川芎嗪对人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)氯化钴诱导缺氧后纤溶功能的影响

目的:建立人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)缺氧细胞模型,探讨川芎嗪在缺氧条件下对血管内皮细胞纤溶功能的影响。方法:细胞分为对照组、缺氧组和川芎嗪(TMP)干预组,利用氯化钴(1.6mmol/L)模拟Eahy926细胞缺氧环境,建立缺氧模型,TMP干预组分别用0.08和0.16g/L的TMP干预。Hoechst法、CCK-8法检测各组细胞活力,RT-PCR观察各组细胞组织型纤溶酶原激活物(tissue-type plasminogen activator,t-PA)、尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,u-PA)、纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibit ortype-1,PAI-1)mRNA表达,双抗体夹心ELISA法检测各组细胞培养上清液中t-PA、u-PA、PAI-1含量。结果:与对照组相比,缺氧组及TMP干预组均出现细胞活力下降(P<0.01),但与缺氧组相比,TMP干预组细胞活力上升(P<0.01),且高浓度组较低浓度组上升明显(P<0.01);RT-PCR和ELISA结果显示:与对照组相比,缺氧组t-PAmRNA表达量降低(P<0.01),细胞培养上清液t-PA含量减少(P<0.01);与缺氧组比,高低浓度TMP处理组t-PAmRNA表达量及细胞培养上清液t-PA含量均增高,具有统计学差异(P<0.01);而高浓度较低浓度TMP干预组t-PAmRNA表达量升高(P<0.05),细胞培养上清液t-PA含量增加(P<0.01)。结论:川芎嗪能够浓度依赖性减轻Eahy926细胞的缺氧损伤,并通过调节其t-PAmRNA表达及上清液t-PA的分泌,影响内皮细胞的纤溶功能。

登革病毒2型诱导人血管内皮细胞株EAhy926自噬的研究

【目的】探讨登革病毒2型(DV2)感染人静脉血管内皮细胞株EAhy926对细胞自噬的影响。【方法】同一批EAhy926细胞分成对照组和感染组,感染组在DV2感染EAhy926细胞后12、24、36、48h分别收集细胞,用流式细胞仪检测发生自噬的细胞百分率与酸性自噬泡的平均荧光密度,对照组相应时间点收集细胞做同样处理作为对照。实验重复5次,用方差分析和配对t检验进行统计分析。【结果】感染组4个时间点自噬的细胞百分率和酸性自噬泡的平均荧光密度较对照组相应时间点均有升高(P<0.05)。48h对照组和感染组自噬细胞的百分率和酸性自噬泡平均荧光密度差异最明显。对照组4个时间点自噬细胞百分率(%)分别为:70±7,72±6,71±8和69±10;感染组则为75±3,78±3,77±5,80±7。对照组4个时间点酸性自噬泡平均荧光密度分别为:36.4±3.4,37.0±3.3,35.8±2.3,34.4±3.2,感染组则为41.1±2.3,45.0±4.8,41.3±3.3,44.5±7.5。【结论】DV2能诱导EAhy926细胞发生自噬,但细胞发生自噬的相关信号传导通路还有待进一步研究。

蟾蜍灵对EAhy926细胞增殖、凋亡及Caspase3,Bcl-2表达的影响

【目的】探讨蟾蜍灵对血管内皮细胞EAhy926的增殖抑制作用及其机制。【方法】体外培养血管内皮细胞EAhy926,用不同浓度蟾蜍灵进行干预。通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖抑制率;用倒置光显微镜观察细胞形态变化;用Hoechst33342/PI双荧光染色,荧光显微镜观察细胞核形态变化;以流式细胞术检测细胞凋亡的比率;应用半定量逆转录PCR检测EAhy926细胞中Caspase3和Bcl-2的mRNA表达。【结果】蟾蜍灵对EAhy926细胞生长具有抑制作用;且在0.0625~1μmol/L范围内呈时间、剂量依赖性;荧光显微镜下可见0.1μmol/L的蟾蜍灵作用24 h可诱导EAhy926细胞凋亡,作用48 h可引起细胞部分坏死;流式细胞术检测出典型的＂凋亡峰＂,凋亡率8.2%~36.5%,且呈时间依赖性。半定量RT-PCR显示Caspase3 mRNA表达较对照组明显增强,Bcl-2 mRNA表达较对照组明显减弱,且二者均呈剂量依赖性。【结论】蟾蜍灵抑制EAhy926细胞增殖、诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase3和下调Bcl-2基因表达有关。

