内,制备PD模型,Rotarod实验和游泳实验观察小鼠行为学变化,免疫荧光组织化学法检测黑质DAT阳性神经元数目的变化。结果:行为学实验结果显示,Rotarod实验中模型组小鼠在滚轴上运动的时间明显短于正常组(P<0.01),给予不同剂量的Sal后,小鼠在滚轴上运动的时间有所延长,并呈剂量依赖性(P<0.05,P<0.01)。游泳实验结果与Rotarod结果一致,模型组小鼠游泳时间明显短于正常组(P<0.01),给予不同剂量Sal后,小鼠游泳时间不同程度增加(P<0.05,P<0.01)。免疫荧光结果显示,模型组小鼠黑质中DAT阳性神经元的数目明显少于正常组(P<0.01),而给予不同剂量Sal干预后,小鼠DAT阳性神经元数目的减少有所恢复(P<0.05,P<0.01)。结论:Sal可以改善PD小鼠行为协调能力,提高DAT阳性神经元存活的数目,并呈剂量依赖性,表明Sal对多巴胺(dopamine,DA)能神经元具有一定的保护作用。

六种抗大鼠Nogo-A分子单克隆抗体的免疫荧光组织化学染色特性的比较

目的:检测和比较6种针对大鼠Nogo-A分子不同表位的单克隆抗体(mAb)应用于中枢神经组织的免疫组化染色特性,从而决定它们今后可能的应用范围和方法。其中4种mAb是针对Nogo-A分子中Nogo66片段,分别命名为No-go66-1、Nogo66-2、Nogo66-3和Nogo66-4;其他2种mAb是针对Nogo-A分子氨基端(570-691)肽段,分别为Nogo-N1和Nogo-N2。方法:利用免疫荧光组织化学,检测Nogo-A mAb抗体对大鼠神经组织的反应性与特异性。结果:正常SD大鼠脊髓组织的免疫荧光组织化学双标结果显示,制备的6种抗大鼠Nogo-A分子mAb均可以与商品化的兔抗大鼠Nogo-A多克隆抗体(PcAb)双标记;其中Nogo66-1、Nogo66-2、No-go66-4和NogoN-2 mAb可与MBP阳性细胞双标记,与GFAP阳性细胞不共存;而Nogo66-3和NogoN-1 mAb不仅可以与MBP阳性细胞双标,同时也可以和GFAP阳性细胞共存。结论:Nogo66-1、Nogo66-2、Nogo66-4和NogoN-2 mAb可很好的识别组织中的Nogo-A分子,用于免疫组化研究。

实验性早期糖尿病大鼠视网膜水通道蛋白4及其mRNA的表达变化

目的:探讨实验性早期糖尿病鼠视网膜水通道蛋白4(AQP4)及其mRNA的表达变化及其意义。方法:用链脲菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射的方法建立大鼠糖尿病模型,运用墨汁灌注实验检测视网膜微血管渗漏情况;用免疫荧光组织化学检测AQP4在视网膜内的分布和表达变化;用原位杂交和RT-PCR检测AQP4 mRNA在视网膜内的分布及表达变化。结果:与同龄正常对照组大鼠相比,早期糖尿病鼠视网膜未见明显血管渗漏现象,但存在部分细胞水肿、节细胞数目减少、感光细胞外节排列紊乱等病理改变;免疫组织化学、原位杂交和RT-PCR结果显示,模型鼠视网膜内AQP4及其mR-NA的表达明显增强。结论:实验性早期糖尿病鼠视网膜,在微血管病变发生前,已存在细胞水肿等病理改变;AQP4及其mRNA的表达明显上调。AQP4表达上调可能是糖尿病早期视网膜水肿形成、视功能下降的重要原因。

Nogo-66受体在大鼠神经组织中的表达

目的观察Nogo-66受体(NgR)蛋白在脑、脊髓、视网膜、视神经及坐骨神经的表达。方法采用免疫荧光组织化学-激光共聚焦显微镜观察9只正常SD大鼠脑、脊髓、视网膜、视神经及坐骨神经中NgR蛋白表达。结果9只大鼠脑、脊髓、视网膜、视神经切片中NgR蛋白均表达阳性,荧光染色位于神经元及其突起。9只大鼠坐骨神经切片中NgR蛋白均表达阴性。结论在大鼠中枢神经系统神经元中NgR广泛分布,而在周围神经坐骨神经则无NgR表达,提示NgR的阳性表达与中枢神经系统再生能力低下密切相关。

