结肠腺癌细胞中eIF-4E调节NF-κB表达及对乙酰肝素酶转录表达和活性的影响

背景与目的:近期研究显示,人类肿瘤细胞部分转录因子可能受真核细胞起始因子-4E(eukaryoticinitiationfactor4E,eIF-4E)在翻译水平上的调节,此关键转录因子表达水平的变化可从转录水平改变某些恶性相关基因产物的表达。本研究旨在探讨结肠腺癌LS-174T细胞中eIF-4E对转录因子NF-κB表达和活性的影响,并观察NF-κB活性水平对乙酰肝素酶基因转录的作用。方法:将与eIF-4EmRNA翻译起始区互补的反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)经脂质体包裹后转染人结肠癌细胞LS-174T,以阻抑eIF-4E表达。随之使用Westernblot和电泳迁移改变分析(electrophoreticmobilityshiftassays,EMSA)方法检测NF-κB蛋白表达量及活性水平。通过RT-PCR、Westernblot方法观察乙酰肝素酶转录水平和蛋白表达量的改变;乙酰肝素酶活力采用特异酶活性检测方法,以放射性标记的硫酸乙酰肝素做为底物,凝胶过滤层析分离酶降解产物来分析。结果:针对eIF-4E的20个残基的ASODN经脂质体转染LS-174T细胞后,eIF-4E基因表达在转录和翻译水平都受到显著阻滞。eIF-4E基因阻抑表达引起结肠癌LS-174T细胞NF-κB蛋白表达量及其活性的显著下降;此外,转录因子NF-κB的下调也导致乙酰肝素酶基因的转录表达下降。

宫颈癌新辅助化疗前后eIF-4E、Ki-67阳性表达的变化

目的探讨可预测化疗疗效的指标。方法采用奈得铂、异环磷酰胺、硫酸培洛霉素治疗48例宫颈癌病人,免疫组织化学法检测组织中eif-4E、Ki-67。结果化疗奏效率58.8%。eIF-4E在奏效组、无效组用药前后阳性率差异不显著(χ2=0.071 5,P>0.05)(χ2=0.404 0,P=0.751 2)。奏效组及无效组,用药前Ki-67阳性数差异不显著(P=0.72);用药14 d后奏效组较治疗前有减少趋势(P=0.21),无效组治疗14 d后Ki-67阳性细胞数显著增加(P<0.05)。结论 eIF-4E不能预测化疗有效性,而Ki-67在1个疗程终止后组织中阳性数的变化能预测宫颈癌新辅助化疗的疗效。

eIF-4E在喉癌和下咽癌组织中的表达及意义

【目的】 检测真核生物蛋白合成启始因子4E(eIF-4E)在喉癌和下咽癌?癌旁组织?安全边缘和正常黏膜的表达,探讨在喉癌?下咽癌发生?发展中的意义?【方法】25例标本中,喉癌18例,下咽癌7例?采用RT-PCR和Western blot分析喉癌和下咽癌的肿瘤核心,癌旁组织,安全切缘及喉腔正常黏膜中eIF-4E的表达水平?【结果】 eIF-4E的mRNA和蛋白在正常黏膜(0.27±0.11和12.20±5.56)?安全边缘组织(0.27±0.10 和12.90±5.08)?癌旁组织(0.49±0.15和 36.32±10.42)和癌肿核心组织(0.82±0.25和75.81±20.77)的表达呈递增趋势?【结论】 eIF-4E在喉癌和下咽癌中均过度表达,可考虑作为喉癌和下咽癌分子水平的肿瘤标志?

乳腺癌组织中eIF-4E基因对VEGF-C表达及淋巴转移的影响

目的:探讨人乳腺癌组织中真核细胞起始因子-4E(eIF-4E)对特异性淋巴管内皮生长因子C(VEGF-C)表达及乳腺癌淋巴转移的影响。方法:分别应用Westernblot法和免疫组化SP法检测57例乳腺癌组织中eIF-4E蛋白水平及VEGF-C表达,VEGFR-3抗体免疫染色计数乳腺癌微淋巴管密度(LMVD)。结果:34例淋巴结阳性组织中eIF-4E水平显著高于淋巴结转移阴性组(10.11±0.30和5.94±0.23,t=5.37,P<0.01)。VEGF-C在淋巴结阳性组染色强度明显增高(4.20±0.98),同时VEGFR-3阳性淋巴管密度提高(25.28±5.33),与淋巴结阴性组(2.57±0.88和17.40±4.87)比较差异有统计学意义,t值分别为2.18和2.41,P值均<0.05。相关分析表明,eIF-4E水平与VEGF-C表达及淋巴结转移呈正相关。结论:eIF-4E可能通过上调VEGF-C的表达诱导乳腺癌淋巴管的生成,进而调控乳腺癌淋巴结转移。eIF-4E可作为判定乳腺癌淋巴结转移的参考指标。

