Cyclin D1,Cyclin E,c-Myc在涎腺良恶性多形性腺瘤中的表达研究

目的:研究cyclin D1,cyclin E,c-myc在涎腺多形性腺瘤中的表达,与临床生物学特性和细胞增殖的关系以及对于涎腺多形性腺瘤病理学诊断的意义。方法:采用免疫组化方法检测30例良性多形性腺瘤,30例细胞丰富型多形性腺瘤和30例恶性多形性腺瘤中cyclin D1、cyclin E、c-myc蛋白的表达水平,并与30例癌旁正常涎腺组织中的表达对比。结果:cyclin D1、cyclin E和c-myc在恶性多形性腺瘤中的阳性表达率明显高于良性和细胞丰富型多形性腺瘤(P<0.05),而三者在良性多形性腺瘤中的阳性表达率与在细胞丰富型多形性腺瘤的阳性表达率无统计学差异。cyclin E、cyclin D1和c-myc蛋白的异常表达与患者性别、是否复发、发生部位、肿瘤的大小无关(P<0.05)。在恶性肿瘤中,cyclin D1的异常表达与肿瘤的TNM分期相关(P<0.05),cyclin E蛋白的表达于肿瘤的浸润性相关(P<0.05)。c-myc的过表达与cyclin D1和cyclin E的阳性表达呈正相关。结论:cyclin D1、cyclinE、c-myc共同参与调控细胞周期,可作为预测多形性腺瘤恶变和预后的分子生物学指标之一,是多形性腺瘤病理学分类的依据之一。

卵巢上皮性肿瘤中c-myc和CD44v6的表达及其临床意义

目的探讨c-myc及CD44v6蛋白在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化法检测67例卵巢上皮性肿瘤及10例正常卵巢组织中c-myc、CD44v6的表达。结果恶性卵巢上皮性肿瘤中c-myc和CD44v6基因蛋白的阳性表达率分别为62.2%和26.7%,c-myc蛋白基因的表达在卵巢良性、交界性及恶性肿瘤间差异显著(P<0.05);但CD44v6的表达差异不显著(P>0.05)。不同组织学类型、分化程度及临床分期的卵巢癌中c-myc的表达差异不显著(P>0.05)。CD44v6的表达与卵巢肿瘤的组织学类型及临床分期无关,但与肿瘤的分化程度有关,且随分化程度的降低而增强。c-myc与CD44v6的表达具有相关性(P<0.05)。结论卵巢肿瘤组织中c-myc的表达与卵巢癌的发生有密切关系,提示c-myc可作为卵巢癌的肿瘤标记物;而CD44v6参与卵巢肿瘤的发生、发展。c-myc与CD44v6在卵巢肿瘤的发生、发展中可能起协同作用。

大肠癌APC、β-catenin、E-cadherin和c-myc的表达及意义

目的探讨腺瘤性息肉蛋白(APC)、β-catenin、E-cadherin和c-myc在大肠癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化法检测正常大肠黏膜、大肠腺瘤、大肠腺瘤恶变及大肠癌组织中上述4种蛋白的表达情况。结果大肠癌和大肠腺瘤恶变APC阳性率显著低于大肠腺瘤和正常大肠黏膜(P<0.01)。大肠癌、大肠腺瘤恶变和大肠腺瘤β-catenin胞质/胞核异位表达率、c-myc阳性率显著高于正常大肠黏膜(P<0.01),大肠癌的β-catenin异位表达率显著高于大肠腺瘤(P<0.01)。大肠癌中β-catenin、E-cadherin膜表达缺失率显著高于大肠腺瘤和正常大肠黏膜(P<0.01)。大肠癌中β-catenin异位表达与c-myc阳性表达、E-cadherin阳性表达呈正相关,与APC阳性表达呈负相关。结论APC失表达和(或)β-catenin异位表达、c-myc过表达与大肠癌的发生相关,β-catenin、E-cadherin膜表达缺失与大肠癌的侵袭、转移有关。

