EBV-miR-BART17-5p对鼻咽癌细胞增殖及迁移功能的调控及其作用机制

目的 探讨EB病毒(epstein-barr virus,EBV)编码的EBV-miR-BART17-5p对鼻咽癌细胞增殖及迁移的调控及其机制。方法 将慢病毒Vector control和EBV-miR-BART17-5p mimic分别感染至HK1-EBV细胞,记为Vector control组和Mimic组,采用RT-qPCR验证慢病毒感染效果;EdU和CCK-8实验分别检测细胞的增殖能力;平板克隆形成实验检测细胞的集落形成能力;细胞划痕实验及Transwell细胞迁移实验检测细胞的迁移能力;Western blot检测EBV-miR-BART17-5p靶基因PTEN的蛋白表达水平。结果 与Vector control组比较,Mimic组HK1-EBV细胞中EBV-miR-BART17-5p表达量显著升高(P<0.001),细胞增殖、集落形成和迁移能力均明显增强(均P<0.05),PTEN蛋白表达水平显著降低(P<0.001)。结论EBV-miR-BART17-5p能调控鼻咽癌细胞HK1-EBV增殖和迁移,其作用机制可能与EBV-miR-BART17-5p反向调控肿瘤抑制因子PTEN表达有关。

EBV-miR-BART5-3p靶向p53对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响

目的:研究爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)-miR-BART5-3p对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养人EBV阳性鼻咽癌细胞(C666-1)和人鼻咽癌细胞(CNE-2Z),将CNE-2Z组细胞设置为正常组,C666-1细胞随机分为对照组、EBV-miR-BART5-3p NC组、EBV-miR-BART5-3p mimics组和EBV-miR-BART5-3p inhibitor组。用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞及EBV阴性鼻咽癌患者和EBV阳性鼻咽癌患者癌组织中EBV-miR-BART5-3p表达情况,噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞存活率,平板克隆实验评估各组放疗敏感性变化情况,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)法检测各组细胞凋亡敏感性变化,蛋白免疫印迹分析法检测转染后各组细胞p53、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬氨酸酶-3(caspase-3)和Bcl-2蛋白表达情况,双荧光素酶报告实验验证EBV-miR-BART5-3p与p53的靶向关系。结果:与EBV阴性组相比,EBV阳性组鼻咽癌组织中EBV-miR-BART5-3p表达水平显著升高(P<0.05)。与正常组相比,对照组EBV-miR-BART5-3p表达、存活率、克隆数量和Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05),凋亡率、p53、Bax和caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与对照组和EBV-miR-BART5-3p NC组相比,EBV-miR-BART5-3p mimics组EBV-miR-BART5-3p表达水平、存活率、克隆数量和Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05),凋亡率、p53、Bax和caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与对照组和EBV-miR-BART5-3p NC组相比,EBV-miR-BART5-3p inhibitor组EBV-miR-BART5-3p表达水平、存活率、克隆数量和Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05),凋亡率、p53、Bax和caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示,与TP53-3'UTR-WT+EBV-miR-BART5-3p NC组比较,TP53-3'UTR-WT+EBV-miR-BART5-3p inhibitor组荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论:下调EBV-miR-BART5-3p可能通过靶向促进p53蛋白表达,提高人EBV阳性鼻咽癌细胞的放射敏感性。

慢病毒介导的ebv-miR-BART7稳定过表达鼻咽癌细胞株CNE1的建立

目的构建ebv-miR-BART7慢病毒表达载体,建立其稳定表达的鼻咽癌细胞株CNE1-pLVTHM/BART7。方法构建慢病毒表达质粒pLVTHM/BART7。用293FT细胞包装后产生的成熟慢病毒颗粒感染CNE1细胞。经流式细胞仪筛选后,建立稳定表达ebv-miR-BART7鼻咽癌细胞株。最后用荧光定量PCR检测其表达水平。结果 PCR和测序验证pLVTHM/BART7重组质粒构建成功;经293FT细胞病毒包装,感染CNE1细胞后,与阴性对照组和未感染组相比,其表达水平明显升高。结论成功构建了pLVTHM/BART7慢病毒重组质粒,建立了稳定表达ebv-miR-BART7的鼻咽癌细胞株CNE1-pLVTHM/BART7,为研究ebv-miR-BART7在鼻咽癌发生发展过程中的基因调控和相应的作用机制提供了有用的细胞模型。

