Dynamin-2在肺腺癌及其TILs中表达的意义

探讨动力蛋白2(Dynamin-2, DNM2)在肺腺癌及其肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocytes, TILs)中表达的意义。方法 选取湛江市中心人民医院于2020年9月-2021年12月收治的100例肺腺癌患者设立观察组以作为研究对象,对观察组患者的肺腺癌病理标本组织进行采集,良性肺病变组织标本在同期完成20例的收集设为对照组,并对样本的DNM2表达情况采用免疫组织化学染色法完成检测。患者根据染色检测结果分组(高表达组、低表达组),收集患者临床基线资料与肺腺癌的临床病理特征,组间进行因素分析。结果 观察组肺腺癌及其TILs的DNM2阳性高表达率均显著高于对照组,差异显著性具有统计学意义(P<0.05)。因素分析结果提示,肿瘤分化程度、TNM分期及淋巴结转移状态是影响DNM2阳性高表达率的相关因素(均P<0.05)。结论 肺腺癌及其TILs中的DNM2表达程度与肺腺癌的疾病进展指标肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移状态等密切相关,对肺腺癌的疾病进展或具备预警作用。

Dynamin-2在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的:分析酶动力蛋白2(Dynamin-2)在食管鳞状细胞癌中的表达意义。方法:选择我院2014-01~2018-01经病理组织确诊的299例食管癌患者为研究对象,采集其组织标本及47例癌旁正常食管组织标本,均经免疫组织化学染色法检测其Dynamin-2表达。根据染色结果,参照Dynamin-2表达,将患者分为高表达组与低表达组。对比食管癌组织标本与癌旁正常组织标本Dynamin-2高表达检出率,以及对比两组相关病理参数值,分析患者的生存时间,经Cox多因素分析影响预后的独立因子。结果:299例患者中检出Dynamin-2高表达105例,检出率为35.10%,高于47例癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);与低表达组比较,高表达组TNM分期Ⅲ期以上占比高,淋巴结转移率高,差异有统计学意义(P<0.05);高表达组生存时间短于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);经Cox多因素回归模型显示,Dynamin-2并不是食管癌预后独立评价因子(P>0.05),肿瘤TNM分期、淋巴结转移状态、肿瘤分化程度可能是食管鳞状癌患者预后危险因素(P<0.05)。结论:食管鳞状细胞癌患者Dynamin-2较癌旁正常组织呈高表达,用于预测患者生存时间有一定应用价值,但并不能直接作为患者预后独立危险因子,患者预后还与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移状态等因素有关。

滋肾活血方对血管性痴呆大鼠分裂与融合蛋白Mfn1、Mfn2、Drp1、Fis1的影响

目的观察滋肾活血方对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠海马组织线粒体融合蛋白1(mitofusin 1,Mfn1)、线粒体融合蛋白2(mitofusin 2,Mfn2)、线粒体动力蛋白相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)、线粒体分裂蛋白1(fission mitochondrial 1,Fis1)表达的影响。方法选用雄性SD大鼠60只,随机均分为假手术组、模型组、滋肾活血高剂量组、滋肾活血中剂量组、滋肾活血低剂量组、西药组。除假手术组外,其余各组均采用改良2-VO法建立VD大鼠模型。每组大鼠按9 mL/(kg·d)剂量灌胃相应药物。模型组、假手术组给予蒸馏水,滋肾活血低剂量组、滋肾活血中剂量组、滋肾活血高剂量组予以滋肾活血方溶液[9.8、17.8、35.6 g/(kg·d)]灌胃,西药组以多奈哌齐溶液[150 mg/(kg·d)]灌胃。连续喂药2周后,采用水迷宫实验评估大鼠学习记忆功能;取海马组织,采用免疫组化法检测实验大鼠海马组织中的Mfn1、Mfn2、Drp1、Fis1蛋白表达量。结果与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期(escape latency,EL)延长(P<0.05),Mfn1、Mfn2、Drp1蛋白的表达量降低(P<0.05)。与模型组对比,滋肾活血中、高剂量组大鼠EL缩短(P<0.05),Mfn1、Mfn2、Drp1蛋白表达量升高(P<0.05)。与滋肾活血低剂量组比较,滋肾活血中、高剂量组大鼠EL缩短(P<0.05),Mfn1、Drp1蛋白表达量升高(P<0.05)。结论滋肾活血方可能通过调节细胞内线粒体分裂与融合,上调Mfn1、Mfn2、Drp1蛋白的表达,从而改善认知功能。