FISH检测c-MYC/IgH基因重排在淋巴组织增生性疾病中的意义

目的:探讨c-MYC/IgH基因重排在淋巴组织增生性疾病中的意义及其临床应用价值。方法:收集本院病理科的淋巴组织增生性病变10例,应用EBER原位杂交检测EBV感染情况,荧光原位杂交(FISH)检测淋巴组织增生性疾病c-MYC/IgH基因重排,PCR检测IgH/IgK或TCRγ基因重排,分析FISH技术在淋巴组织增生性疾病中的诊断和鉴别诊断意义。结果:10例淋巴组织增生性病变中仅1例EBV感染,所有病例均未检测到c-MYC/IgH基因重排,部分病例检测到c-MYC/IgH或TCRγ基因单克隆性重排。结论:通过FISH检测c-MYC/IgH基因重排在淋巴组织增生性疾病中的诊断价值尚需进一步探讨。

罗格列酮对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对人卵巢癌SKOV3细胞生长和凋亡的影响。方法在SKOV3细胞培养液中加入不同浓度RSG(0.1、1.0、10和100μmol/L),采用MTT法测定RSG对SKOV3细胞增殖的影响;流式细胞术检测各组细胞凋亡率和细胞周期的变化;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化;荧光定量RT-PCR技术和免疫细胞化学方法检测干预前后细胞中PPARγ、c-myc的mRNA和蛋白水平变化。结果MTT法结果显示,RSG可抑制SKOV3细胞生长,并呈明显的浓度和时间依赖方式。流式细胞术结果显示,RSG能明显诱导SKOV3细胞凋亡,在10、100μmol/L RSG作用于SKOV3细胞24 h后,凋亡率分别为45.75%和51.97%,均明显高于对照组(6.82%,P<0.05);并使细胞周期阻止于G1期,呈浓度依赖方式。Hoechst33258荧光染色显示RSG处理后的SKOV3细胞中出现凋亡小体。免疫细胞化学和荧光定量RT-PCR结果显示,人卵巢癌SKOV3细胞表达PPARγ,RSG作用于SKOV3细胞24 h后PPARγ的mRNA和蛋白表达水平上调,而c-myc的mRNA和蛋白表达水平下调。结论RSG具有抑制人卵巢癌SKOV3细胞生长和诱导凋亡作用,使细胞周期阻滞于G1期;并通过活化PPARγ,下调c-myc的mRNA和蛋白表达水平。

膜联蛋白A5对胶质瘤细胞侵袭和迁移的调节作用及机制

目的研究膜联蛋白A5对胶质瘤细胞侵袭和迁移的调节作用及机制。方法免疫组化法检测100例神经胶质瘤组织和20例正常脑组织中膜联蛋白A5的表达。对人神经胶质瘤细胞系(U251)转染靶向膜联蛋白A5的siRNA(si-Annexin A5组),并通过RT-PCR和蛋白印迹分析验证膜联蛋白A5表达下调。MTT实验和集落形成实验检测U251细胞的增殖能力,流式细胞术和Hoechst 33258染色检测U251细胞凋亡,伤口愈合实验和Matrigel Transwell侵袭实验观察U251细胞的迁移和侵袭能力。蛋白印迹分析U251细胞中Raf、p-Raf、MEK1/2、p-MEK1/2、ERK1/2、p-ERK1/2、c-Myc和E-Cadherin的表达。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中的膜联蛋白A5的mRNA表达升高了2.45倍,蛋白表达升高了2.87倍(P<0.001);Pearson相关分析显示,随着肿瘤级别的升高,膜联蛋白A5阳性率逐渐升高,并且肿瘤级别与阳性率呈正相关(r=1.000,P<0.001)。与对照组相比,si-Annexin A5组的U251细胞在培养48、72 h的细胞活力分别降低了29.46%和40.43%(P<0.001)。与对照组相比, si-Annexin A5组的集落形成率降低了68.58%,而细胞凋亡率升高了24.41倍(P<0.001);si-Annexin A5组的迁移细胞率降低了65.35%,侵袭细胞率降低了68.80%(P<0.001);si-Annexin A5组的p-Raf、p-MEK1/2、p-ERK1/2和c-Myc的蛋白表达均明显降低(依次降低54.67%、70.37%、60.26%、54.95%),而E-Cadherin升高了3.58倍(P<0.001)。结论下调膜联蛋白A5通过抑制Raf/MEK/ERK信号通路抑制胶质瘤细胞的生长和运动能力,并诱导细胞凋亡。

