以绵毛优若藜叶片和嫩茎为材料,对盆栽的绵毛优若藜小苗进行梯度低温胁迫处理后,采用SMART(switching mechanism at 5’end of RNA transcript)与DSN(duplex-specific nuclease)均一化相结合技术构建绵毛优若藜冷胁迫均一化全长c...以绵毛优若藜叶片和嫩茎为材料,对盆栽的绵毛优若藜小苗进行梯度低温胁迫处理后,采用SMART(switching mechanism at 5’end of RNA transcript)与DSN(duplex-specific nuclease)均一化相结合技术构建绵毛优若藜冷胁迫均一化全长cDNA文库。经测定,原始文库的库容量为1.4×10^6pfu。PCR检测结果显示:插入片段的长度在0.5~3kb之间,平均大于1kb,表明文库构建效果较好。该文库包含有大量的未知基因,有待进一步的发掘和研究。展开更多
目的研究犬贾第虫病毒全长cDNA体外RNA转录体的感染性,为进一步研究犬贾第虫病毒的特性、深入阐明病毒的致病机理奠定基础。方法根据已知的GCV(长春株)基因序列设计一套特异性重叠引物,利用RT-PCR技术,构建感染性犬贾第虫病毒基因组全长...目的研究犬贾第虫病毒全长cDNA体外RNA转录体的感染性,为进一步研究犬贾第虫病毒的特性、深入阐明病毒的致病机理奠定基础。方法根据已知的GCV(长春株)基因序列设计一套特异性重叠引物,利用RT-PCR技术,构建感染性犬贾第虫病毒基因组全长cDNA;用T7 RiboMAXTM Express Large Scale RNA Production System制备体外转录体,电穿孔方法感染无病毒株犬贾第虫滋养体,通过提取总核酸和超薄切片电镜观察感染情况。结果成功构建犬贾第虫病毒基因组全长cDNA,体外转录体电穿孔后72 h,提取的总核酸中发现6.2 kb的dsRNA带,电镜观察到完整的病毒粒子。结论该转录体具有感染性,可以在无病毒株犬贾第虫滋养体内复制表达,为进一步研究GCV奠定基础。展开更多
文摘以绵毛优若藜叶片和嫩茎为材料,对盆栽的绵毛优若藜小苗进行梯度低温胁迫处理后,采用SMART(switching mechanism at 5’end of RNA transcript)与DSN(duplex-specific nuclease)均一化相结合技术构建绵毛优若藜冷胁迫均一化全长cDNA文库。经测定,原始文库的库容量为1.4×10^6pfu。PCR检测结果显示:插入片段的长度在0.5~3kb之间,平均大于1kb,表明文库构建效果较好。该文库包含有大量的未知基因,有待进一步的发掘和研究。
文摘【目的】本文旨在获得雨生红球藻中蓝光受体向光素(Phototropin,PHOT)的全长序列并进行生物信息分析。【方法】采用同源克隆和RACE结合的方法获得雨生红球藻中编码HaePHOT的c DNA序列全长,并对HaePHOT进行生物信息分析。【结果】HaePHOT的开放阅读框全长为2139 bp,编码712个氨基酸,预测的等电点8.66,理论分子量78.73 k D。经BLASTP程序分析,与拟南芥来源PHOT的相似性达到58%,与莱茵衣藻来源PHOT的相似性达到68%。通过序列比对和结构域分析,PHOT蛋白的典型结构域存在于HaePHOT中,包括发色团结合和激酶结构域。系统进化分析表明,高等植物和真核绿藻来源PHOTs来自共同祖先。【结论】首次从雨生红球藻中获得编码PHOT的基因序列,为下一步雨生红球藻中PHOT的表达和功能研究奠定基础,同时为解析蓝光调控雨生红球藻虾青素合成的分子机制提供线索。
文摘目的研究犬贾第虫病毒全长cDNA体外RNA转录体的感染性,为进一步研究犬贾第虫病毒的特性、深入阐明病毒的致病机理奠定基础。方法根据已知的GCV(长春株)基因序列设计一套特异性重叠引物,利用RT-PCR技术,构建感染性犬贾第虫病毒基因组全长cDNA;用T7 RiboMAXTM Express Large Scale RNA Production System制备体外转录体,电穿孔方法感染无病毒株犬贾第虫滋养体,通过提取总核酸和超薄切片电镜观察感染情况。结果成功构建犬贾第虫病毒基因组全长cDNA,体外转录体电穿孔后72 h,提取的总核酸中发现6.2 kb的dsRNA带,电镜观察到完整的病毒粒子。结论该转录体具有感染性,可以在无病毒株犬贾第虫滋养体内复制表达,为进一步研究GCV奠定基础。