敲减抗增殖蛋白2促进非小细胞肺癌细胞系A549凋亡

目的探讨抑制抗增殖蛋白2(PHB2)表达对非小细胞肺癌细胞系A549凋亡的影响及机制。方法慢病毒感染非小细胞肺癌细胞系A549,建立敲减PHB2的稳转细胞株,用动力相关蛋白1(DRP1)抑制剂Mdivi-1处理敲减PHB2的A549细胞。Western blot检测PHB2、p-DRP1(Ser616)和DRP1蛋白表达水平;TUNEL染色和annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡;MitoTracker染色评估线粒体分裂情况;用相应试剂盒检测线粒体含量、柠檬酸合酶活性和细胞色素c含量。结果与shCtrl组相比,shPHB2组A549细胞凋亡率增加(P<0.05),DRP1介导的线粒体分裂增加(P<0.05),ATP含量减少(P<0.05),柠檬酸合酶活性降低(P<0.05),线粒体内细胞色素c减少(P<0.05)。与shPHB2组相比,shPHB2+Mdivi-1组A549细胞凋亡率减少(P<0.05),DRP1介导的线粒体分裂减少(P<0.05),ATP含量增加(P<0.05),柠檬酸合酶活性增加(P<0.05),线粒体内细胞色素c增加(P<0.05)。结论抑制PHB2促进A549细胞凋亡,其机制可能与促进DRP1介导的线粒体分裂有关。

系统性红斑狼疮患者外周血AC007278.2、MX2表达水平与疾病活动度及补体水平的关联性分析

目的分析系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血长链非编码RNA AC007278.2、MX动力蛋白样GTP酶2(MX2)表达水平与疾病活动度、补体水平的关联性。方法招募2018年11月至2020年2月武汉亚心总医院及中部战区总医院收治的SLE患者168例(SLE组)。根据患者入院24 h内进行SLE疾病活动指数-2000(SLEDAI-2000)评分,其中疾病活动度为无活动者42例,轻度活动者45例,中度活动者42例,重度活动者39例。招募同期健康人群80名作为对照组。比较不同组的临床资料,采用Pearson相关分析探讨AC007278.2、MX2水平与补体C3、C4水平及疾病活动度的相关性,采用多元线性回归分析影响SLE疾病活动度的因素。结果SLE组AC007278.2、MX2水平高于对照组,补体C3、C4及白细胞(WBC)、淋巴细胞、血小板(PLT)、血红蛋白(Hb)水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,SLE患者AC007278.2、MX2水平与补体C3、C4水平呈负相关(P<0.05),与SLEDAI-2000评分呈正相关(P<0.05)。多元线性回归分析结果显示,AC007278.2(β=0.410)、MX2(β=0.512)与SLE疾病活动度呈正关联(P<0.05),补体C3(β=-0.362)、C4(β=-0.528)与SLE疾病活动度呈负关联(P<0.05)。结论SLE患者外周血AC007278.2、MX2表达水平升高,与SLE疾病活动度及补体C3、C4具有关联性。

缺氧后线粒体Drp1通过LRRK2-HK2诱导mPTP过度开放的机制研究

目的:探究缺氧后线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)对线粒体膜通透性转换通道(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)开放的调控机制。方法:在血管平滑肌细胞中通过免疫荧光方法观察缺氧后mPTP开放情况;通过超速离心法分离线粒体和细胞质成分蛋白;使用Co-IP和Westernblot检测缺氧或者干预Drp1、干预己糖激酶-2(hexokinase-2,HK2)后Drp1的表达分布情况、HK2与电压依赖性阴离子通道蛋白(voltage dependent anion channel,VDAC)结合情况、Drp1与富含亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)结合情况;使用蛋白分子对接和蛋白芯片方法筛选Drp1的潜在结合蛋白及结合位点;使用Drp1抑制剂和点突变法用于相应机制探究。结果:缺氧后Drp1发生线粒体转位促使mPTP过度开放(P<0.05)。使用Mdivi-1减少线粒体Drp1表达后可抑制mPTP开放,减少细胞色素C(cytochrome C,CytC)释放(P<0.05)。缺氧后HK2-Thr473磷酸化水平减低引起的HK2线粒体分离会导致mPTP结构破坏,通过HK2 T473D点突变恢复HK2活性后,HK2与线粒体结合情况及mPTP开放情况明显改善(P<0.05)。Drp1蛋白芯片结果发现缺氧后Drp1可以与LRRK2结合并封闭其活性位点,通过Drp1 T595A点突变破坏Drp1-LRRK2结合后,HK2活性及HK2线粒体分离情况明显改善(P<0.05),mPTP开放情况明显减少(P<0.05)。结论:缺氧后线粒体Drp1通过封闭激酶LRRK2活性位点导致HK2 Thr473磷酸化水平减低及其线粒体分离,最终诱导mPTP过度开放。