5-HT_(1A)受体亚型与P物质、Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体和甘丙肽在大鼠背根神经节神经元中的共表达

为探讨5-HT1A受体亚型参与感觉信息调控的机制,本文利用免疫荧光组织化学双重染色技术观察了该受体亚型与P物质(SP)、I型囊泡膜谷氨酸转运体(VGLUT1)和甘丙肽(Gal)在大鼠背根神经节(DRG)神经元内的共存状况。结果表明:5-HT1A受体亚型阳性神经元占DRG神经元总数的46.2%,阳性神经元以大型及小型神经元为主。在DRG内观察到了5-HT1A/SP、5-HT1A/VGLUT1以及5-HT1A/Gal双标神经元。其中5-HT1A/SP双标神经元占5-HT1A受体亚型阳性神经元的34.6%,占SP阳性神经元的72.0%;5-HT1A/VGLUT1双标神经元占5-HT1A受体亚型阳性神经元的24.1%,占VGLUT1阳性神经元的18.5%;5-HT1A/Gal双标神经元占5-HT1A免疫阳性神经元的17.6%,占Gal免疫阳性神经元的63.8%。5-HT1A/SP和5-HT1A/Gal双标神经元主要为DRG的小型神经元,而5-HT1A/VGLUT1双标神经元主要为大、中型神经元。上述结果提示,5-HT1A受体亚型可能通过调节SP、谷氨酸以及Gal在初级传入终末及外周神经末稍的释放发挥其感觉信息的调节作用。

AQP4与Kir4.1在大鼠眼内组织的共表达

目的:探讨AQP4与Kir4.1在大鼠眼内的定位分布及二者的共表达.方法:用免疫组织化学及激光扫描共聚焦显微技术检测AQP4与Kir4.1在大鼠眼内的分布.结果:免疫荧光显示,AQP4与Kir4.1在大鼠视网膜和睫状体内的分布形式相似;免疫荧光双标显示,AQP4与Kir4.1在视网膜Mller细胞及睫状突无色素上皮细胞的顶膜面及基底膜面呈重叠分布.结论:AQP4与Kir4.1在大鼠视网膜Mller细胞及睫状突无色素上皮细胞共表达,提示二者可能具有协同作用,参与房水的产生以及视网膜内水、K+运输平衡的调节.

大鼠脊髓内囊泡膜谷氨酸转运体与星形胶质细胞之间的联系(英文)

本研究应用双重免疫荧光组织化学法观察了大鼠脊髓胶质细胞内囊泡膜谷氨酸转运体 (VGlu Ts包括 VGlu T1,VG-lu T2及 VGlu T3 )的表达状况。结果显示 :大鼠脊髓内 VGlu T1、VGlu T2和 VGlu T3样阳性轴突终末与星形胶质细胞之间形成密切接触 ;部分星形胶质细胞同时呈 VGlu T3样免疫阳性。上述结果提示 ,脊髓内谷氨酸能神经终末与星形胶质细胞之间存在着信号传递 ;且在星形胶质细胞通过胞吐作用释放谷氨酸的过程中 VGlu T3可能发挥重要作用。

NgR蛋白在新生SD大鼠视网膜中的表达

目的观察NgR(Nogo-66 receptor)蛋白在出生24hSD大鼠视网膜中的表达。方法使用免疫荧光组织化学技术及激光共聚焦显微镜观察6只出生24h的正常SD大鼠视网膜中NgR蛋白的表达。结果在6只出生24h的正常SD大鼠视网膜神经节细胞及其突起上可以观察到NgR蛋白的表达,且该蛋白主要分布在视网膜神经节细胞核的周围。结论出生24h的SD大鼠视网膜中就已经存在NgR蛋白,为进一步研究哺乳动物中枢神经系统损伤后轴突再生修复奠定了基础。

本体觉传入纤维在小鼠脊髓内的发育变化(英文)

