通心络下调caspase-3蛋白表达及活性抑制软脂酸诱导的人外周血内皮祖细胞凋亡

目的:探讨通心络(tongxinluo,TXL)对软脂酸(palmitic acid,PA)诱导的人外周血内皮祖细胞(endothelialprogenitor cell,EPCs)凋亡及caspase-3蛋白表达和活性的影响。方法:密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞,培养7d后,贴壁细胞分成7组:对照组以M199培养液培养48h;PA各浓度组(共3组)分别用含200,400,800μmol/L PA的M199培养液孵育48h;通心络干预组(共3组)分别先用含100,200,400μmol/L TXL的M199培养液干预2h后,再加入400μmol/L PA孵育48h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;提取细胞蛋白,采用Westernblot技术检测caspase-3蛋白表达水平;采用分光光度法检测caspase-3蛋白活性水平。结果:PA呈浓度依赖性诱导EPCs凋亡;加入TXL干预,EPCs细胞凋亡率明显降低;Western blot和分光光度法检测显示,PA组EPCs的caspase-3蛋白表达及活性明显高于对照组,200和400μmol/L TXL干预组明显低于PA组(P<0.05)。结论:PA呈浓度依赖性诱导EPCs凋亡,TXL能部分抑制PA的上述作用,其机制与下调caspase-3蛋白表达及活性有关。

糖视明胶囊对糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡及bcl-2、bax、caspase-3表达的影响

目的研究糖视明胶囊对糖尿病视网膜病变(DR)神经细胞凋亡的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为阴性对照组、模型对照组、糖视明组,采用链脲佐菌素腹腔注射的方法制作大鼠DR模型,末端脱氧核糖核酸介导生物素化脱氧尿嘧啶缺口末端标记法(TUNEL)标记大鼠视网膜凋亡细胞,免疫组织化学SABC法测定bcl-2、bax以及caspase-3的基因表达。结果与阴性对照组比较,模型对照组大鼠视网膜神经细胞凋亡数、caspase-3和bax阳性细胞数显著增加,bcl-2/bax明显下降,糖视明组能明显降低视网膜神经细胞凋亡数、caspase-3和bax阳性细胞数,提高bcl-2阳性细胞数与bcl-2/bax的比值,与模型对照组比较差异有统计学意义。结论糖视明可通过对caspase和bcl-2两大家族的调节抑制细胞凋亡,从而减轻早期DR的程度。

涤痰汤对大鼠脑出血后血肿周围组织中活化caspase-3表达的影响

目的探讨大鼠脑出血后血肿周围神经元活化caspase—3的表达及涤痰汤的干预作用。方法用Ⅶ胶原酶脑内立体定位注射诱导大鼠脑出血模型,免疫组织化学法检测神经元线粒体内caspase—3的释放情况。结果Ⅶ胶原酶造模后模型组血肿周围于6 h出现阳性表达细胞,1 d阳性细胞计数达高峰,3 d出现轻度下降,5 d明显下降。与假手术组比较差异明显(P<0.01)。涤痰汤组与同时间模型组比较在6 h1、d计数无明显差异,35、d时阳性细胞减少明显(P<0.01)。结论大鼠脑出血后血肿周围神经元活化caspase—3表达明显上调;涤痰汤能减少活化caspase—3的表达,阻止神经元的凋亡。

七叶皂甙钠对大鼠缺血再灌注损伤后视网膜内Caspase-3表达的影响

目的在大鼠视网膜缺血再灌注损伤的模型上,研究七叶皂甙钠对再灌注后视网膜组织内Caspase-3表达的影响.方法60只大鼠随机分为对照组及七叶皂甙钠处理组,每组30只.通过结扎大鼠左颈总动脉1 h,然后再灌注.异搏定组腹腔注射七叶皂甙钠1.5 mg/kg,对照组腹腔注射生理盐水1 mL/kg,分别检测1、6、12、24、48、72 h各时段大鼠视网膜内的Caspase-3的光密度变化及视网膜平均凋亡发生率,每时段大鼠各5只.结果再灌注后视网膜内Caspase-3的表达位于光感受器细胞层.再灌注后1、6、12、24、48、72 h,在生理盐水组,视网膜光感受器细胞层的平均光密度分别为0.067±0.004、0.923±0.045、1.962±0.377、3.793±0.860、2.039±0.427、1.332±0.109,而在七叶皂甙钠组分别为0.039±0.001、0.801±0.036、1.136±0.173、2.180±0.621、1.584±0.201、0.869±0.024.七叶皂甙钠对Caspase-3的平均抑制率为32.8%.视网膜细胞凋亡主要出现在神经节细胞层及内核层,偶尔出现在外核层.细胞凋亡平均发生率在对照组分别为1.8±0.1、7.1±0.2、18.2±1.4、34.7±2.1、22.6±0.9、16.3±0.4,而在七叶皂甙钠组分别为1.7±0.2、4.2±0.6、11.9±1.1、17.8±0.9、13.5±0.7、6.8±0.4,七叶皂甙钠对细胞凋亡的保护率平均为38.1%.结论七叶皂甙钠可以下调再灌注后视网膜内Caspase-3的水平,从而抑制视网膜细胞凋亡的发生.