强磁重力环境对人成骨细胞发动蛋白-2表达和定位的影响

研究强磁重力环境对人成骨细胞MG-63中发动蛋白-2表达和分布的影响。采用大梯度超导磁体模拟空间重力环境,该超导磁体可以提供3种不同的强磁重力环境(high magnetic gravitational environment,HMGE),即0g(12T),1g(16T)和2g(12T)。将MG-63细胞分别在0g(12T)、1g(16T)、2g(12T)及对照环境(1g,地磁)中培养24h后,采用Real Time PCR、Western印迹以及激光扫描共聚焦显微术等方法检测HMGE对发动蛋白-2的表达及定位的影响。结果显示,与对照组相比,0g(12T)、1g(16T)、2g(12T)环境处理组MG-63细胞中发动蛋白-2在mRNA上的表达量分别上调6.43、15.57、1.29倍;在蛋白质水平上,0g(12T)、1g(16T)环境处理组细胞发动蛋白-2分别上调89%和7%,而2g(12T)环境处理组则下调41%;在对照组中发动蛋白-2弥散分布于细胞质中,而0g(12T)处理组发动蛋白-2则有从细胞边缘向核周集中的趋势。上述结果说明强磁重力环境影响了发动蛋白-2在MG-63细胞中的表达和定位。

发动蛋白-2基因新的单核苷酸多态性分析

目的:检测中央核肌病家系发动蛋白-2(DNM2)基因部分区域单核苷酸多态性(SNP)。方法:对汉族中央核肌病家系P中的4名成员和与其家系无关的7个正常个体进行研究。采用聚合酶链反应(PCR)扩增DNM2基因第8号外显子及上游内含子交界区序列,应用CEQ8000核酸分析仪进行测序。结果:家系P中患者III3、II5在外显子7和8之间的内含子区-104位置上发现G-A多态,此多态位于19号染色体10765292(+);在家系内另外2个正常人I1、I2和与其家系无关的7个正常个体中均发现此多态位点。经检索NCBISNP数据库证实此SNP多态位点尚未被报道。结论:采用测序技术自行检测在11个汉族个体中发现1个尚未报道的位于DNM2基因内的SNP位点,该位点可能与种族遗传背景有关。

动力蛋白相关蛋白1抑制剂对肠黏膜上皮细胞缺血再灌注损伤的干预作用及其机制

目的探讨动力蛋白相关蛋白1(Drp1)抑制剂对肠黏膜上皮细胞缺血再灌注损伤的干预作用并分析其机制。方法将人大肠黏膜上皮细胞系Caco-2分为对照组、模型组、Drp1抑制剂组,对照组正常培养细胞,模型组、Drp1抑制剂组均采用缺氧12 h后复氧2 h的方法构建缺氧复氧模型,Drp1抑制剂组在H/R前给予Drp1抑制剂Mdivi-1干预。采用CCK-8法检测细胞活力,线粒体超氧化物指示剂检测线粒体活性氧(ROS)含量,JC-1法检测线粒体膜电位,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞Drp1、线粒体融合蛋白2(Mfn2)蛋白。结果细胞活力对照组>Drp1抑制剂组>模型组(P均<0.05);细胞内线粒体ROS含量模型组>Drp1抑制剂组>对照组,线粒体膜电位对照组>Drp1抑制剂组>模型组(P均<0.05);细胞凋亡率模型组>Drp1抑制剂组>对照组(P均<0.05);细胞Drp1蛋白表达模型组>Drp1抑制剂组>对照组,Mfn2蛋白表达对照组>Drp1抑制剂组>模型组(P均<0.05)。结论Drp1抑制剂可减轻肠黏膜上皮细胞缺血再灌注损伤,其机制可能与改善线粒体功能障碍、减少细胞凋亡有关。