目的观察本体觉传入纤维在小鼠脊髓内投射和终止的发育变化。方法采用小牛白蛋白(PV)免疫组织化学染色特异标记本体觉传入纤维,用免疫荧光单标记和双标记方法观察本体觉传入纤维在脊髓内的生长模式以及与运动神经元的关系。染色后的切片用激光共聚焦显微镜进行观察。结果PV样免疫阳性(LI)本体觉纤维最早于胚胎(E)14 d出现在后索,E15时进入脊髓灰质。E16时,已有较多的PV_LI纤维到达中间带灰质和前角(VH)。此后,随着发育阶段的增长,脊髓VH内PV_LI本体觉纤维和终末的数量和密度逐渐增加,并在生后早期P0_P7达到最高水平。P14后,上述本体觉纤维和终末的数量逐渐减少。本体觉传入纤维的终末在E17时开始与脊髓VH运动神经元形成密切的接触。结论本体觉传入纤维在脊髓内的定位模式形成于小鼠胚胎后期和生后早期,本研究结果为深入理解脊髓反射运动环路的发育特点提供了依据。

OVX-OP大鼠腺垂体FS细胞中S-100蛋白表达的共聚焦显微镜研究

目的 探讨神经组织蛋白S - 10 0在去卵巢致骨质疏松症大鼠 (OVX -OP)腺垂体滤泡星形细胞 (FS细胞 )中的表达。方法 采用适龄SD大鼠 40只 ,随机均分为卵巢切除 (OVX)组和假性手术对照 (Sham组 ) ,于术前和术后 6周末测量大鼠全身及腰椎骨密度 (BMD)。取垂体 ,应用免疫荧光组织化学法结合激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)分析技术 ,检测FS细胞中S - 10 0表达。结果 术后 6周末OVX组大鼠全身及腰椎BMD均明显低于Sham组值 (P <0 0 1,P <0 0 1)。S - 10 0阳性荧光标记物定位于FS细胞的胞浆中。FS细胞具有典型的细胞突结构、与腺垂体中丰富的血窦直接相邻、结成了腺垂体中发达的活性细胞网络、在结构上与多种腺垂体内分泌细胞密切相连。两组间S- 10 0荧光强度和表达阳性率无显著差异 (P >0 0 5 )。结论 SD大鼠OVX术后 6周出现骨质疏松变化 ,FS细胞在形态结构和定位上的特征及其在数量上的稳定性可能是中枢调节骨代谢因素作用的一个细胞基础。

大鼠三叉神经脊束间质核内接受内脏伤害性信息的含CB神经元向孤束核的投射

目的 探讨大鼠三叉神经脊束间质核 (INV)内接受内脏伤害性信息的含calbindinD 2 8K(CB)神经元与孤束核 (NTS)的投射联系。 方法 用福尔马林刺激上消化道 ,应用荧光金 (FG)逆行束路追踪结合Fos和CB的免疫荧光组织化学三重标记法。 结果 INV的背侧边缘旁核 (PaMd)和三叉旁核 (PaV)内可见到大量FG逆标细胞 ,以注射FG的同侧为主。大部分FG逆标细胞 (约 71 2 %)为CB免疫反应阳性。部分FG和CB双标记神经元(约 31 5 %)同时呈Fos免疫反应阳性的三重标记。 结论 INV内部分接受内脏伤害性刺激的CB神经元可直接投射至NTS ,含CB的神经元在内脏伤害性信息经INV向NTS的传导通路中 。