eIF-4E腺病毒载体构建及对乳腺癌MCF-7细胞转移能力的影响

目的:构建乳腺癌真核细胞起始因子——4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF-4E)基因重组腺病毒载体,并观察其对乳腺癌细胞MCF-7转移能力的影响。方法:应用基因重组技术将eIF-4E基因构建于腺病毒载体pAD-X,转染293包装细胞得到高滴度重组腺病毒,并用real-time PCR进行eIF-4E基因表达的验证。将重组腺病毒pAD-eIF-4E感染MCF-7细胞,应用siRNA封闭eIF-4E后通过transwell小室法观察其对细胞侵袭和运动能力的影响。结果:酶切结果与预期相符,real-time PCR可检测到转染后MCF-7细胞有eIF-4E基因过表达。且病毒转染后transwell小室可见,与eIF-4E过表达组相比较,eIF-4E siRNA封闭组MCF-7细胞的侵袭和运动能力均受到显著的抑制(均为p<0.01)。结论:重组eIF-4E腺病毒载体正确构建,抑制eIF-4E的表达,对乳腺癌细胞MCF-7的侵袭和运动都有抑制作用。

雷帕霉素对柯萨奇病毒B3诱导的心肌成纤维细胞eIF-4E表达的影响

目的探讨雷帕霉素对柯萨奇病毒B3诱导的心肌成纤维细胞eIF-4E表达的影响,寻找病毒性心肌炎的药物治疗靶点。方法选用MOI为0.5 PFU/cell的柯萨奇病毒B3感染心肌成纤维细胞,利用细胞形态及RT-PCR法检测细胞内柯萨奇病毒B3 mRNA表达,确定柯萨奇病毒B3成功感染心肌成纤维细胞。以10nM雷帕霉素干预,采用RT-PCR及Western blot检测对照组、病毒组(MOI为0.5 PFU/cell)、雷帕霉素组及病毒+雷帕霉素组eIF-4E表达。结果MOI为0.5 PFU/cell的柯萨奇病毒B3感染心肌成纤维细胞,透射电镜下可见细胞形态改变,胞浆内可见病毒颗粒。RT-PCR结果显示:感染后第1天、第2天、第3天及传代后第2天细胞有病毒mRNA表达。RT-PCR检测上述4组的eIF-4E/β-actin光密度比值分别为:0.73±0.07,0.87±0.03,0.32±0.03,0.56±0.04;Western blot灰度值分别为:0.79±0.09,1.35±0.12,0.55±0.04,0.62±0.07;RT-PCR及Western blot结果显示:病毒组eIF-4E表达高于对照组,雷帕霉素组和病毒+雷帕霉素组低于对照组及病毒组(均P<0.05)。结论柯萨奇病毒B3可感染心肌成纤维细胞,并使eIF-4E表达增加,雷帕霉素可抑制其表达,提示心肌成纤维细胞可能通过mTOR/eIF-4E信号通路参与病毒性心肌炎的发病机制,雷帕霉素对病毒性心肌炎有潜在的治疗作用。

喉癌组织中eIF-4E、p53、ras和c-myc的表达及意义

【目的】探讨eIF-4E、p53、ras和c-myc在喉癌原发灶的表达及意义。【方法】对42例临床分期为Ⅱ、Ⅲ期的喉癌患者行手术治疗,采用免疫组化方法检测其喉癌原发灶标本eIF-4E、p53、ras和c-myc表达。【结果】所有标本中, eIF-4E全部表达阳性,p53阳性24例,ras阳性17例,c-myc阳性14例。原发灶eIF-4E、c-myc、ras和p53的表达与患者年龄、性别、临床分期、病变部位和病理分级、肿瘤复发、吸烟史和术后放疗史等临床特征无统计学意义:c-myc或ras阳性组喉癌标本elF-4E呈高表达。【结论】喉癌原发灶eIF-4E、c-myc、ras和p53的表达与各临床特征无关。eIF-4E的表达与c-myc和res有关,后者可能是其上游基因,调控前者的表达。