胃宁颗粒对胃癌前病变基因甲基化的相关调控

目的通过对模型大鼠胃癌前病变组织中E-cadherin、P16、c-myc基因甲基化的检测,研究胃宁颗粒对胃癌前病变的表观遗传修饰作用。方法采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)方法检测正常组、模型组、治疗组(高、中、低)中E-cadherin、P16、c-myc基因甲基化状态。结果造模24周后,模型组大鼠病理诊断出现肠化生、不典型增生等病理改变。高、中、低治疗组大鼠病理诊断呈不同程度糜烂但较模型组轻。E-cadherin基因各治疗组与模型组比较P>0.0125无统计学差异;各治疗组之间P>0.0125无统计学差异。P16基因高剂量组与模型组比较P>0.0125无统计学差异;中、低治疗组与模型组比较P<0.0125有统计学意义。c-myc基因高、低剂量组与模型组比较P>0.0125无统计学差异;中剂量组与模型组比较,有统计学意义。结论 N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)为主的多因素联合攻击法诱发的大鼠胃癌前病变模型造模成功。胃宁颗粒对E-cadherin基因甲基化无相关作用;对p16、c-myc基因甲基化发生相关调控作用。

益气养阴活血方对兔动脉内膜损伤后PDGF-BB和c-myc水平的影响

目的:探讨益气养阴活血方防治经皮冠状动脉介入治疗后再狭窄的可能性。方法:将健康新西兰兔30只随机分为正常组、模型组、西药对照组和中药治疗组。通过喂养高脂饲料同时予以腹主动脉内膜剥脱术的方法造成兔动脉内膜损伤,术后2周取材,RT-PCR法测定c-myc和PDGF-BB水平。结果:正常组和中药治疗组PDGF-BB和c-myc水平明显低于模型组(P<0.01,P<0.05),西药对照组PDGF-BB水平比模型组显著降低(P<0.05);c-myc和PDGF-BB mRNA呈正相关,模型组相关系数为8.603,P<0.05,中药治疗组相关系数为2.672,P<0.05。结论:中药通过抑制c-myc的表达来抑制PDGF-BB的合成和分泌。提示益气养阴活血方可能具有防治经皮冠状动脉介入治疗后再狭窄的作用。

低毫安的电化学疗法对人乳腺癌MCF-7细胞的细胞周期及c-myc和cyclin E蛋白表达的影响

目的探讨低毫安(10 m1A)的电化学治疗对体外人乳腺癌MCF-7细胞的细胞周期分布及c-myc和cyclin E表达的影响。方法电化学治疗后培养6h和24h的细胞用MTT法、流式细胞术、免疫组化法测定细胞抑制率、细胞周期分布及细胞c-myc和cyclin E蛋白的表达。结果与对照组相比,治疗组人乳腺癌MCF-7细胞抑制率均随电量增加依次增高(P<0.05);治疗组随电量的增加处于G0/G1期的比例逐渐增高,而S期细胞比例逐渐下降(P<0.05),G2/M期变化不明显(P>0.05);治疗组c-myc和cyclin E表达随电量的增加阳性细胞数逐渐减少。电化学治疗后培养24h比6h各组指标变化显著。结论电化学治疗能通过调节人乳腺癌MCF-7细胞c-myc和cyclin E蛋白的表达,促使细胞G0/G1期阻滞,从而抑制细胞生长。