细胞因子及异丙酚对中性粒细胞内caspase-3活性的影响

目的 观察细胞因子白介素- 6 (IL - 6 )和白介素- 10 (IL - 10 )及异丙酚对离体的健康人中性粒细胞内caspase - 3活性的影响,了解细胞因子及异丙酚影响中性粒细胞凋亡的机制。方法 选择12例健康志愿者,采静脉血并分离中性粒细胞,将每例分离的中性粒细胞分为8组,分别加入生理盐水(对照组)、IL - 6、IL - 10、IL - 6 +IL - 10、异丙酚、异丙酚的脂质溶剂intralipid、IL - 6 +异丙酚、IL - 6 +intralipid孵育,18h后利用专用的试剂盒用流式细胞仪检测每个样本caspase - 3激活的程度,并进行组间比较。结果 与对照组相比,IL - 6显著抑制中性粒细胞caspase- 3的激活(P <0 .0 5 ) ,而IL - 10、异丙酚和intralipid对caspase - 3的激活则无显著影响;但IL - 10和异丙酚均能够对抗IL - 6对caspase - 3激活的抑制(P <0 .0 5 ) ,intralipid则未表现对抗IL - 6的作用。结论 IL - 6可抑制中性粒细胞内caspase - 3的激活,而IL - 10和异丙酚可对抗IL - 6的这一作用,提示IL - 6、IL - 10和异丙酚对中性粒细胞凋亡的影响至少部分是通过影响caspase -

Apoptin基因活化caspase-3诱导人黑素瘤细胞A375凋亡

为研究肿瘤细胞凋亡基因(apoptin gene)诱导人黑素瘤细胞系A375凋亡时是否通过活化caspase-3 发挥作用,用含有apoptin基因的真核表达载体短时转染体外培养的人黑素瘤细胞A375;采用RT-PCR、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测A375细胞的凋亡;以比色法检测caspase-3的相对活性。结果表明,apoptin基因短时转染的A375细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带;流式细胞术显示实验组细胞凋亡率明显高于其它各组(P<0.01);转染后24h实验组caspase-3的活性开始升高,72 h达高峰,明显高于其它各组(P< 0.01)。结论:apoptin基因可活化caspase-3诱导人黑素瘤细胞A375凋亡。

体外原代培养大鼠胚胎脊髓神经细胞机械损伤后的凋亡与caspase-3的表达

为了研究体外培养大鼠胚胎脊髓神经细胞损伤前后的凋亡变化及caspase-3的表达情况,本实验建立了一个模拟脊髓横断损伤后脊髓组分-原代培养的脊髓神经细胞机械损伤模型,并用Hoechst33342/PI双染法检测脊髓神经细胞的凋亡变化,用免疫荧光染色方法检测caspase-3的表达。结果显示:(1)损伤前几乎未见凋亡的神经细胞,损伤后6 h凋亡细胞开始出现,损伤后12 h明显增多,1 d时达高峰,但损伤后3 d凋亡细胞开始呈明显下降的趋势,至损伤后7 d又开始增加,一直持续到损伤后14d;(2)相应时刻caspase-3表达趋势的改变与脊髓神经细胞凋亡趋势的变化基本相同;(3)经过caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO干预后,凋亡细胞的数量与caspase-3的表达均减少,并呈剂量依赖性。以上结果提示,机械损伤可以诱发体外培养的脊髓神经细胞凋亡,且此凋亡的发生可能与caspase-3的表达有关。