去卵巢致骨质疏松症大鼠腺垂体FS细胞中Cx43、S-100蛋白表达——激光扫描共聚焦显微镜观察

检测间隙连接蛋白 Cx43、神经组织蛋白 S- 10 0在去卵巢致骨质疏松症 (OVX- OP)大鼠腺垂体滤泡星形细胞 (FS细胞 )中的表达。实验采用 10月龄未孕产 SD雌性大鼠 40只 ,随机均分为卵巢切除组 (OVX组 ,n=2 0 )和假性手术对照组 (Sham组 ,n=2 0 )。于术后 6周末用双能 X线骨吸收测量法 (DEXA)测量大鼠全身及腰椎 4- 6 (L4- 6 )骨密度 (BMD)。取两组大鼠垂体 ,制成连续切片。应用 FITC标记的 Ig G探针 ,对腺垂体组织中 Cx43和 S- 10 0进行间接免疫荧光染色 ,并用激光扫描共聚焦显微镜 (L SCM)定位和定量分析腺垂体 FS细胞中 Cx43、 S- 10 0的表达。结果发现 ,术后 6周末 OVX组大鼠全身及 L4- 6 BMD均明显低于 Sham组值 (P<0 .0 1,P<0 .0 1)。Cx43阳性荧光反应主要定位于相邻的 FS细胞的胞浆中和 /或胞膜上。OVX组 Cx43阳性表达荧光强度和表达阳性率均显著低于 Sham组 (P<0 .0 1)。S- 10 0蛋白表达定位于 FS细胞的胞浆中 ,两组间 S- 10 0阳性表达荧光强度和表达阳性率无显著差异 (P>0 .0 5 )。本研究提示 ,SD大鼠 OVX术后 6周出现骨质疏松变化 ;OVX大鼠腺垂体 FS细胞数量无明显变化、而 Cx43表达显著下降 ,后者的变化可能与大鼠 OVX-

谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白基因敲入小鼠三叉神经尾侧亚核内GFP阳性神经元的分布及与小白蛋白的共存

目的观察谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白（GAD67-GFP）基因敲入小鼠三叉神经尾侧亚核（Vc）浅层内，表达GFP的GABA能神经元的分布及其与小白蛋白（PV）的共存。方法分别运用原位分子杂交与免疫组织化学相结合；GFP与神经元标记物——神经元核蛋白（NeuN）或PV免疫荧光染色相结合的双重标记方法，在光学显微镜和激光共聚焦显微镜下进行观察。结果1．Vc浅层内90％以上的GFP阳性神经元同时表达GAD67 mRNA，而几乎所有表达GAD67 mRNA的阳性神经元都呈GFP阳性；2．GFP阳性神经元主要分布于Ｖc的Ⅰ－Ⅱ层内，细胞较小，尤其在Ⅱ层内可见大量密集分布的GFP阳性细胞和突起。GFP阳性神经元分别占Ⅰ、Ⅱ层内NeuN阳性神经元总数的19．4％和24．3％；3．GFP／PV双标神经元主要分布于Ｖc的Ⅰ－Ⅱ层，这些双标神经元大约占PV阳性神经元的62．4％，占GFP阳性神经元的12．8％。结论在Ｖc表达GFP的GABA能神经元主要密集分布于与外周伤害性信息传递关系密切的板层内，且大部分PV样阳性神经元属于GABA能神经元。

大鼠三叉神经脊束间质核内接受面口部躯体伤害性信息的calbindinD-28k神经元向孤束核的投射

为探讨三叉神经脊束间质核内的 calbindin D-2 8k神经元是否接受并传递面口部躯体伤害性信息到孤束核 ,本研究应用荧光金逆行束路追踪结合 FOS和 calbindin D-2 8k免疫荧光组织化学技术 ,观察了三叉神经脊束间质核的 calbindin D-2 8k和FOS双重免疫反应阳性的神经元向孤束核的投射。向右侧孤束核内注射荧光金并向右侧上、下唇皮下注射福尔马林 ,发现荧光金逆标细胞和 FOS免疫反应阳性细胞主要分布于注射侧的三叉神经脊束间质核的背侧边缘旁核和三叉旁核 ;大量的 calbindinD-2 8k免疫阳性细胞分布于双侧三叉神经脊束间质核内。此处的大部分荧光金逆标细胞 (约 74.4% )呈 calbindin D-2 8k免疫反应阳性。在此二者的双重阳性细胞中 ,又有一部分 (约 41.0 % )为同时呈 FOS免疫反应阳性的三重阳性神经元。结果提示 ,三叉神经脊束间质核内接受面口部躯体伤害性信息的 calbindin D-2 8k神经元可直接投射至孤束核 ,calbindin D-2

