农杆菌介导玉米遗传转化体系的研究

为了提高玉米自交系的遗传转化率,建立农杆菌介导玉米遗传转化体系。通过农杆菌菌株EHA105侵染玉米自交系7922的胚性愈伤组织,以β-葡萄糖苷酶基因(GUS)为报告基因研究几种因素对遗传转化体系的影响。结果表明:(1)当农杆菌浓度OD600=0.6时,GUS瞬时表达率最高为35.3%;(2)当侵染时间为15min时,GUS瞬时表达率最高为37.3%;(3)当共培养时间为3天和恢复培养时间为4天时,GUS瞬时表达率最高为29.1%。因此选择农杆菌浓度OD600=0.6,侵染时间15min,共培养3天和恢复培养4天,为最佳遗传转化条件。通过优化影响遗传转化体系的因素,初步建立了农杆菌介导的玉米遗传转化体系。

播娘蒿愈伤组织原生质体培养体系的研究

以4℃低温暗处理24 h的播娘蒿愈伤组织为分离原生质体的来源材料,采用B5、Km8p、MS 3种培养基进行液体浅层静置培养原生质体,获得了愈伤组织并分化成苗,建立了原生质体培养体系。结果表明,低温暗处理利于获得高产率高质量的原生质体;5%纤维素酶+0.5%离析酶+5 mmol/L MES酶解16 h,是最佳的酶解处理;B5培养基取得了较好的原生质体培养效果;MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+AgNO31.7 mg/L为最佳分化培养基;MS+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L为最佳的生根培养基。

3.4～9.5kg超早期断奶仔猪粗蛋白质需求参数研究

试验研究饲粮不同粗蛋白质 (CP)水平 ( 1 6% ,1 8% ,1 9% ,2 0 % ,2 1 % ,2 2 % ,和 2 4 % )对 3.4～ 9.5kg超早期断奶仔猪生产性能和血清尿素氮 (SUN)浓度的影响。结果表明 :当饲粮CP水平从 1 6%升高到2 0 % ,仔猪平均日增重趋于增加 (P >0 .0 5) ,饲料转化率极显著提高 (P <0 .0 1 ) ,采食单位粗蛋白质所获得的体增重和SUN浓度无显著变化 (P >0 .0 5) ;当饲粮CP水平从 2 0 %升高到 2 4 % ,仔猪平均日增重趋于下降 (P >0 .0 5) ,饲料转化率趋于降低 (P >0 .0 5) ,采食单位粗蛋白质所获得的体增重显著降低(P <0 .0 5) ,SUN浓度极显著升高 (P <0 .0 1 )。以上结果表明 ,在满足氨基酸需要的条件下 ,3.4～ 9.5kg超早期断奶仔猪生长所需的饲粮CP水平为 2 0 %。

花生与其近缘野生种间细胞融合及杂种愈伤组织的形成

本研究旨在为体细胞杂交法在花生育种中的应用奠定基础。将花生栽培种Krapts和野生种A.stenosperma幼叶解离的原生质体,用PEG方法融合后,置于添加2mg/L毒莠定(Pic)、0.1mg/L苯基噻二唑基脲(TDZ)、2%的椰乳、5g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和0.1%2-吗啉乙磺酸(MES)的改良MSB5(MS无机盐+B5有机成分)液体培养基中进行浅层培养。5周后将形成的小愈伤组织转移到添加3mg/L玉米素(ZT)、0.2mg/L6-苄氨基嘌呤(BAP)、0.1mg/L萘乙酸(NAA)的固体培养基上进行培养,促使愈伤组织增殖。观察发现,融合处理的原生质体在液体培养基上培养4天后开始分裂,2周后形成直径约300μm的细胞团,5周后小愈伤组织直径可达2～3mm。当将小愈伤组织转移到固体培养基上后,愈伤组织迅速增殖,并获得大量愈伤组织。提取愈伤组织DNA进行PCR检测,部分愈伤组织扩增出了双亲特异的DNA条带或双亲都不具有的新条带,说明愈伤组织来自于融合细胞。

器官分化与PAL活性及花色素苷累积的关系

通过适当的激素调控,胡萝卜、蒲公英愈伤组织可分化出芽、根和胚状体,其芽的分化与花色素苷累积存在密切关系、胡萝卜愈伤组织在器官分化过程中,PAL分别在第3、20天有一峰值,第二峰值与器官分化有一定关系。