MicroRNA-143通过抑制EMT机制延缓膀胱癌演进

目的:研究MicroRNA-143在膀胱癌中通过抑制EMT机制,降低肿瘤浸润、转移的风险,从而延缓膀胱癌演进。材料和方法:分别测定不同分期分级的膀胱癌病例标本及膀胱癌细胞株中MicroRNA-143、c-myc及E-Cadherin的表达,分析它们之间统计学意义;转染MicroRNA-143及c-myc的siRNA至浸润性膀胱癌细胞株中,测定E-Cadherin表达,通过侵袭及迁移等生物学行为测定EMT机制。结果:不论病例标本还是细胞株,恶性程度高的膀胱癌中MicroRNA-143、E-Cadherin表达均低于浅表性膀胱癌,而c-myc则反之;转染MicroRNA-143及c-myc的siRNA至浸润性膀胱癌细胞株中后,E-Cadherin表达增高,细胞株的侵袭及迁移能力降低,EMT受抑制。结论:MicroRNA-143通过下调其靶基因c-myc,致使E-Cadherin表达增加,抑制EMT机制,延缓肿瘤演进。

二硫化碳对大鼠睾丸c-myc表达的影响

目的检测二硫化碳(CS2)对大鼠睾丸c-myc表达水平的影响。方法取健康Wistar雄性大鼠36只随机分为6组,以不同浓度CS2(0、50、250、1250mg/m3)静式吸入染毒,共10周。另设1250mg/m3(CS2)加VitE(250mg/kg)组和单纯VitE(250mg/kg)组,作为实验干预组,VitE拌入饲料。染毒结束后,处死动物取出睾丸组织制备组织匀浆,分别测定各组超氧化的歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。蛋白定量后用WesternBlot法检测c-myc表达水平。结果睾丸中SOD活力下降,MDA含量上升,前者在各个浓度时与对照组比较均有显著差异(P<0.01),后者在最高浓度时与对照组比较有显著差异(P<0.01)。c-myc的表达出现双向变化,即在低浓度时被抑制,中、高浓度时被诱导,且最高浓度时与对照组比较有显著差异(P<0.05)。当用VitE干预后,SOD活性回升(P<0.05),MDA含量下降(P<0.01),c-myc的表达明显降低(P<0.05)。结论脂质过氧化可能参与了CS2对大鼠睾丸c-myc表达的调节。

增强C/EBPε表达对人粒-单核性白血病细胞U-937分化的作用(英文)

背景与目的:CCAAT-增强子结合蛋白(CCAAT-enhancerbindingproteinε,C/EBPε)是一种在髓系细胞中特异性表达的核内转录因子,可能是髓系细胞分化过程中重要的调控因子,并且参与了一系列髓系细胞特异性基因的转录激活。本研究拟探讨C/EBPε的细胞特异性表达,研究过量表达C/EBPε对人粒-单核性白血病细胞U-937中c-Myc表达、细胞周期及细胞分化的影响。方法:应用逆转录-聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)检测五种不同类型的造血系细胞中C/EBPε的表达水平。根据RT-PCR的结果,选择人粒-单核性白血病细胞U-937作为过量表达C/EBPε的对象。电穿孔转染C/EBPε表达质粒pcDNA3.1-C/EBPε,G418筛选稳定表达细胞并命名为U-937-C/EBPε32。RT-PCR与Westernblot检测转染细胞内C/EBPε与c-Myc的表达水平,流式细胞仪检测过量表达C/EBPε对U-937细胞周期及细胞分化的影响。结果:过量表达C/EBPε可以显著增强转染U-937细胞表面粒细胞特异性表面抗原CD11b的表达,U-937-C/EBPε32细胞表面CD11b的阳性率达92.56%,而在U937与U-937-pcDNA3.1细胞表面分别为77.46%与74.81%,但c-Myc的表达与细胞周期分布未受影响。结论:C/EBPε可能是髓系细胞向粒细胞分化过程中非常重要的转录调控因子。