老年慢性心力衰竭患者血清LDLR、DNM2水平及临床意义

目的探究老年慢性心力衰竭(CHF)患者血清低密度脂蛋白受体(LDLR)、发动蛋白2(DNM2)水平及临床意义。方法选取123例CHF患者(CHF组),其中纽约心脏病学会(NYHA)分级:Ⅱ级42例、Ⅲ级61例、Ⅳ级20例。120例体检健康者(对照组)。比较各组患者血清LDLR、DNM2及心功能指标差异。Pearson相关分析LDLR、DNM2和左心室舒张末内径(LVEDD)、左心室射血分数(LVEF)及N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)的相关性。CHF患者经过半年随访,分为预后良好组(98例)和预后不良组(25例),采用受试者工作特征(ROC)曲线评估LDLR、DNM2对预后不良的CHF的诊断价值。结果不同NYHA分级亚组患者血清中的LDLR、DNM2、LVEF均较对照组下降,而LVEDD、NT-proBNP水平较对照组升高(均P<0.05)。随着NYHA分级的增加,CHF患者血清LDLR、DNM2、LVEF水平逐渐下降,而LVEDD、NT-proBNP水平逐渐升高(均P<0.05)。CHF患者血清LDLR、DNM2与LVEF呈正相关,而与LVEDD、NT-proBNP呈负相关(均P<0.01)。预后不良组患者血清中LDLR、DNM2水平较预后良好组降低(P<0.05)。ROC曲线显示,LDLR联合DNM2诊断CHF患者预后不良的曲线下面积[0.858(95%CI:0.751~0.965)]较LDLR[0.793(95%CI:0.668~0.919)]和DNM2[0.777(95%CI:0.669~0.884)]增大,敏感度和特异度均有提升。结论CHF患者血清LDLR和DNM2水平随着NYHA分级的增加而降低,能够反映心脏功能水平,2指标联合有助于评估CHF患者预后。

脑缺血大鼠脑组织中发动蛋白相关蛋白1和线粒体融合基因2的动态表达

目的:探讨脑缺血后线粒体分裂蛋白及融合蛋白表达水平的变化。方法:72只大鼠随机分为脑缺血后组及假手术组,每组18只。采用线栓法经左侧颈外-颈内动脉插线栓塞大脑中动脉建立脑缺血模型。应用苏木精-伊红染色(HE染色)观察大脑皮质神经元形态结构,蛋白免疫印迹法检测脑组织Drp1及Mfn2的蛋白含量,rt-PCR检测Drp1及Mfn2的mRNA基因的表达情况。结果:脑缺血组的Drp1蛋白及其mRNA基因的表达明显高于假手术组,且随着时间的延长表达逐渐增加(P<0.01);脑缺血组Mfn2蛋白及其表达mRNA基因的表达低于假手术组,且随着时间的延长表达逐渐减少(P<0.01)。结论:线粒体分裂和融合蛋白表达异常可能是脑缺血后脑组织损伤的重要机制。

菖蒲郁金汤对抽动秽语综合征大鼠突触胞吞相关蛋白表达的影响

目的研究菖蒲郁金汤对抽动秽语综合征模型大鼠神经元胞吞相关蛋白表达的影响。方法大鼠随机分为空白组、模型组、硫必利组及菖蒲郁金汤组。采用腹腔注射亚氨基二丙腈制备抽动秽语综合征模型,连续灌胃给予相应药物4周,在第0、7、14、21、28天,采用刻板行为及运动行为评分法评定行为学变化,Percoll密度梯度离心法制备突触体,RT-qPCR和Western blot法检测突触体中clathrin、AP-2、dynamin-1 mRNA及蛋白表达,免疫组织化学法检测纹状体clathrin、AP-2、dynamin-1蛋白表达。结果与模型组比较,硫必利组和菖蒲郁金汤组行为学评分随时间延长逐渐降低(P<0.05,P<0.01);在给药第28天,菖蒲郁金汤组刻板行为和运动行为评分均低于硫必利组(P<0.01)。与空白组比较,模型组各观察点突触体/纹状体clathrin、AP-2、dynamin-1 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.01);与模型组比较,硫必利组和菖蒲郁金汤组在给药期间突触体/纹状体clathrin、AP-2、dynamin-1 mRNA及蛋白表达随时间延长逐渐降低(P<0.05,P<0.01);在给药第28天,菖蒲郁金汤组突触体clathrin、dynamin-1 mRNA和clathrin蛋白表达低于硫必利组(P<0.05),2组纹状体clathrin、AP-2、dynamin-1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论菖蒲郁金汤抗抽动的作用可能是通过调控clathrin、AP-2、dynamin-1的表达来实现。