结肠腺癌细胞株eIF-4E对NF-κB表达的影响及诱导凋亡机理的探讨

目的 研究真核细胞起始因子 (EukaryoticInitiationFactor 4E ,eIF 4E)对NF κB表达及活性水平的影响 ,并对其阻滞后诱导肿瘤细胞凋亡的途径进行探讨。方法 应用脂质体包裹与eIF 4EmRNA翻译起始点互补的反义寡核苷酸 (asODN) ,处理人大肠腺癌细胞LS 174T。使用Westernblot和RT PCR方法分别检测eIF 4E被阻抑后其转录和翻译水平的改变。EMSA用来比较eIF 4E阻滞前后NF κB活性的改变。采用流式细胞仪检测LS 174T细胞凋亡。结果 eIF 4E被阻抑表达后 ,NF κB蛋白表达和活性水平也有显著下降。伴随eIF 4E表达和NF κB活性水平下降 ,LS 174T细胞的凋亡率显著升高。结论 本试验证明NF κB受eIF 4E的翻译调控 ,eIF 4E的抗凋亡作用部分可能是通过调节NF κB活性来实现的。此结论对于结肠癌试验性和肿瘤临床的基因治疗具有一定意义。

阻抑eIF-4E对大肠腺癌细胞乙酰肝素酶mRNA水平及其表达的影响

目的确定阻抑大肠腺癌LS-174T细胞中过量表达的真核细胞起始因子-4E(eIF-4E)是否促进乙酰肝素酶mRNA的降解,并改变其翻译表达水平。方法应用脂质体包裹与eIF-4E mRNA翻译起始点互补的反义寡聚核苷酸,转染处理人大肠腺癌细胞LS-174T。Western blotting和RT-PCR方法分别检测eIF-4E被阻抑后转录和翻译水平的改变。采用Northern blotting定量检测乙酰肝素酶mRNA的细胞内水平,Western blotting检测其蛋白表达水平的改变。结果反义寡聚核苷酸经脂质体转染LS-174T细胞后,eIF-4E基因表达明显受到抑制,其蛋白表达产物也显著下降。伴随eIF-4E被阻抑表达,Northern blotting结果显示乙酰肝素酶mRNA水平下降,且其蛋白翻译表达量也降低。结论阻抑eIF-4E影响LS-174T细胞乙酰肝素酶mRNA的稳定表达,促使其降解,并降低乙酰肝素酶表达。

eIF-4E基因在非小细胞肺癌中的表达及与化疗敏感性的关系

目的探讨e IF-4E基因在非小细胞肺癌(Non small cell lung cancer,NSCLC)表达及与化疗敏感性的关系。方法选用外科手术切除NSCLC组织60例以及癌旁正常组织30例作为对照,通过免疫组化检测癌组织以及正常肺组织中el F-4E的表达。NSCLC患者术后接受榄香烯顺铂治疗至少两周以上。比较el F-4E在癌组织以及正常肺组织中的表达、e IF-4E阴性表达患者和阳性表达患者的总生存期和化疗效果。结果 e IF-4E在NSCLC患者癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.01);e IF-4E阴性表达患者的OS较阳性患者明显延长,阳性表达患者的化疗完全缓解率亦显著低于e IF-4E阴性表达患者(P<0.01)。结论 e IF-4E可能成为NSCLC诊断的标志物,e IF-4E表达水平检测可用于NSCLC患者个体治疗方案的选择。

大肠癌eIF-4Ec、yclinD1表达及意义

目的探讨eIF-4E和cyclinD1在大肠腺癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组化S-P法检测78例大肠腺癌、20例正常大肠黏膜以及30例大肠腺瘤中eIF-4E和cyclinD1的表达情况。结果 eIF-4E和cyclinD1在大肠腺癌中的阳性率均显著高于正常大肠黏膜和大肠腺瘤(P均<0.05)。eIF-4E表达与大肠腺癌的病理分化程度、淋巴结转移和临床分期均有相关性(P均<0.05)。结论 eIF-4E和cyclinD1在大肠癌中表达上调,二者可能共同参与了大肠癌的转移,在大肠癌的发生发展中起重要作用。

eIF-4E与肿瘤

eIF 4E是最重要的翻译起始因子 ,在真核细胞的蛋白质合成中起重要作用。近年来对eIF 4E的研究主要集中在其对细胞生长分化有关蛋白的调控 ,其与肿瘤发生发展的关系及临床应用价值等方面。

