早期胃腺癌原代细胞适配子的筛选与鉴定

胃腺癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一,由于没有针对早期胃腺癌有效的诊断方法,目前胃腺癌手术治疗还主要针对中晚期患者,预后差.本文应用cell-SELEX技术,筛选早期胃腺癌原代细胞的适配子,为早期胃腺癌的诊断提供新的思路.从早期胃腺癌组织中分离得到早期胃腺癌原代细胞,应用体外合成全长88 bp中间含52 bp随机序列的单链DNA文库,通过对PCR扩增条件的优化,借助生物素-链霉亲和素磁珠系统,经cell-SELEX反复筛选,可获得针对早期胃腺癌原代细胞的特异性适配子.经12轮cell-SELEX筛选,ssDNA文库与早期胃腺癌原代细胞的亲和力由1 560上升到4 336,表明亲和力较高的适配子得到逐步富集.经克隆和测序,应用软件分析可知,30个克隆子中编号为C17和C27的2个序列完全一致,具同源性,二级结构预测可知单链DNA形成不同的茎环结构可能是适配子与早期胃腺癌原代细胞作用的结构基础.特异性分析显示,胃腺癌原代细胞组与正常胃粘膜上皮细胞、空白对照组之间荧光强度值差异非常显著(P<0.01);正常胃粘膜上皮细胞组与空白对照组之间差异不显著(P>0.05).经亲和力测定,各适配子与早期胃腺癌原代细胞的解离系数达到nmol/L,具有很高的亲和力.利用cell-SELEX技术成功筛选到早期胃腺癌原代细胞的适配子,为胃腺癌的早期诊断与治疗药物靶点方面的研究奠定了实验基础.

早期胃腺癌与胃粘膜上皮细胞内β-葡糖醛酸酶免疫电镜比较研究

目的：早期胃癌与胃粘膜上皮细胞内β－葡糖醛酸酶（β－Ｇ）免疫电镜定位、定量，并进行比较，探索β－Ｇ在两者之间的差异。方法：采用低温包埋、紫外线照射、胶体金标记、免疫电镜技术。结果：β－Ｇ定位于早期胃癌细胞与胃粘膜上皮细胞中的溶酶体与内质网内，早期胃癌细胞中β－Ｇ量多于胃粘膜上皮细胞。结论：结果提示β－Ｇ的增多可能与癌细胞旺盛的机能活动和异常的形态结构有关。

nm23-H1和MTA1蛋白在卵巢内膜样腺癌中的表达及临床意义

目的探讨nm23-H1和肿瘤转移相关基因(MTA1)蛋白表达与卵巢内膜样腺癌之间的关系。方法运用免疫组化S-P法检测66例卵巢内模样腺癌组织中nm23-H1和MTA1蛋白的表达。结果肿瘤转移相关基因表达高低与卵巢癌-内膜样腺癌临床分期、组织学分级及淋巴结转移情况关系密切(P<0.05);nm23-H1低表达与卵巢内膜样腺癌临床分期、组织学分级及淋巴结转移关系密切(P<0.05);卵巢内膜样腺癌组织中MTA1、nm23-H1蛋白表达呈负相关(P<0.05)。结论 MTA1和nm23-H1蛋白表达与卵巢内膜样腺癌淋巴结转移、分化程度及预后关系密切,可作为卵巢内膜样腺癌患者转移复发的重要指标。

缺氧诱导因子-1α、胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3、增殖细胞核抗原和P53蛋白在反流性食管炎、Barrett食管及食管腺癌组织中的表达

目的观察缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、胰岛素样生长因子Ⅱm RNA结合蛋白3(insulin-like growth factor-Ⅱm RNA-binding protein 3,IBMP3)、增殖细胞核抗原(proliferating cellnuclear antigen,PCNA)和P53蛋白在反流性食管炎(ruflex esophagitis,RE)、barrett食管(Barrette esophagus,BE)、食管腺癌(esophageal edenocarcinoma,EAC)组织中的表达情况,分析HIF-1α、IMP3、PCNA和P53的表达在EAC发生过程中的意义。方法采用免疫组化法,检测50份RE、100份BE和100份EAC样本中HIF-1α、IMP3、PCNA和P53蛋白的表达,并取无反酸、烧心等症状,无免疫疾病、感染疾病病史及胃镜下食管下段黏膜无明显病变的功能性消化不良患者样本30份作为对照。结果 HIF-1α蛋白在RE、BE和EAC组中阳性率分别为14%、54%和92%,与对照组相比,差异有统计学意义(P均<0.05);P53蛋白在RE、BE和EAC组中阳性率分别为8%、31%和84%,EAC和BE组与对照组相比,差异有统计学意义(P均<0.01);IMP3蛋白在RE、BE和EAC组中阳性率分别为10%、45%和74%,EAC和BE组与对照组相比,差异有统计学意义(P均<0.01);PCNA蛋白在RE、BE和EAC组中阳性率分别为22%、47%和74%,EAC和BE组与对照组相比,差异有统计学意义(P均<0.01);EAC与BE组及BE与RE组比较,HIF-1α、P53、IMP3、PCNA蛋白的表达差异有统计学意义(P均<0.01),4种蛋白在RE、BE和EAC组中的表达逐渐增强。HIF-1α表达与IMP3、P53、PCNA表达均呈正相关(P<0.01)。结论 HIF-1α、IMP3、PCNA和P53蛋白的表达与BE、EAC的发生发展密切相关,可用作监测BE、EAC早期发生的指标,为今后BE及EAC的治疗提供新的途径。