变形链球菌对EAhy926细胞Toll样受体2和4及白细胞介素6和8表达的影响

目的观察变形链球菌对EAhy926细胞Toll样受体2和4的表达及炎性细胞因子白细胞介素6和8分泌的影响,初步探讨Toll样受体表达与细胞因子产生之间的关系。方法变形链球菌作用于EAhy926细胞,RT-PCR法检测EAhy926细胞Toll样受体2和4及白细胞介素6和8的mRNA表达;流式细胞术检测EAhy926细胞表面Toll样受体2和4的表达;细胞生物活性法和ELISA分别检测EAhy926细胞白细胞介素6和8的分泌;抗体阻断实验观察Toll样受体2和4的表达与白细胞介素6和8产生间的关系。结果将变形链球菌作用于EAhy926细胞6 h,Toll样受体2和4的mRNA表达与加入的细菌量呈一定的剂量依赖关系,以细菌与细胞作用比例为100∶1时,Toll样受体2和4的mRNA表达量最高(P<0.05)。变形链球菌能诱导EAhy926细胞(100∶1)Toll样受体2和4的mRNA和蛋白水平表达增强,在6 h达到高峰,12 h后又逐渐下降(P<0.01);白细胞介素6和8的表达量也增加,在12 h达最大表达量(P<0.05)。经Toll样受体2和Toll样受体4抗体阻断后,变形链球菌诱导EAhy926细胞白细胞介素6和8的mRNA表达明显减少(P<0.01)。结论变形链球菌可上调EAhy926细胞Toll样受体2和4的表达,促进炎性细胞因子白细胞介素6和8的产生;白细胞介素6和8的产生与Toll样受体2和4的表达上调密切相关。

变形链球菌对EAhy926细胞TLR2 mRNA表达的影响

目的:观察变形链球菌细胞壁及培养上清对人血管内皮细胞EAhy926细胞的TLR2mRNA表达影响。方法:不同剂量的变形链球菌细胞壁或培养上清作用于EAhy926细胞,RT-PCR法检测EAhy926细胞TLR2mRNA的表达。结果:变形链球菌细胞壁作用于EAhy926细胞后,TLR2mRNA的表达量随着作用时间延长而逐渐增高,于16～24h达到高峰,以后又逐渐下降(P<0.01);变形链球菌培养上清作用于EAhy926细胞后,TLR2mRNA的表达量不随着作用时间和作用浓度而发生变化。结论:变形链球菌细胞壁可明显上调EAhy926细胞TLR2mRNA的表达,并呈时间和剂量依赖性;变形链球菌培养上清不能刺激EAhy926细胞TLR2mRNA的表达。

融合细胞株Eahy926与亲本人肺腺癌细胞株A549差异表达蛋白的蛋白质组学分析

融合细胞株Eahy926是人肺腺癌细胞株A549和人脐静脉内皮细胞杂交而成的永生化细胞株,具有血管内皮细胞的特性,已广泛用于内皮细胞相关研究.本研究应用蛋白质组学技术分析融合细胞株Eahy926与亲本人肺腺癌细胞株A549的蛋白质差异表达,探讨融合细胞生物学特性变化及其机制.对Eahy926和亲本A549的细胞总蛋白质进行双向凝胶电泳,在PDQuest软件辅助下找出差异表达蛋白质点,经肽质量指纹图谱(peptide mass fingerprinting,PMF)和串级质谱(tandem massspectrometry,TMS)分析,SWISS-PROT数据库检索,成功鉴定出28个差异蛋白,如CATB、CK8、CK18、annexin A2、GRP78、HSP90、HSP60、vimentin等一些与分子伴侣、氧化应激、能量代谢、信号转导等有关,并与肿瘤细胞分裂增殖、分化凋亡、侵袭转移、免疫逃逸以及肿瘤血管生长密切关联的蛋白质.研究发现,融合细胞株Eahy926和人肺腺癌细胞株A549的蛋白质组表达谱存在明显差异,这将有助于今后进一步探讨肿瘤细胞与内皮细胞的相互作用机制及其融合细胞的特性,筛选肿瘤增殖和转移相关蛋白质及分子标志物,亦可为肿瘤的抗血管生成治疗提供新思路.