人细胞分裂控制蛋白4在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的检测人细胞分裂控制蛋白4(hCDC4)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达情况,分析其与临床病理参数之间的相关性。方法收集52例手术切除的OSCC组织及12例正常组织,运用免疫组织化学技术检测hCDC4表达情况,分析hCDC4蛋白表达与临床病理参数之间的相关性。应用hCDC4-siRNA瞬时转染OSCC细胞系Tca8113,MTT及蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞增殖能力及c-Myc和Cyclin E蛋白表达变化。结果 hCDC4蛋白在正常组织中的表达显著高于对应的OSCC组织(83.3%vs.25.0%,P<0.05);hCDC4蛋白低表达与较大肿瘤直径(≥4cm)和高临床分期(Ⅲ+Ⅳ)显著相关(P<0.05);敲低Tca8113细胞中hCDC4表达,导致细胞增殖能力显著增强(P<0.05)以及c-Myc和Cyclin E蛋白蓄积。结论 hCDC4表达缺失导致c-Myc和Cyclin E蛋白蓄积可能是促进肿瘤进展的重要因素。

乳腺浸润性导管癌中c-Myc、p27和周期蛋白E的表达

目的探讨乳腺浸润性导管癌中c-Myc、p27及细胞周期蛋白E(cyclin E)的表达、相互关系及其意义。方法应用免疫组化方法检测42例乳腺浸润性导管癌中c-Myc、p27及周期蛋白E蛋白的表达情况。结果c-Myc和周期蛋白E在42例乳腺浸润性导管癌中的阳性表达率分别为66·67%(28/42)和54·76%(23/42);p27的阴性率为52·38%(22/42)。28例c-Myc阳性表达的乳腺浸润性导管癌中周期蛋白E阳性表达的22例,p27阳性表达者8例;在20例p27阳性表达的乳腺浸润性导管癌中,周期蛋白E阳性6例,14例阴性。结论(1)c-Myc蛋白的表达与p27呈负相关关系,而与周期蛋白E的表达呈正相关;(2)p27的表达与周期蛋白E的蛋白表达间呈负相关;(3)乳腺浸润性导管癌中c-Myc对周期蛋白E/CDK2复合物活性的调控至少部分地依赖于c-Myc蛋白对p27蛋白的调节。

肾细胞癌NDRG-1和E-cadherin表达及其与临床病理因素、MVD及预后的关系

目的:研究N-myc下游调节基因(NDRG-1)和上皮型钙粘素(E-cadherin)在肾细胞癌组织中的表达,探讨其与肾细胞癌临床病理因素、微血管密度(MVD)及预后的关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测49例肾细胞癌组织及相对应的癌旁肾脏组织中NDRG-1、E-cadherin表达情况。结果:NDRG-1和E-cadherin在正常肾组织表达均高于肾细胞癌组织,差异有显著性(P<0.01);二者随肾细胞癌肿瘤组织学分级、临床分期增高表达减弱,有肾门淋巴结转移者表达低于无淋巴结转移者,E-cadherin表达降低还与肾盂浸润、肾静脉癌栓相关,差异均有显著性(P<0.05);NDRG-1和E-cadherin表达均与肾细胞癌MVD呈负相关性(P<0.05);NDRG-1和E-cadherin表达阴性病例术后存活时间均显著短于阳性病例(P=0.001);肾细胞癌组织中NDRG-1和E-cadherin表达无相关性(r=-0.253,P=0.086)。结论:NDRG-1和E-cadherin表达降低与肾细胞癌的浸润、转移及血管生成和生存时间密切相关,检测NDRG-1和E-cadherin可作为预测肾细胞癌浸润转移及预后有意义的指标。

乳腺癌分子亚型中c-myc和p21的表达特点及相互关系

目的研究c-myc和p21在乳腺癌分子亚型中的表达特点及相互关系。方法将1452例乳腺癌标本制成组织芯片,应用免疫组化MaxVision快捷法检测其中c-myc和p21的表达水平。结果根据Nielsen分型,基底样型、Her-2过表达型、裸表达型、luminalA和B型中c-myc的表达率分别为72.8%(147/202)、71.6%(126/176)、63.4%(246/388)、59.5%(235/395)和55.1%(27/49);p21的表达率分别为6%(13/218)、10.9%(20/184)、7.6%(31/407)、16.7%(65/389)和27.5%(14/51)。c-myc在基底样型和Her-2过表达型中表达均高于luminalA(P<0.01)和luminalB型(P<0.05)。p21在ER阴性的基底样型、Her-2过表达型和裸表达型中的表达明显低于ER阳性的lunimalA和B型(P<0.01)。p21的阳性表达与ER相关(P<0.01)。c-myc表达和p21呈负相关(P<0.01)。结论 p21在ER阴性乳腺癌亚型中的表达下调,可能由于c-myc过表达所致,两者相互作用可能参与了ER阴性乳腺癌分子亚型的发生。