补阳还五汤防治2型糖尿病小鼠骨骼肌病变的作用

目的:基于线粒体转运、糖代谢、氧化应激及炎性介质探讨补阳还五汤防治2型糖尿病骨骼肌病变的作用。方法:选用60只SPF级雄性C57BL/6J小鼠,高脂饲料联合链脲佐菌素腹腔注射构建2型糖尿病小鼠模型,按随机数字表法随机分组,其中正常组、补阳还五汤高、中、低剂量组、二甲双胍组、模型组各10只。补阳还五汤各剂量组及二甲双胍组灌喂剂量分别为86.5、43.2、21.6 g·kg^(-)1、150 mg·kg^(-1);实验期间定期检测小鼠血糖等指标,实验结束后取骨骼肌,分别置于4%多聚甲醛-80℃冰箱冻存。进行血液样本送检,骨骼肌采用苏木素-伊红(HE)染色,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测炎症指标及活性氧(ROS),蛋白免疫印迹法(Western blot)、免疫组化检测线粒体蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组小鼠空腹血糖、饮水量、进食量显著升高(P<0.01),体质量显著降低(P<0.01),与模型组比较,补阳还五汤组及二甲双胍组小鼠空腹血糖、进水量、进食量明显降低(P<0.05,P<0.01),体质量上升(P<0.01);与正常组比较,模型组TNF-α、IL-6、ROS显著增加(P<0.01),与模型组比较,二甲双胍组与补阳还五汤各组TNF-α、IL-6、ROS均明显下降(P<0.05,P<0.01)。模型组骨骼肌肌纤维普遍萎缩性变细,提示骨骼肌萎缩,形态结构改变,而二甲双胍组及补阳还五汤各组小鼠骨骼肌病理状态有所减轻,纤维束形态部分恢复正常;与正常组比较,模型组线粒体融合蛋2(Mfn2)显著减少(P<0.01),与模型组比较,二甲双胍组与补阳还五汤各剂量组Mfn2明显增多(P<0.05,P<0.01);与正常组比较,模型组分裂蛋白Drp1显著增多(P<0.01),与模型组比较,二甲双胍组与补阳还五汤各剂量组分裂蛋白1(Drp1)显著减少(P<0.01)。结论:补阳还五汤可以改善2型糖尿病骨骼肌病变小鼠的体质量及骨骼肌病理形态,降低空腹血糖、进食量、进水量、TNF-α、IL-6、ROS值及分裂蛋白Drp1,升高体质量及线粒体融合蛋白Mfn2。

法舒地尔减轻大鼠缺血/再灌注心肌线粒体损伤和细胞凋亡

目的观察线粒体融合蛋白2(Mfn2)和发动蛋白相关蛋白1(Drp1)在法舒地尔抑制Rho激酶对抗心肌缺血/再灌注(I/R)损伤中的变化,并分析其意义。方法离体大鼠心脏,结扎冠状动脉左前降支缺血0.5 h,持续再灌注2 h模拟心肌I/R损伤模型。实验分假手术组、I/R组、法舒地尔组。测定心室动力学变化和再灌注期间冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,透射电镜观察心肌超微结构改变,免疫组织化学染色检测Rho激酶下游磷酸化的蛋白磷酸酶1调节亚基12A(p-PPP1R12A/p-MYPT1)表达,Western blot法检测Mfn2、Drp1和裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)蛋白水平。结果与假手术组相比,各组再灌注不同时间点左心室收缩和舒张功能均降低,LDH释出增加;与I/R组相比,法舒地尔组左心室收缩和舒张功能得到改善,LDH释出减少;透射电镜结果显示I/R组心肌明显肌丝断裂、肌原纤维结构不完整、线粒体损伤,免疫组织化学染色显示p-MYPT1蛋白表达上调;与I/R组比,法舒地尔组心肌肌原纤维和线粒体损伤减轻,p-MYPT1蛋白表达下调;Western blot结果显示,与假手术组相比,I/R组Mfn2蛋白表达减少,Drp1和c-caspase-3蛋白水平增加,与I/R组相比,法舒地尔组Mfn2蛋白水平无明显变化,Drp1和c-caspase-3蛋白水平减少。结论法舒地尔抑制Rho激酶的抗心肌I/R损伤作用与Mfn2蛋白表达无明显关联,可能与降低Drp1蛋白表达减少线粒体损伤,进而减少细胞凋亡有关。