姜黄素对同型半胱氨酸硫内酯所致Eahy926细胞损伤的保护作用

目的研究姜黄素对同型半胱氨酸硫内酯(HTL)诱导融合内皮细胞株(eahy926)损伤的保护作用及其机制。方法以体外培养的eahy926细胞为研究对象,建立HTL损伤模型,检测LDH漏出量,SOD和MDA含量,通过RT-PCR法检测细胞中对氧磷酶1(PON1)mRNA,TNF-αmRNA水平。结果姜黄素可明显降低培养液中LDH活力,显著提高培养液中SOD含量,降低MDA含量;抑制HTL刺激的培养液中TNF-α浓度的升高,提高细胞中PON1mRNA水平,降低TNF-αmRNA表达。结论姜黄素对HTL诱导的eahy926细胞损伤具有一定保护作用。

CSEsiRNA对EAhy926细胞的CSE及H_2S的表达影响

目的观察胱硫醚γ裂解酶(CSE)siRNA转染人脐静脉内皮EAhy926细胞后CSE的表达及对H2S的影响。方法体外培养EAhy926细胞,经siRNA转染以沉默CSE基因表达,分为5组进行培养:正常对照组(A组):只加入转染试剂;阴性对照组(B组):转染Neg-siRNA;转染CSEsiRNA1组(C组);转染CSEsiRNA2组(D组);转染CSEsiRNA3组(E组)。采用Lipofectamine 2000介导转染EAhy926细胞,在荧光显微镜下观察细胞以检测转染效率;Western blot法检测CSE蛋白表达;收集细胞检测H2S含量。结果观察转染效率为60%左右;A组CSE蛋白表达为(153.41±23.43),B组24 h CSE蛋白表达为(150.22±17.56),而D组24 h CSE蛋白表达降至(59.43±21.81),差异有统计学意义(P<0.01);并且A组H2S含量为(0.96±0.05),B组24 h H2S含量为(0.95±0.06),D组24 h H2S含量降至(0.54±0.08),差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CSE-siRNA能够有效地抑制EAhy926中CSE的表达,并且CSE-siRNA2沉默作用最强。

变形链球菌细胞壁对EAhy926细胞TLR4、IL-6和IL-8表达的影响

【目的】观察变形链球菌细胞壁对EAhy926细胞的增殖活性、TLR4的表达和炎性细胞因子IL-6和IL-8分泌的影响,初步探讨变形链球菌致血管内皮细胞TLR4表达、炎症反应及其两者之间的关系。【方法】变形链球菌细胞壁作用于EAhy926细胞,MTT法检测EAhy926细胞的增殖活性;RT-PCR法检测EAhy926细胞TLR4、IL-6和IL-8 mRNA的表达;流式细胞术检测EAhy926细胞表面TLR4的表达;细胞生物活性方法和ELISA分别检测EAhy926细胞IL-6和IL-8的分泌;抗体阻断实验观察IL-6和IL-8的表达与TLR4的关系。【结果】不同浓度的变形链球菌细胞壁作用6 h可促进EAhy926细胞的增殖(P<0.05),但12 h后可明显抑制该细胞的生长(P<0.05),呈现显著的时间和剂量依赖性。变形链球菌细胞壁作用于EAhy926细胞后,TLR4 mRNA和蛋白水平的表达量随着作用时间延长而逐渐增高,在16 h达到高峰,24 h后又逐渐下降(P<0.01);IL-6和IL-8的表达也呈现明显的时间依赖性增高(P<0.05)。经TLR4抗体阻断后,变形链球菌细胞壁刺激EAhy926细胞IL-6和IL-8的产生明显减少(P<0.01)。【结论】变形链球菌细胞壁可明显抑制EAhy926细胞的生长,上调该细胞TLR4的表达,促进炎性细胞因子IL-6和IL-8的分泌;IL-6和IL-8的产生与TLR4的表达上调密切相关。

变形链球菌培养上清对EAhy926细胞增殖活性和TLR4表达的影响

目的观察变形链球菌培养上清对EAhy926细胞的增殖活性及TLR4表达的影响。方法变形链球菌培养上清作用于EAhy926细胞,MTT法检测EAhy926细胞的增殖活性;RT-PCR法检测EAhy926细胞TLR4 mRNA的表达;流式细胞术检测EAhy926细胞表面TLR4的表达。结果不同浓度的变形链球菌培养上清作用6 h可促进EAhy926细胞的增殖(P<0.05),但12 h后可明显抑制该细胞的生长(P<0.05),呈现显著的时间和剂量依赖性。变形链球菌培养上清作用于EAhy926细胞后,TLR4 mRNA和TLR4蛋白表达量随着作用时间延长而逐渐增高,在16 h达到高峰,24 h后又逐渐下降(P<0.01)。结论变形链球菌培养上清可明显抑制EAhy926细胞的生长,上调该细胞TLR4的表达。