NELFE通过抑制NDRG2表达促进三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭

目的探讨负性延长因子E(negative elongation factor E,NELFE)对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞侵袭和迁移的作用及其作用机制。方法qRT-PCR检测NELFE在TNBC组织和癌旁组织中的表达;利用慢病毒转染技术构建NELFE表达上调的MDA-MB-231细胞系;Transwell小室实验观察NELFE表达升高对MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的影响;RNA稳定性试验检测NELFE对N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene2,NDRG2)mRNA稳定性的影响;Western blotting检测NELFE对NDRG2蛋白的调控作用。结果NELFE在TNBC组织中表达升高;过表达NELFE后,MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力明显增强,NDRG2 mRNA稳定性降低,NDRG2蛋白表达下调;在NELFE过表达的MDA-MB-231细胞系中上调NDRG2表达时,细胞迁移、侵袭能力降低。结论NELFE通过降低NDRG2 mRNA稳定性抑制其表达,促进TNBC细胞的迁移和侵袭能力。

子宫内膜癌中c-Myc和cyclin E的表达及临床意义

目的探讨c-Myc和细胞周期素E(cyclin E)蛋白在子宫内膜癌(EC)中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学法分别检测c-Myc、cyclin E蛋白在正常增生期子宫内膜、非典型增生子宫内膜和EC中的表达,并分析两种蛋白在子宫内膜不同病变中表达的相关性。结果 c-Myc蛋白在正常子宫增生期内膜、非典型增生子宫内膜和EC中的阳性表达率分别为20.0%(3/15)、73.3%(22/30)和81.0%(47/58),cyclin E蛋白的阳性表达率分别为13.3%(2/15)、56.7%(17/30)和84.5%(49/58)。EC中c-Myc蛋白表达与组织分化、临床分期和浸润深度相关(P<0.05),而cyclin E蛋白表达与各临床病理参数均无关。EC中c-Myc蛋白与cyclin E蛋白表达呈正相关(r=0.400,P=0.002)。c-Myc、cyclin E蛋白在轻度与重度非典型增生子宫内膜中的表达差异均有统计学意义(P=0.021,P=0.002)。结论 c-Myc和cyclin E在激素依赖型的EC的发生、发展中有协同作用,c-Myc和cyclin E蛋白在重度非典型增生子宫内膜和EC中的异常表达可能成为癌前病变筛查指标之一。

叶酸对二甲肼诱发小鼠大肠癌干预及其机制的研究

目的:观察在二甲肼(dimethyl-hydrazine,DMH)诱导小鼠大肠癌的过程中,通过叶酸进行化学干预能否预防肿瘤的发生。方法:以DMH诱发ICR小鼠大肠癌,在诱癌过程中用叶酸进行干预,观察其对肿瘤发生率的影响。定量PCR检测癌基因c-myc转录水平。甲基化特异性PCR(MSP)分析癌基因c-myc启动子区甲基化情况。结果:补充叶酸使小鼠大肠癌的发生率由95%降低至45%;MSP分析9例c-myc表达升高的DMH造模组中有4例发现肿瘤组织DNA启动子区低甲基化,并且发现这4只小鼠的叶酸水平为(71.65±7.04)ng/mL,低于该组其他小鼠(85.75±11.78)ng/mL,P<0.05。结论:通过补充叶酸能有效降低DMH诱发小鼠大肠癌的发生率,其预防肿瘤发生的作用机制与其对基因表达的表观遗传调控有关。