复方海蛇胶囊抗PC-12细胞凋亡研究

目的：研究复方海蛇胶囊对β-淀粉样蛋白（Aβ1～42）诱导的PC-12细胞凋亡的影响，探讨复方海蛇胶囊应用于痴呆的治疗机制。方法：采用四氮唑蓝比色法（MTr法）确定复方海蛇胶囊对神经生长因子（NGF）诱导培养PC-12细胞的安全剂量后，加或不加Aβ，分别用MTr法、流式细胞术（FCM术）检测不同质量浓度的复方海蛇胶囊（0．01，0．1，1，5mg·mL^-1）对PC-12细胞凋亡的影响；用蛋白免疫印迹（Western-blot）法分别检测凋亡执行酶caspase-9与caspase-3的活性。结果：复方海蛇胶囊对NGF诱导培养的PC-12细胞的安全剂量为小于10mg·mL^-1。复方海蛇胶囊各剂量组对A卢诱导的PC-12细胞的凋亡具有明显的抑制作用。各组数据（A）分别为：1．75±0．12，0．73±O．35，0．79±O．11，0．83±O．07，1．31±O．07和1．80±0．38，与空白组比较P〈0．01，流式细胞检测中凋亡细胞的百分率降低（1．93±0．41）％，（46．17±4．08）％，（35．35±4．63）％，（28．62±3．81）％，（15．13±3．15）％，（7．84±1．76）％，与空白组比较P〈0．01。另外，复方海蛇胶囊抑制了A口诱导PC-12细胞的caspase-9和caspase-3活性的增高。结论：复方海蛇胶囊可显著抑制A口诱导PC-12细胞的凋亡，其机制可能通过抑制凋亡执行酶caspase-9，caspase-3的活性实现。

一氧化氮在鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡中的作用

目的 研究一氧化氮在鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡中的作用。方法 采用MTT法测定细胞增殖活力及鱼藤酮对PC12细胞的急性损伤效应 ,Greiss法测定NO2 - 含量 ,琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果 MTT实验表明PC12细胞传代后 7d达到增殖高峰 ,低剂量L NAME对PC12细胞有保护作用 ,在四个不同剂量L NAME的比较试验中 ,10 0μmol L的L NAME对PC12细胞的保护作用最强。鱼藤酮亦可诱导PC12细胞DNA梯带的形成。另外 ,一氧化氮合酶抑制剂L NAME可以抑制鱼藤酮诱导的caspase 3蛋白酶的活力 ,L NAME亦可抑制鱼藤酮诱导的NO的产生。结论 一氧化氮和caspase

寰枢椎周围软组织损伤对老龄小鼠脑衰老进程的影响

目的观察老龄小鼠寰枢椎肌肉、韧带、筋膜损伤对其脑衰老进程的影响。方法利用手术损伤小鼠寰枢椎周围软组织。利用跳台试验检测小鼠学习、记忆能力;组织切片HE染色观察脑海马神经元数量;免疫组织化学染色观察β-淀粉样多肽(Aβ)、caspase-3的表达;试剂盒检测血清NO及脑组织SOD、MDA的变化。结果与对照组相比,跳台试验:模型组小鼠反应期明显延长,潜伏期明显缩短,错误次数显著增加(P<0.01);HE染色可见模型组脑海马神经元数量明显减少,大脑皮层嗜神经现象明显;免疫组化:模型组脑海马区Aβ、caspase-3阳性细胞数均明显增加;生化指标检测结果:模型组小鼠脑组织MDA含量显著增加(P<0.05),SOD活性明显下降(P<0.01);其血清NO含量也显著增加(P<0.05)。结论寰枢椎软组织损伤促进老龄小鼠脑细胞凋亡,导致其学习、记忆功能明显减退,加速了脑衰老的进程。

参附注射液对大鼠肠缺血再灌注损伤后肠黏膜细胞凋亡的影响

目的:研究参附注射液对大鼠肠缺血再灌注期间黏膜上皮细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:采用大鼠肠缺血再灌注模型,24只大鼠随机分为假手术对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和参附治疗组(SF组),在规定时间检测小肠黏膜上皮细胞caspase-3、Bcl-2蛋白的表达,凋亡细胞数目,同时观察小肠黏膜病理形态学改变。结果:IR组肠黏膜上皮细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)、caspase-3、Bcl-2蛋白显著高于C组(P<0.01)。SF组AI、caspase-3蛋白低于IR组(P<0.01或P<0.05),而Bcl-2蛋白较IR组上调(P<0.01)。caspase-3表达与AI呈正相关(r=0.914,P<0.01);Bcl-2的表达与AI、caspase-3呈直线负相关(r分别=-0.375,-0.367,P<0 01)。SF组小肠黏膜病理损伤程度较I/R组明显减轻(P<0.01)。结论:参附注射液通过抑制caspase-3表达和促进Bcl-2基因表达减少缺血再灌注期间肠黏膜上皮细胞的凋亡,从而一定程度上减轻肠黏膜缺血再灌注损伤。