Caco-2/EAhy926细胞串联复合模型用于Fe_3O_4纳米粒跨膜转运机制的研究（英文）

为了模拟肠道小肠上皮-血管屏障,我们建立了一个基于肠道生理结构的Caco-2/EAhy926串联复合模型。基于此模型,我们对纳米粒的跨膜转运进行了研究,并且与传统小肠上皮细胞模型做了比较。本研究中,使用粒径为30 nm左右的Fe_3O_4纳米粒作为模式制剂开展研究,它有着均匀的粒径分布和很好的单分散性。在孵育浓度下,此制剂对Caco-2细胞和EAhy926细胞几乎没有毒性。Caco-2/EAhy926串联复合模型是通过将Caco-2细胞单层和EAhy926细胞单层连接建立的。基于FD4渗透和跨膜电阻(TEER)的研究表明,在一定的培养时间范围内,所有的细胞模型都能保持完整。使用Claudin-4和VE Cadherin,验证了紧密连接的存在。F-actin微丝蛋白的完整性表明了存在着良好的细胞内连接。研究表明,与Caco-2模型和EAhy926模型相比,串联模型对FD4和Fe_3O_4纳米粒的转运造成了更大的阻碍。并且发现,EAhy926细胞单层有着很好的渗透性,串联模型对纳米材料的阻碍主要是由于Caco-2细胞单层。总的来说,此串联复合模型使我们能够同时对纳米粒在小肠上皮层和内皮层的转运进行评价,提供了一个研究小肠生物-纳米相互作用的好方法。

酵母β-葡聚糖对人脐静脉内皮细胞的辐射防护作用

研究酵母β-葡聚糖(BG)对X射线辐照致人脐静脉内皮细胞(Eahy926)损伤的防护作用。用四甲基偶氮唑盐(MTT)法评价BG的Eahy926细胞毒性,筛选出BG的最佳浓度和作用时间(10μg/mL,24 h)。用克隆存活法分析BG对Eahy926细胞辐射敏感性的影响。在X射线辐照至吸收剂量2Gy后0.5和24 h,用流式细胞仪分析细胞凋亡分布、DNA损伤和细胞内活性氧(ROS)水平,并用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化氢酶(CAT)活性。结果显示:BG对Eahy926细胞无毒性作用;与单独辐照组相比,BG预处理能减轻X射线辐射损伤,显著提高X射线辐照后细胞的克隆存活率;辐照后同一时间点,BG预处理组细胞DNA损伤、细胞凋亡率和细胞内ROS水平都明显低于单独辐照组;而BG预处理组细胞SOD和CAT酶活性均明显高于单独辐照组;在辐照后0.5和24 h,BG预处理组DNA损伤修复率高于单独辐照组。结果表明,BG对X射线造成的Eahy926细胞损伤有一定防护作用,其机制可能与BG清除细胞内自由基、提高抗氧化酶活性、减轻DNA损伤和细胞凋亡、促进DNA损伤修复有关。

高良姜素的体内外肿瘤血管生成抑制作用

目的探讨高良姜素体内、体外对肿瘤血管生成的影响。方法采用磺酰罗丹明B(SRB)法测定高良姜素对人微血管内皮细胞(EaHy926)增殖的影响;细胞划痕实验检测其对EaHy926迁移能力的影响;观察其对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型体内血管生成的影响。实验分为对照组(高良姜素0μg)、高良姜素药物组(1、5和10μg);采用H22细胞株建立裸鼠肝癌种植瘤模型,模型小鼠分成5组,阴性对照组,高良姜素低、中、高剂量组小鼠按照10、20和40 mg/(kg·d)分别灌胃给药,阳性对照组环磷酰胺按20 mg/(kg·d)腹腔注射,连续15 d;免疫组化法分析肿瘤组织中微血管密度(MVD),观察高良姜素裸鼠对肿瘤生长及肿瘤血管形成的影响。结果不同浓度的高良姜素对EaHy926细胞生长、迁移能力及体外Matrigel小管的形成均有抑制作用,且抑制作用随药物浓度递增而增强;高良姜素5和10μg组对CAM血管形成均呈现较强的抑制作用(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,高良姜素20和40 mg/(kg·d)剂量组和环磷酰胺组能显著降低肿瘤瘤重(P<0.05),其抑瘤率分别为34.17%,79.73%,55.71%;同时,高良姜素20和40 mg/(kg·d)剂量组能显著降低肿瘤组织中MVD(P<0.05)。结论高良姜素体内体外都具有抑制肿瘤血管生成的作用。

