基于mRNA水平的差异表达基因筛选技术

随着分子生物学技术的深入发展,基因组研究重点已经由基因组测序转向基因功能鉴定,即由结构基因组学向功能基因组学转变。研究获得不同处理下基因的差异表达谱是功能基因组学的重要一环,目前已经有多种检测基因差异表达的技术可供选用。在减法杂交技术和PCR基础上发展起来的DDRT-PCR、cDNA-RDA、cDNA-AFLP和SSH技术因其实用性而得到广泛的应用,并取得了令人满意的结果。

一种新的基因克隆方法——消减杂交差异显示分析方法

消减杂交差异显示分析方法(subtractivehybridizationdifferencedisplay,SHDD)是近年来在cD-NA代表性差异分析方法(cDNARepresentationalDifferenceAnalysis,cDNARDA)和mRNA差异显示分析方法(mRNADifferentialDisplay,mRNADD)的基础上发展而来的一种克隆基因的新方法。SHDD方法结合了cDNARDA的特异性特点与mRNADD在双向筛查差异片段和较高的检测灵敏度方面的优势。在具体技术路线设计上,SHDD最大的特点就是在两样本间双向一轮与二轮均衡、温和消减杂交基础上引入了同位素mRNADD差异显示技术,使得该方法在克隆低丰度信息及较弱差异信息、提高差异分析结果的特异性、减少假阳性、减少重复差异结果,提高差异分析的信息量同时又降低工作量等方面明显优于经典的mRNADD和cDNARDA方法。