大鼠视皮层组织型纤溶酶原激活剂、神经元周围网络与小清蛋白的发育性共表达关系及其与视皮层可塑性关键期的相关性

目的：探讨出生后的Long Evans大鼠视皮层组织型纤溶酶原激活剂（tPA）与小清蛋白（PV）、神经元周围网络（PNs）三者发育性共表达的关系及其与视皮层发育可塑性的相关性.方法：应用免疫荧光组织化学对生后3（关键期起始）、4（高峰）、5（后期）、7（终止）、9（成年）周龄的Long Evans大鼠视皮层分别进行tPA、NeuN、DAPI和tPA、PV、PNs三重标记以检测它们的表达随发育的时空关系.结果：tPA＋ PNs阳性细胞密度在4周龄显著增加达高峰,随后在9周龄显著减少,tPA＋PV和PV＋PNs阳性细胞密度在3周龄已达峰值并维持至4周龄,在5周龄显著减少至最低水平,随后显著增加至成年高水平;tPA＋PV/tPA和PV＋PNs/PNs比值在3周龄已达最大值,在5周龄显著降至最低,随后显著上升至成年水平;tPA＋ PV＋ PNs阳性细胞密度在可塑性关键期的高峰期即4周龄出现峰值.结论：PNs对PV的包绕随发育的变化可能是PNs参与关键期终止的结构基础;存在tPA＋ PV＋ PNs阳性细胞,此类神经元在可塑性高峰期富集提示它们可能与关键期可塑性的增强有关.

孤束核内儿茶酚胺能神经元汇聚内脏传入与口面部躯体伤害性信息并向臂旁核投射

为了研究内脏初级传入与口面部深层组织躯体伤害性信息是否汇聚于孤束核(NTS)中向臂旁核(PBN)投射的儿茶酚胺(CA)能神经元。本实验将SD大鼠随机分为两组。第一组动物以生物素化的葡聚糖胺(BDA)注入颈部迷走神经主干跨节追踪,四甲基罗达明(TMR)注入臂旁外侧核(LPB)逆行追踪,福尔马林刺激咬肌并行FOS的免疫荧光组织化学染色;第二组动物以BDA注入颈部迷走神经主干跨节追踪,福尔马林刺激咬肌并行FOS和酪氨酸羟化酶(TH)染色。在激光扫描共聚焦显微镜下对两组大鼠NTS内的标记细胞和纤维进行了观察。两组实验中,主要在NTS的内侧、中间内侧和连合亚核内观察到重叠分布的TMR、FOS或TH、FOS单标神经元。其中部分TMR逆行标记的或TH阳性神经元呈FOS阳性并与BDA跨节标记的纤维和终末形成紧密接触。提示大鼠NTS内的CA能神经元可能汇聚了内脏初级传入和口面部深层组织的躯体伤害性刺激信息并向LPB投射。

灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对Cdk4表达的影响

目的探讨灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对依赖细胞周期蛋白激酶4(Cdk4)表达的影响。方法给予实验对照组和灵芝孢子组妊娠E7.75d的小鼠一次性胃饲维甲酸,造成这2组孕鼠的胚胎出现神经管畸形。然后,给予灵芝孢子组孕鼠胃饲灵芝孢子溶液。在孕期E10.5d时取出2组孕鼠的胚胎,应用免疫荧光组织化学染色和Western blotting检测胚胎神经管神经上皮依赖细胞周期蛋白激酶4(Cdk4)的表达情况。结果在灵芝孢子组可以观察到形态正常的胚胎中,神经管的神经上皮细胞有Cdk4的表达,其表达水平与空白对照组及正常对照组相比较没有明显差异。在灵芝孢子组形态异常的胚胎中,其神经管的神经上皮细胞也有Cdk4的表达,但其表达水平与空白对照组及正常对照组相比较是低的。结论灵芝孢子可能是通过促进神经管神经上皮细胞上调Cdk4的表达来减轻维甲酸诱导的胚胎小鼠神经管畸形。

VEGF与喉癌转移的免疫荧光定量研究及意义

目的 研究VEGF在喉癌转移及复发中的作用。方法 通过对 40例喉癌及转移淋巴结的VEGF免疫荧光染色 ,研究喉复发癌及转移癌的VEGF表达特性 ,并通过图像分析系统 ,分析其表达量 ,研究VEGF与喉癌转移的关系。结果 喉癌血管内皮细胞有较强的VEGF表达 ,有转移的喉原发癌及复发癌中VEGF染色强于无转移的原发癌 ,统计学比较具显著性差异 (P <0 .0 5)。结论 VEGF为血管内皮细胞浆表达蛋白 ,肿瘤细胞具有VEGF蛋白分泌功能 ,VEGF的过度表达与喉癌的转移、复发有关。VEGF的过度表达 。