胡桃醌对血管形成的影响及其机制初探

目的:观察胡桃醌对内皮细胞系EAHY.926细胞活性和迁移性、大鼠主动脉微血管样结构和鸡胚尿囊膜血管生成的影响。方法:不同浓度胡桃醌作用于EAHY.926细胞株48 h后MTT法检测细胞存活率。大鼠主动脉无血清培养,加入100、50、25、12.5μmol/L浓度的胡桃醌,观察其对微血管结构的影响。选用7日龄鸡胚进行鸡胚绒毛尿囊膜血管生成实验。结果:200、100、50μmol/L浓度胡桃醌对EAHY.926细胞活性有明显的抑制作用(P<0.05),IC_(50)为122.848μmol/L;25、12.5μmol/L的胡桃醌促进EAHY.926细胞株的生长(P<0.05)。100、50、25μmol/L的胡桃醌均可抑制大鼠主动脉微血管形成(P<0.01),12.5μmol/L的胡桃醌可明显减少内皮细胞的爬行数量,延缓其爬行速度(P<0.01)。200、100、50、25μmol/L胡桃醌对鸡胚绒毛尿囊膜已存在的血管有不同程度的刺激作用,出现不同程度的充血、出血,最终凝血,且呈剂量依赖性;而12.5μmol/L的胡桃醌作用区域无新生血管形成。结论:胡桃醌具有抗血管生成作用。

黑果枸杞花色苷纳米颗粒的制备及其对氧化低密度脂蛋白诱导的人脐静脉融合细胞氧化损伤的保护作用

为了提高黑果枸杞花色苷的稳定性和活性,利用壳聚糖(chitosan,CS)与酪蛋白磷酸肽(caseinphosphopeptide,CPP)复合凝胶体系制备CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒。所得最佳制备条件为:pH 4、室温条件下搅拌,2 mg/mL黑果枸杞花色苷溶液等体积添加到质量分数0.5%CPP溶液中,然后添加等体积0.20~0.30 mg/mL CS溶液至上述花色苷-CPP溶液中,由离子凝胶机制自发形成CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒。所得CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒粒径为215.3 nm,表面电势为36 mV,包封率为65.0%~72.2%;体外释放实验结果表明,在pH 7.0时该CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒的释放率为24.3%~64.2%。体外细胞实验结果表明,黑果枸杞花色苷质量浓度为100~200μg/L的CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒能够显著提高氧化低密度脂蛋白诱导的氧化损伤人脐静脉融合EAhy926细胞的存活率(P<0.05)。因此,CS-CPP复合凝胶体系能够包封黑果枸杞花色苷,其制备的CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒具有较好的体外抗氧化能力。

抗Ⅱ型登革病毒蛋白抗体的制备和特点分析

本研究旨在制备和鉴定小鼠抗Ⅱ型登革病毒（DENV‐2）10种蛋白的抗体，为后续相关研究提供实验材料。利用真核表达载体pReceiver构建DENV‐210种蛋白的重组质粒，提取质粒 DNA ，肌内注射免疫小鼠，共免疫4次。末次免疫后2周取小鼠血清，利用DENV‐2感染的Vero细胞和DENV‐2各蛋白的稳定表达细胞，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光法（IFA）和蛋白免疫印迹法评价免疫效果，分析抗体的特点。DNA免疫小鼠后获得抗DENV‐210种蛋白的抗血清，抗体效价波动于1∶400～1∶16127之间，以抗E蛋白抗体效价最高，达1∶16127，而抗NS3、NS4b、NS5蛋白抗体效价较低，仅为1∶400。利用DENV‐2感染的Vero细胞和稳定表达病毒蛋白的EAhy926细胞进行IFA染色，抗DENV‐2各蛋白的抗血清均可特异性识别DENV‐2抗原。蛋白免疫印迹结果显示，抗E、NS1、NS4b和NS5蛋白抗体能识别热变性蛋白，其他抗血清未呈现阳性反应条带。本研究提示，DNA免疫小鼠所获得的抗DENV‐2各蛋白抗体能特异性识别自然感染或模拟自然感染状态下的DENV‐2蛋白，可为后续相关研究提供工具，也表明DNA免疫法可作为抗体制备的一种策略。

