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MAPK1和eEF1B对奶牛乳腺上皮细胞泌乳调控的作用及机理研究报告
被引量:
1
1
作者
陆黎敏
黄建国
+1 位作者
李庆章
高学军
《科技创新导报》
2016年第8期170-170,共1页
该研究采用组织块儿培养法,成功构建了体外培养的奶牛乳腺上皮细胞模型,应用CASY细胞分析仪检测了不同浓度和作用时间下蛋氨酸和赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞活力的影响,利用高效液相色谱检测了β-casein的分泌情况,确定了蛋氨酸和赖氨酸...
该研究采用组织块儿培养法,成功构建了体外培养的奶牛乳腺上皮细胞模型,应用CASY细胞分析仪检测了不同浓度和作用时间下蛋氨酸和赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞活力的影响,利用高效液相色谱检测了β-casein的分泌情况,确定了蛋氨酸和赖氨酸最佳剂量分别为0.6 mmol/L和1.2 mmol/L,最佳作用时间为24 h。建立奶牛乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质组技术,应用双向电泳(2-DE)结合质谱技术(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋氨酸和赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质的差异影响,发现蛋氨酸处理组,mitogen-activated protein kinase 1(MAPK1)和e EF1B蛋白质表达上调;并应用荧光定量PCR和Western blotting技术验证差异蛋白在转录水平和蛋白水平上的表达,与2-DE结果一致。实验过程中构建了真核表达载体p GCMVIRES-EGFP-MAPK1、e EF1B,转染至奶牛乳腺上皮细胞中,通过G418筛选获得稳定转染的细胞株;然后通过基因沉寂和过表达等技术,减少或增加MAPK1、e EF1B的表达水平后,检测泌乳信号转导通路中重要调控蛋白的表达情况,发现蛋氨酸和赖氨酸营养素可以通过调节MAPK1、e EF1B介导m TOR信号转导通路,影响Stat5的表达,进而调节乳蛋白的表达。以上实验结果为奶牛营养基因组学的研究提供了理论依据和技术方法。
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关键词
蛋氨酸
赖氨酸
细胞核磷酸化蛋白质组
MAPK1
e
ef1b
奶牛乳腺上皮细胞
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职称材料
题名
MAPK1和eEF1B对奶牛乳腺上皮细胞泌乳调控的作用及机理研究报告
被引量:
1
1
作者
陆黎敏
黄建国
李庆章
高学军
机构
东北农业大学
出处
《科技创新导报》
2016年第8期170-170,共1页
文摘
该研究采用组织块儿培养法,成功构建了体外培养的奶牛乳腺上皮细胞模型,应用CASY细胞分析仪检测了不同浓度和作用时间下蛋氨酸和赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞活力的影响,利用高效液相色谱检测了β-casein的分泌情况,确定了蛋氨酸和赖氨酸最佳剂量分别为0.6 mmol/L和1.2 mmol/L,最佳作用时间为24 h。建立奶牛乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质组技术,应用双向电泳(2-DE)结合质谱技术(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋氨酸和赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质的差异影响,发现蛋氨酸处理组,mitogen-activated protein kinase 1(MAPK1)和e EF1B蛋白质表达上调;并应用荧光定量PCR和Western blotting技术验证差异蛋白在转录水平和蛋白水平上的表达,与2-DE结果一致。实验过程中构建了真核表达载体p GCMVIRES-EGFP-MAPK1、e EF1B,转染至奶牛乳腺上皮细胞中,通过G418筛选获得稳定转染的细胞株;然后通过基因沉寂和过表达等技术,减少或增加MAPK1、e EF1B的表达水平后,检测泌乳信号转导通路中重要调控蛋白的表达情况,发现蛋氨酸和赖氨酸营养素可以通过调节MAPK1、e EF1B介导m TOR信号转导通路,影响Stat5的表达,进而调节乳蛋白的表达。以上实验结果为奶牛营养基因组学的研究提供了理论依据和技术方法。
关键词
蛋氨酸
赖氨酸
细胞核磷酸化蛋白质组
MAPK1
e
ef1b
奶牛乳腺上皮细胞
Keywords
M
e
thionin
e
Lysin
e
Nucl
e
ar phosphoprot
e
omics
MAPK1
e ef1b
Dairy cow mammary
e
pith
e
lial c
e
lls
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
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题名
作者
出处
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1
MAPK1和eEF1B对奶牛乳腺上皮细胞泌乳调控的作用及机理研究报告
陆黎敏
黄建国
李庆章
高学军
《科技创新导报》
2016
1
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