鼻咽癌患者血浆EBV-miR-BART7-3p与EBV-miR-BART17-5p的表达及其临床意义

目的检测鼻咽癌患者血浆中BART-miRNAs的表达情况,评价它们对鼻咽癌诊治的临床应用价值。方法采用反转录PCR检测111例首诊鼻咽癌患者、42例治疗后复发/转移鼻咽癌患者、22例非鼻咽癌患者及24名健康体检者血浆中BART-miRNAs,统计分析其与鼻咽癌患者临床特点的关系,以及治疗前后的变化,绘制ROC曲线,计算AUC,评估其作为鼻咽癌诊断工具的性能。结果鼻咽癌患者血浆中EBV-miR-BART7-3p与EBV-miR-BART17-5p相对表达水平显著高于非鼻咽癌患者与健康体检者(P<0.05),均与患者N分期和临床分期相关(P<0.05),且在治疗后显著下降(P<0.05),而治疗后转移患者相对表达水平显著升高。单独检测诊断鼻咽癌的AUC为0.829和0.833,联合检测诊断鼻咽癌的AUC为0.860。结论检测血浆中EBV-miR-BART7-3p与EBV-miR-BART17-5p,可为鼻咽癌诊疗以及分期等进一步研究提供有效依据。

EBV编码的miR-BART8-3p与鼻咽癌放疗抵抗的相关性分析

目的:探究EB病毒(EBV)编码的miR-BamHI-A区右向转录(BART)8-3p(EBV-miR-BART8-3p)与鼻咽癌(NPC)放疗抵抗的相关性。方法:选取2018年7月至2020年7月本院104例初诊NPC患者(NPC组),另选取同期100例慢性鼻窦炎鼻息肉患者(良性病变组),比较两组患者血浆和组织EBV-miR-BART8-3p表达水平。分析NPC患者血浆和组织EBV-miR-BART8-3p表达水平在临床病理特征、放疗效果中的差异,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆EBV-miR-BART8-3p水平对NPC患者发生放疗抵抗的预测价值。结果:NPC组血浆和组织EBV-miR-BART8-3p表达水平均显著高于良性病变组(P<0.001)。9例EBV-DNA阴性NPC患者血浆和组织EBV-miR-BART8-3p表达水平低于EBV-DNA阳性者;经Pearson相关系数分析,EBV-DNA阳性NPC患者血浆与组织EBV-miR-BART8-3p表达水平呈正相关,且两者与EBV-DNA拷贝数亦呈正相关(r值分别为0.452、0.717、0.726,均P<0.001)。T3~T4期、N0期、美国东部肿瘤协作组(ECOG)状态评分为2分患者的组织EBV-miR-BART8-3p表达水平更高(均P<0.05);T3~T4期、TNMⅢ~Ⅳ期、EBV衣壳抗原(VCA)-IgA为阳性患者的血浆EBV-miR-BART8-3p表达水平更高(均P<0.05)。放疗抵抗患者组织和血浆EBV-miR-BART8-3p表达水平显著高于放疗敏感者(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析,血浆EBV-miR-BART8-3p表达水平>1.731和组织EBV-miR-BART8-3p表达水平>2.850是NPC患者发生放疗抵抗的独立危险因素(P<0.05)。经ROC曲线分析,血浆和组织EBV-miR-BART8-3p表达水平预测NPC患者发生放疗抵抗的曲线下面积(AUC)分别为0.915(95%CI:0.862~0.968)、0.889(95%CI:0.814~0.964)。结论:NPC患者血浆和组织EBV-miR-BART8-3p表达水平升高与放疗抵抗风险有关。