基于转录组学分析CD146在人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞条件培养液状态下的EAhy.926细胞中的基因表达差异

黑色素瘤细胞黏附分子CD146作为一种新的内皮细胞标志物,其表达与肿瘤、自身免疫性疾病的进展密切相关。类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以对称性、慢性多关节炎症为特征表现的系统性自身免疫性疾病,滑膜血管翳作为RA的代表性病理产物在疾病的发生发展中起着重要作用。为了研究CD146分子在人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(human rheumatoid arthritis fibroblast like synovial cell,HFLS-RA)条件培养液状态下的人脐静脉内皮细胞株EAhy.926的基因表达差异及其影响机制,本研究通过慢病毒介导的RNA干扰技术抑制EAhy.926细胞中CD146的表达。培养并提取HFLS-RA上清液制备条件培养液。将转染后的EAhy.926细胞用HFLS-RA条件培养液培养24 h构建RA损伤模型,并对其进行转录组测序,筛选出差异表达基因(differentiallly expressed genes,DEGs),并通过GO、KEGG通路分析,探索CD146调控的DEGs主要参与的相关信号通路及生物学过程。结果显示,与对照组细胞相比,HFLS-RA条件培养液状态下CD146敲低的EAhy.926细胞有341个DEGs,其中上调基因有173个,下调基因有168个;GO、KEGG通路分析发现DEGs主要富集在Wnt信号通路、PPAR信号通路、TRP通道的炎症介质调节、脂肪细胞因子信号通路上,参与了细胞黏附、细胞运动、细胞定位、半胱氨酸生物合成过程等生物过程。本研究通过转录组学分析发现在HFLS-RA条件培养液状态下,CD146分子可能通过多条关键信号通路及多个基因影响EAhy.926。研究结果为探讨CD146分子在类风湿关节炎滑膜血管生成中的作用及机制的研究提供了理论依据。

Chromofungin抑制TNF—α诱导血管内皮通透性增加的钙信号机制

目的探讨嗜铬粒蛋白A（chromogranin A，CGA）衍生多肽Chromofungin（CHR）对肿瘤坏死因子-α（TNF—α）诱导血管内皮细胞钙内流的影响。方法以人脐静脉内皮细胞系EA．hy926细胞为研究对象，建立TNF—α刺激炎症模型，实验分为对照组、TNF—α组、10nmo/LCHR＋TNF—α组、100nmol/LCHR＋TNF-α组和1000nmol/L CHR＋TNF—α组。Transwell小室法检测EA．hy926细胞通透性，激光共聚焦法检测EA．hy926细胞内钙离子浓度（[Ca2＋]1）的变化。结果与对照组比较，TNF-α组明显增加EA．hy926细胞通透性[（1．189±0．086）vs．（1．771±0．195），t=4．343，P=0．01]；10nmol/L、100nmol/L和1000nmoL／LCHR抑制TNF-α诱导的EA．hy926细胞通透性增加，其中10nmol/L和100nmol/L CHR显著降低TNF-α诱导的EA．hy926细胞高通透性[（1．771±0．195）vs．（1．315±0．134），t=3．403，P=0．042；（1．771±0．195）vs．（1．236±0．181），t=3．985，P=0．017]，1000nmol/LCHR降低TNF-α诱导的EA．hy926细胞高通透性，差异无统计学意义[（1．771±0．195）vs．（1．411±0．255），t=2．679，P=0．126]。10nmol/L、100nmol/L和1000nmol/LCHR作用于EA．hy926细胞时细胞内Ca2＋浓度无明显变化。TNF-仪诱导EA．hy926细胞外Ca2＋快速内流，各时间点细胞内Ca2＋荧光强度F140、F1100与起始荧光值F1100比较，差异具有统计学意义[荧光强度分别为：（41．497±3．788）vs．（56．193±3．082），F=196．129，P=0．000；（41．497±3．788）vs．（53．457±4．536），F=101．19，P=0．000]，10nmol／L、100nmol/L和1000nmol/LCHR能够抑制TNF-仪引起的Ca2＋快速内流。结论CHR抑制TNF-α诱导的EA．hy926细胞通透性增加，这一作用可能是通过阻止TNF-α诱导的细胞外Ca2＋内流来实现的。