糖尿病小鼠心肌组织中动力相关蛋白1的表达变化

目的观察db/db糖尿病小鼠与正常小鼠心肌组织中动力相关蛋白1(Drp1)表达水平的变化。方法 9只雄性db/db糖尿病小鼠,随机分为6周组(db/db 6week),12周组(db/db 12week),18周组(db/db18week);另设健康组雄性小鼠9只,随机分为6周组(wt 6week),12周组(wt 12week),18周组(wt 18week),每小组3只。分别利用实时定量PCR,Western Blot,免疫组织化学的方法检测心肌组织中Drp1的表达和定位。结果db/db糖尿病小鼠分组中Drp1的表达低于健康组,且随年龄的增长表达逐渐降低。结论糖尿病小鼠中Drp1表达进行性的降低,引起线粒体分裂异常从而导致线粒体的生物功能障碍,可能是糖尿病心肌病发生及发展的重要机制之一。

SIRT1在非酒精性脂肪肝病大鼠肝脏中的表达及姜黄素衍生物L6H4的干预作用

目的:探讨SIRT1在非酒精性脂肪肝病(NAFLD)模型大鼠肝脏中的表达改变及姜黄素衍生物L6H4干预作用。方法:雄性SD大鼠24只,随机均分为正常组(control组)、模型组(NAFLD组)和治疗组(L6H4组)。control组给予基础饲料,其余2组全程给予高脂饲料,并从第9周开始用姜黄素衍生物L6H4干预治疗,于第20周末处死各组大鼠。取全血检测各组大鼠的TG、TC、LDL-C及HDL-C水平;取肝组织分别用于HE及Masson染色观察大鼠肝组织病理学改变;羟胺法测定T-SOD活性及硫代巴比妥酸法测定MDA含量;RT-PCR及Westernblot检测大鼠肝脏组织SIRT1、MFN2及DRP1m RNA和蛋白表达情况。结果:光镜下,NAFLD组大鼠肝组织可见明显脂肪变性及纤维化,L6H4组肝组织病理变化较NAFLD组明显减轻。与control组比,NAFLD组大鼠血清中TG、TC和LDL-C浓度及肝组织中MDA含量和DRP1的表达量均明显增加,而血清HDL-C浓度及肝组织中T-SOD活性,SIRT1和MFN2的表达量均显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);与NAFLD组相比,L6H4组大鼠血清中TG、TC和LDL-C的浓度及肝组织中MDA含量,DRP1的表达量均显著降低,而血清HDL-C浓度及肝组织中T-SOD活性,SIRT1和MFN2的表达量均明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:姜黄素衍生物L6H4对NAFLD具有保护作用,其机制可能是通过调高SIRT1的表达,从而减弱NAFLD中肝细胞对胰岛素的抵抗和脂质过氧化反应,减轻氧化应激损伤、抑制线粒体分裂。

内皮一氧化氮合酶胞内定位作用蛋白的研究

内皮细胞一氧化氮合酶活性的调节是一系列影响其转录、翻译和翻译后因素的综合作用过程,其调节机制迄今尚未完全查明。内皮一氧化氮合酶的胞内定位调节是其翻译后调节的重要组成部分。近年来发现的几种蛋白,包括动力蛋白2、一氧化氮合酶相互作用蛋白以及一氧化氮合酶转运诱导蛋白与内皮一氧化氮合酶共存于内皮细胞中,介导一氧化氮合酶的胞内定位,从而影响内皮一氧化氮合酶的活性。

