蛋清多肽-铁螯合物的制备、表征及对Caco-2细胞的促增殖作用

为开发人体易吸收的铁补充剂,提高咸蛋清的附加值,该研究以铁螯合能力和水解度(degree of hydrolysis,DH)为指标,优化酶解条件,通过超滤和Sephadex G-15凝胶柱分离纯化铁螯合能力高的蛋清多肽。采用扫描电镜、能谱、红外光谱和X射线衍射(X-ray diffraction,XRD)对蛋清多肽-铁螯合物结构进行表征。同时探究其对Caco-2细胞活力的影响。结果表明,最佳酶解条件为底物质量分数4%、酶添加量10%、pH 8、温度50℃时酶解8 h,所得产物的铁螯合能力为95.27%。蛋清粗肽经超滤和Sephadex G-15分离纯化得到铁螯合能力最高的组分F4-4。扫描电镜、能谱、红外光谱和XRD结果表明蛋清多肽和Fe2+形成多肽-铁螯合物。细胞实验中,与蛋清多肽和硫酸亚铁相比,蛋清多肽-铁螯合物的安全性高,且有一定的促增殖作用。

蛋清肽-钙配合物体内促钙吸收作用研究

目的:为了考察蛋清肽-钙配合物(EWP-Ca)在动物体内的补钙效果。方法:将60只Wistar雄性大鼠随机分为6组:普通组、缺钙模型组、CaCO3组以及低、中、高剂量EWP-Ca组,通过构造缺钙大鼠模型,进行了为期30d的补钙实验,实验结束后对各种与补钙相关的指标进行测定。结果:与缺钙模型组相比,高剂量EWP-Ca组(Ca剂量为106.4mg/(kg.d))能极显著增加大鼠股骨直径、干质量、骨钙含量及股骨密度(P<0.01),极显著降低血清碱性磷酸酶(AKP)活力(P<0.01);与钙含量相同的CaCO3组相比,EWP-Ca高剂量组股骨直径、骨钙含量极显著和显著增加(P<0.01,P<0.05)。结论:EWP-Ca具有体内促进钙吸收作用,且效果优于钙含量相同的CaCO3。

蛋清肽及肽钙配合物的制备

为获得高生物效价的补钙制剂及提高蛋清蛋白的附加值,首先对鸡蛋清进行酶法改性,筛选实验用酶,采用正交试验,分别对酶解条件及肽钙反应条件进行优化,并采用红外光谱法比较反应前后图谱的变化。结果表明:选择先碱性蛋白酶后中性蛋白酶进行双酶酶解,酶解条件为底物质量分数6%、碱性酶酶底比1:100、pH8.0、酶解时间3h;中性酶酶底比1:25、pH7.0、酶解时间3h。制备肽钙配合物最优反应条件为肽钙(CaCl2)质量比2.5:1、pH9.5、底物质量分数4%、温度55℃,在此条件下,可溶性钙含量为21.15mg/L,水解度为8.66%。制备蛋清肽时,使用双酶的水解效果优于单酶,蛋清肽与钙形成了双单齿配合物,其钙质量分数为8.75%。

鱼卵肽钙复合物对大鼠体内促钙吸收作用的研究

通过构造缺钙大鼠模型,研究鱼卵肽钙复合物(EPP-Ca)对缺钙大鼠的补钙效果。结果表明,经过4周的补钙,EPP-Ca使缺钙大鼠增重25.53%,钙吸收率达65.28%,血清钙和血清碱性磷酸酶分别恢复到2.58mmol/L和177.13U/L,股骨重量、骨密度和骨钙含量分别达到877.31mg、0.22g/cm2和254.75mg/g,补钙效果显著优于无机钙,与酪蛋白磷酸肽钙复合物(CPP-Ca)效果相当。EPP-Ca有望成为新型的补钙制剂。

脱盐咸鸭蛋清促钙吸收肽的制备及脱酰胺修饰

为使咸鸭蛋清得到高值化利用,本实验以电渗析脱盐的咸鸭蛋清为原料,以可溶性钙结合量、水解度为指标,用Alcalase 2.4 L碱性蛋白酶、Neutrase 0.8 L中性蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶对脱盐咸鸭蛋清进行酶解,筛选出最佳实验用酶为Protamex复合蛋白酶;进而对制备的蛋清肽进行了脱酰胺处理,分析蛋清肽的氨基酸含量。结果表明:适合Protamex复合蛋白酶的酶解条件为加酶量2×104 U/g、底物质量浓度30 g/L、温度50℃、pH 6.5,酶解3.5 h。在此条件下,水解度为21.97%,所得蛋清肽的可溶性钙结合量为29.22μg/mL。再经脱酰胺修饰后,其可溶性钙结合量显著增加(P<0.05)。氨基酸分析显示蛋清肽中含有较多与钙结合相关的氨基酸。以脱盐咸鸭蛋清为原料制备的肽具有较高的钙结合活性,脱酰胺修饰可使其钙结合能力显著提升。

盐酸法脱酰胺结合酶解制备高携钙能力鸭蛋蛋清肽

为了利用食品工业下脚料咸鸭蛋蛋清,以鸭蛋蛋清蛋白为原料,通过盐酸脱酰胺、蛋白酶酶解后,得到具有高携钙能力的蛋清肽。结果显示,温度和盐酸浓度对脱酰胺度影响显著(P <0. 05),优化后的脱酰胺条件为:温度95℃,反应时间4 h,盐酸浓度0. 5 mol/L,在此条件下蛋清蛋白的脱酰胺度达72. 67%。从5种常用的商业用酶中筛选出木瓜蛋白酶为实验用酶,就可溶性钙结合量而言,酶解时间和料液比对酶解效果影响显著(P <0. 05),而酶的质量分数对酶解效果有极显著影响(P <0. 01)。经优化后,得到最佳酶解工艺为:温度50℃、pH 6. 5、料液比5%、酶的质量分数0. 3%、酶解时间3 h。在此条件下,得到的脱酰胺鸭蛋蛋清肽的可溶性钙结合量为14. 42 mg Ca/g肽。经过超滤分级后,发现分子质量较小的级分具有更强的钙结合能力。