EBV相关性胃癌患者血浆miRNAs表达谱的研究

目的探讨EBV相关性胃癌(EBV-associated gastric carcinomas,EBVaGCs)患者血浆中EBV-miRNAs表达水平及其临床意义。方法收集226例胃癌患者和56例非EBV感染相关的肿瘤患者外周血,采用RT-PCR检测EBV-DNA,荧光定量Real-time RTPCR分析EBV-miRNAs表达谱,结合组织病理和影像学检查结果分析这些miRNAs的临床意义。结果在胃癌患者中,有177例EBV阴性胃癌和49例EBVaGCs患者。在EBVaGCs中,EBV-miR-BART5的表达水平是RNU6B的3.5倍,而EBV-miR-BART1、miRBART1-2、miR-BART7及miR-BART10分别为2.4、2.0、3.1、2.9倍。EBV-miRNAs在低分化胃癌中均高表达,EBV-miR-BART5和miR-BART7在中高分化胃癌表达差异具有统计学意义(P<0.05),但EBV-miR-BART1、miR-BART1-2和miR-BART10表达差异无统计学意义(P>0.05)。85.7%(42/49)EBVaGCs患者二程化疗后症状缓解,12.2%(6/49)局部侵袭,2.0%(1/49)淋巴结转移;而64.4%(114/177)EBV阴性胃癌患者二程化疗症状缓解,20.3%(36/177)局部侵袭,10.7%(19/177)淋巴结转移,4.5%(8/177)远处转移。结论 EBV-miR-BART5和miR-BART7可作为EBVaGCs无创诊断、治疗和预后的生物标志物;EBVaGCs患者预后比EBV阴性胃癌好。

EB病毒微小RNA在鼻咽癌中的表达及意义

采用实时荧光定量PCR分析EB病毒微小RNA(ebv-miR)ebv-miR-BART19-5p和ebv-miRBART21-3p在鼻咽癌和鼻咽炎症组织中的表达,以便探明其表达在EB病毒(EBV)致鼻咽癌中的内在联系和意义。结果表明,鼻咽癌组织中ebv-miR-BART19-5p和ebv-miR-BART21-3p的表达水平明显高于鼻咽黏膜炎症组织。EBV可能通过ebv-miR-BART19-5p和ebv-miR-BART21-3p的表达上调介导鼻咽组织癌变,它们可能是鼻咽癌治疗的分子靶点和鼻咽癌诊断的分子标志物。

miR-155在口腔鳞状细胞癌发生中作用及机制研究进展

口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC),是口腔中最常见的癌症。研究表明,miR⁃155在OSCC中呈现高表达,而目前miR⁃155在OSCC发生的作用与机制尚未明确,本文拟讨论miR⁃155与肿瘤的关系及其在OSCC发生发展中可能起到的作用。文献复习结果表明miR⁃155作为致癌性的小RNA可抑制CDC73、BCL6、P27Kip1等具有抑癌作用的靶基因,促进OSCC细胞的增殖、迁移和侵袭行为,抑制细胞凋亡;还可与生物因素(EB病毒、人乳头瘤病毒)共同作用促进OSCC的发生。

EBV miR-BARTs在鼻咽癌中的研究及应用进展

BART miRNA是EBV编码的miRNA前体经选择剪切的产物,能够通过影响病毒自身或宿主基因表达,发挥癌基因或抑癌基因作用,参与肿瘤细胞的增殖、生长、凋亡及转移的调控,或是影响肿瘤放化疗的效果,以及影响筛查和预后。miR-BARTs在所有潜伏类型的EBV中均有表达,但在NPC细胞系中表达最显著,表明miR-BARTs与NPC的发生发展有关。阐明miR-BART在NPC中的作用机制对于NPC的筛查、诊断以及治疗等方面的临床实践均具有指导意义。

鼻咽癌中miR-221-3p的表达及临床意义

目的:检测鼻咽癌中微小RNA-221-3p(miR-221-3p)的表达,分析其与增殖、凋亡指标的相关性。方法:选取鼻咽癌患者69例作为观察组,慢性鼻炎患者69例作为对照组。均留取组织标本,应用实时荧光定量聚合酶链反应法检测两组中miR-221-3p的表达。蛋白免疫印迹法检测鼻咽癌中BCL-2相关X蛋白(BAX)的表达。免疫组织化学法检测鼻咽癌中Ki67的表达。原位杂交法检测鼻咽癌中EB病毒的表达。结果:观察组miR-221-3p表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),miR-221-3p的表达在观察组不同组织学亚型、淋巴结转移、局部浸润程度的分组中差异有统计学意义(P<0.05)。生存分析显示miR-221-3p高表达患者的生存时间短(P<0.05)。Spearman相关分析显示,miR-221-3p表达与Ki67增殖指数呈正相关(r=0.56,P<0.05),与BAX呈负相关(r=-0.69,P<0.05)。结论:与慢性鼻炎患者比较,鼻咽癌中miR-221-3p表达升高。MiR-221-3p高表达促进肿瘤增殖、抑制凋亡,预示病变呈进展状态及较差的预后。