安寐丹通过修复线粒体分裂/融合失衡状态改善睡眠剥夺模型大鼠学习记忆水平

目的探讨安寐丹(AMD)对睡眠剥夺大鼠学习记忆的影响及其作用机制。方法60只Sprague Dawley雄性大鼠随机分为空白组(control)、模型组(SD)、安寐丹(AMD,9.09 g·kg^(-1)·d^(-1))组和褪黑素组(MT,0.27 g·kg^(-1)·d^(-1))。通过自制睡眠剥夺箱进行持续性睡眠剥夺30天。以Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆水平,尼氏染色检测海马神经元形态改变,免疫组化检测海马CA1、CA3区Drp1、Mfn2蛋白的表达水平,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测海马Drp1、Mfn2 mRNA的表达。结果与control组比较,SD组学习记忆明显受损,表现为水迷宫逃避潜伏期、游泳总路程、初次穿越平台时间延长,跨越平台次数和目标象限时间减少(P<0.01),同时海马神经元尼氏小体少,着色浅;CA1、CA3区Drp1、Mfn2蛋白表达减少,mRNA表达下调(P<0.01)。与SD组比较,AMD改善了SD大鼠的学习记忆,缩短逃避潜伏期、游泳总路程及初次穿越平台时间,增加平台次数和目标象限时间(P<0.01),同时海马神经元胞体较为饱满,尼氏小体增加,着色加深;CA1、CA3区Drp1、Mfn2蛋白增加,mRNA表达上调(P<0.01)。结论安寐丹改善SD大鼠学习记忆障碍可能是与修复线粒体分裂/融合失衡状态,升高Drp1、Mfn2蛋白及mRNA表达相关。

线粒体外膜融合机制的研究进展

线粒体是双层膜的细胞器,不断进行着融合和分裂的动态平衡。线粒体融合对其行使正常生理功能至关重要,并与多种人类疾病的发生密切相关。线粒体外膜的融合由mitofusin蛋白介导。哺乳动物有两种mitofusin蛋白,即MFN1和MFN2。二者均属于dynamin蛋白超家族。MFN1和MFN2均通过跨膜结构域定位在线粒体外膜上,通过同源或异源相互作用介导线粒体外膜的融合,其具体机制尚不清楚。近年来,我们和其他课题组通过解析不同GTP水解状态下MFN1/2片段的晶体结构,揭示了它们在GTP水解过程中的聚合状态和构象变化。根据结构信息,我们分析了MFN2和MFN1的差异和协同作用,为全面了解mitofusin介导线粒体融合的具体分子机制奠定了坚实基础。

虾青素通过激活SIRT1通路抑制动力相关蛋白1介导的线粒体分裂减轻大鼠对比剂急性肾损伤

目的探讨虾青素(astaxanthin,AST)是否通过激活沉默信息调节因子2相关酶类1(silent mating type information regulation 2 homolog⁃1,SIRT1)信号通路下调动力相关蛋白1(dynamin⁃related protein 1,Drp1)介导的线粒体分裂从而减轻对比剂急性肾损伤(contrast⁃induced acute kidney injury,CI⁃AKI)。方法将40只体重160~180 g雄性Sprague⁃Dawley大鼠随机分成5组:假手术组(Sham组)、对比剂损伤组(CM组)、虾青素干预组(AST+CM组)、SIRT1抑制剂Ex527干预组(Ex527+CM组)、虾青素联合Ex527干预组(AST+Ex527+CM组)。造模72 h后行心脏取血后处死大鼠并收集肾脏组织进行后续检测。检测各组血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平,同时检测氧化应激相关指标总超氧化物歧化酶(T⁃SOD)及丙二醛(MDA)含量;HE染色观察肾脏病理改变;透射电镜观察线粒体形态及数量;冰冻切片活性氧(ROS)染色检测ROS含量;TUNEL染色检测细胞凋亡水平;Western印迹检测SIRT1、p53、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC⁃1α)、Drp1及凋亡相关蛋白Bcl⁃2、Bax的表达水平。结果(1)与CM组比较,AST+CM组Scr和BUN含量较低,T⁃SOD含量较多,MDA含量较少,而Ex527+CM组T⁃SOD含量较少,MDA含量较多(均P<0.05)。(2)与CM组比较,AST+CM组ROS表达量较低,Ex527+CM组ROS表达量较高(均P<0.05)。(3)与CM组比较,AST+CM组凋亡细胞数量较少,而Ex527+CM组凋亡细胞数量较多(均P<0.05)。(4)与CM组比较,AST+CM组SIRT1、PGC⁃1α及Bcl⁃2蛋白表达量均较高,p53、Drp1及Bax蛋白表达量均较低,Ex527+CM组SIRT1、PGC⁃1α及Bcl⁃2蛋白表达量均较低,p53、Drp1及Bax蛋白表达量均较高(均P<0.05)。结论虾青素可以通过激活大鼠SIRT1通路抑制Drp1介导的线粒体分裂从而减轻CI⁃AKI。