eIF-4E在宫颈癌组织和细胞中的表达及其临床意义

目的分析真核细胞起始因子-4E(eIF-4E)基因在宫颈癌中的表达及其与宫颈癌临床病理类型、临床手术分期以及病理分级的关系,探讨其临床意义。方法应用免疫组织化学方法(ABC法)测定48例宫颈癌组织、癌旁组织及11例正常宫颈组织中eIF-4E蛋白表达水平,应用细胞免疫化学方法检测Hale细胞中eIF-4E蛋白表达水平,并将检测结果与相关临床因素进行分析。结果48例宫颈癌组织中eIF-4E蛋白的阳性表达率为81.3%,明显高于相应的癌旁组织及正常宫颈组织(P<0.01);eIF-4E蛋白在Hale细胞中呈阳性表达;eIF-4E蛋白表达与宫颈癌的组织类型无关,但与临床分期呈正相关,与病理分级呈负相关。结论eIF-4E的过度表达可能在宫颈癌的发生和恶性进展中发挥一定作用。

eIF-4E基因对乳腺癌淋巴转移的影响

目的:探讨人乳腺癌中真核细胞起始因子-4E(eukaryotic initiation factor4E,eIF-4E)对特异性淋巴管内皮生长因子VEGF-C(vascular endothelial growth factorC)表达和淋巴转移的影响。方法:分别应用Westen-blot法和免疫组化SP法检测57例乳腺癌组织中eIF-4E蛋白水平及VEGF-C表达,VEGFR-3抗体免疫染色计数乳腺癌微淋巴管密度(lymphatic microvessel density,LMVD)。结果:34例淋巴结阳性组织中eIF-4E水平显著高于淋巴结转移阴性组(10·11±0·30,5·94±0·23,t=5·37,P<0·01)。VEGF-C在淋巴结阳性组染色强度明显增高(4·20(0·98),同时VEGFR-3阳性淋巴管密度提高(25·28±5·33),与淋巴结阴性组(2·57±0·88,17·40±4·87)比较差异显著(t=2·18,2·41,P<0·05)。相关分析表明,eIF-4E水平与VEGF-C表达及淋巴结转移呈正相关。结论:eIF-4E可能通过上调VEGF-C的表达诱导乳腺癌淋巴管的生成,进而调控乳腺癌淋巴结转移。eIF-4E可作为判定乳腺癌淋巴结转移的参考指标。

胃癌组织中eIF-4E和p-4EBP-1蛋白表达的临床意义

目的探讨eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在胃癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在168例胃癌和52例癌旁胃组织中的表达。结果 eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在胃癌组织中的阳性率显著高于癌旁胃组织(P=0.001,P=0.000);有淋巴结转移的胃癌组织中eIF-4E和p-4EBP-1蛋白阳性率高于无淋巴结转移的胃癌(P=0.025,P=0.001);临床Ⅲ+Ⅳ期胃癌eIF-4E和p-4EBP-1蛋白阳性率高于临床Ⅰ+Ⅱ期胃癌(P=0.001,P=0.049);胃癌组织中eIF-4E和p-4EBP-1蛋白表达呈显著正相关(r=0.432,P<0.01);eIF-4E蛋白阴性胃癌患者生存时间明显高于阳性患者(P=0.012)。结论 eIF-4E和p-4EBP-1蛋白共阳性可能在胃癌的发生、发展和侵袭转移过程中起重要作用,有望成为胃癌判断预后及诊治的新分子靶标。

eIF-4E、HER-2癌基因在鼻咽癌中表达的意义及其与PCNA和LMP-1的关系

目的研究eIF-4E、HER-2与PCNA、LMP-1在鼻咽癌(NPC)中的表达,探讨它们之间的相关性及其与鼻咽癌生物学行为和预后的关系。方法应用免疫组化EnVision二步法检测61例鼻咽部非角化性癌(NKC)、18例癌旁上皮非典型性增生和20例鼻咽黏膜慢性炎症组织中eIF-4E、HER-2、PCNA和LMP-1的表达水平。结果①eIF-4E和HER-2在慢性炎症组、癌旁上皮非典型性增生组和NKC组中的强表达率依次递增;②eIF-4E和HER-2在NKC治疗后生存期<5年组中的强表达率显著高于治疗后生存期≥5年的强表达率;③eIF4E和HER2的强表达与LMP-1的阳性表达呈正相关关系;④eIF-4E和HER-2共同存在时较各自单独存在强表达时,PCNA的强表达率明显增强,而患者的5年生存率明显降低。结论检测eIF-4E、HER-2、PCNA和LMP-1的表达有助于NKC的病理诊断(尤其早期诊断)和预后评估。

宫颈鳞癌和癌前病变中eIF-4E表达及其与HPV16/18感染的关系

目的探讨真核翻译启始因子eIF-4E在宫颈鳞癌和癌前病变中的表达规律及其与人乳头瘤病毒(HPV)感染之间的关系。方法采用免疫组化ABC法和原位杂交技术检测eIF-4E蛋白和HPV16/18DNA在10例正常宫颈鳞状上皮,29例低级别上皮内瘤变(CIN1级),31例高级别上皮内瘤变(CIN2、3级)和31例宫颈鳞癌中的表达。结果eIF-4E在正常宫颈鳞状上皮中呈阴性表达,随着上皮病变级别升高,表达逐渐增强:低级别<高级别上皮内瘤变<宫颈鳞癌(P<0.05),且在宫颈鳞癌中表达更强;HPV16/18DNA在四组中的阳性表达率,除高级别上皮内瘤变和宫颈鳞癌两组之间没有差别(均为96.8%)以外,其余各组之间差异均有显著性(P<0.01);在低级别、高级别上皮内瘤变和宫颈鳞癌三组中eIF-4E蛋白表达和HPV感染均呈明显正相关(P<0.01)。结论宫颈鳞癌的发生与eIF-4E蛋白表达及HPV16/18感染密切相关;二者在宫颈鳞癌的发病机制中可能起着协同作用。

阻抑eIF-4E对大肠腺癌LS-174T细胞乙酰肝素酶mRNA及其翻译表达水平的影响

目的 :确定阻抑结肠癌LS - 174T细胞中过量表达的真核细胞起始因子 - 4E(eukaryoticinitiationfactor- 4E ,eIF - 4E)是否促进乙酰肝素酶 (heparanase)mRNA的降解 ,并改变其翻译表达水平。方法 :应用脂质体包裹与eIF - 4EmRNA翻泽起始点互补的asODN ,转染处理人大肠腺癌细胞LS - 174T。使用Westernblot和RT -PCR方法分别检测eIF - 4E被阻抑后其转录和翻译水平的改变。乙酰肝素酶mRNA在细胞内水平采用Northernblot定量检测 ,其蛋白表达水平改变采用Westernblot检测。结果 :asODN经脂质体转染LS - 174T细胞后 ,eIF - 4E基因表达明显受到抑制 ,其蛋白表达产物也显著下降。伴随eIF - 4E被阻抑表达 ,Northernblot结果显示乙酰肝素酶mRNA水平下降 ,且其蛋白翻译表达量也降低。结论 :阻抑eIF - 4E影响LS - 174T细胞乙酰肝素酶mRNA稳定、促使其降解 。

大肠癌中E2F-1和eIF-4E的表达及意义研究

目的探讨E2F-1和eIF-4E在大肠腺癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测78例大肠腺癌、20例正常大肠黏膜、30例大肠腺瘤E2F-1和eIF-4E的表达情况。结果 E2F-1和eIF-4E在大肠腺癌中的阳性率显著高于正常大肠黏膜以及大肠腺瘤(P<0.05)。E2F-1、eIF-4E表达与大肠腺癌的病理分化程度、淋巴结转移和临床分期具有相关性(P<0.05)。结论 E2F-1和eIF-4E的表达与大肠腺癌发生关系密切,是大肠腺癌发生、发展的重要生物学标记物。

特异性eIF-4E siRNA重组腺病毒构建及其对人卵巢癌细胞SKOV-3转移相关能力的影响

目的:构建表达真核细胞起始因子-4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF-4E)特异性siRNA的重组腺病毒载体,观察其对人卵巢癌细胞SKOV-3体外转移能力的影响。方法:应用基因重组技术将eIF-4E siRNA序列构建于腺病毒载体pLP-Ade-X,经包装细胞包装后得到高滴度重组腺病毒pLP-Ade-4EsiRNA(psiE)。将腺病毒psiE感染SKOV-3细胞,用定量PCR进行eIF-4E基因表达检测,然后应用transwell小室法观察对细胞侵袭和运动能力的影响,同时检测感染后细胞内VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果:病毒检测结果与预期相符,real-time PCR可检测到感染重组腺病毒psiE后SKOV-3细胞没有eIF-4E基因表达;病毒感染后transwell小室法检测到SKOV-3细胞的侵袭和运动能力均受到显著的抑制(均为P<0.01);此外病毒感染的SKOV-3细胞中VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低。结论:封闭eIF-4E基因表达对人卵巢癌细胞SKOV-3的侵袭和运动都有抑制作用,其作用机制可能与VEGF、MMP-2、MMP-9表达相关。