钾离子通道Eag1在肿瘤中的研究进展

Eag1(ether-à-go-go-1,又称Kv10.1、KCNH1)是电压门控钾离子(potassium,K+)通道KCNH基因家族成员,主要在中枢神经系统以及多种恶性肿瘤中表达,并在肿瘤的发生发展过程中起到重要的作用。研究Eag1的分布和作用机制对揭示其生理功能以及与病理机制具有十分重要的意义。该文综述了目前Eag1的生理和病理特性,Eag1与肿瘤发展演化的关系以及Eag1调节剂抗肿瘤应用的研究进展。

绿盲蝽气味结合蛋白AlucOBP31配体筛选及EAG测定

绿盲蝽Apolyguslucorum是重要的农业害虫,了解其化学感受机制对该虫的绿色防控具有重要指导意义。气味结合蛋白(Odorant-binding proteins,OBPs)在昆虫化学感受过程中发挥关键作用。为深入探究绿盲蝽OBP家族成员AlucOBP31的生物学功能,本研究采用荧光竞争结合试验和触角电位技术(Electroantennogram,EAG),系统分析了AlucOBP31对候选配体化合物的结合特性及其电生理活性。荧光竞争结合试验结果表明,重组Aluc OBP31蛋白能够与16种配体化合物发生不同程度的结合,其中与植物挥发物β-紫罗兰酮的结合能力最强,而与十二醛和顺-丁酸-3-己烯酯的结合能力相对较弱。值得注意的,AlucOBP31能与绿盲蝽性信息素组分4-氧代-反-2-己烯醛结合,提示其可能参与绿盲蝽的性信息素识别过程。此外,AlucOBP31还对槲皮素、芦丁水合物、棉酚和单宁酸等4种非挥发性苦味物质具有强结合能力,暗示其可能在绿盲蝽的味觉识别中发挥一定作用。EAG试验进一步验证了AlucOBP31配体的电生理活性。绿盲蝽雌、雄成虫的触角对12种AlucOBP31挥发性配体均产生了明显的EAG反应,其中对顺-丁酸-3-己烯酯和4-氧代-反-2-己烯醛的EAG响应值显著高于其它配体,并且雄性触角对这些配体的EAG反应普遍强于雌性,提示AlucOBP31介导的化学感受过程可能存在性别差异。综上所述,本研究系统分析了绿盲蝽AlucOBP31的结合特性及相应配体的电生理活性,发现该蛋白能够结合寄主植物挥发物、绿盲蝽性信息素组分以及多种非挥发性苦味物质,表明AlucOBP31可能在绿盲蝽的嗅觉和味觉识别过程中发挥多重生物学功能。这一发现为进一步探究AlucOBP31与其配体在绿盲蝽寄主选择、交配等重要生命活动中的生物学意义提供了研究基础,加深了我们对绿盲蝽化学感受机制的认知,也为绿盲蝽的绿色防控提供了新的分子靶标。

沉香暴食害虫黄野螟性信息素分泌源EAG和GC-MS分析

为了探究黄野螟雌蛾性信息素腺体的具体部位,将雌蛾解剖为头、胸、腹、翅4部分,分别使用其挥发性气味对雄蛾进行触角电生理(EAG)检测,确定雌蛾腹部挥发物可以刺激黄野螟雄蛾产生最强的电生理响应。通过使用雌蛾腹部前、中、后3段的挥发物信号刺激雄蛾触角的电生理检测,进一步发现雌蛾腹部中段挥发物信号对雄蛾触角具有最强电生理活性,指示雌蛾腹部中段最可能是雌蛾性信息素释放的主要部位。另外,对雌蛾腹部3段结构提取挥发物的气相色谱-质谱联(GC-MS)检测和总离子图(TIC)对比,结果发现腹部中段挥发物成分中具有2个雌虫特异性成分,为该组织最强电生理活性提供了可能的物质基础。该研究结果为进一步鉴定开发黄野螟的高效性诱剂确定了成分来源的重要基础。

3种寄主挥发物中引起旋幽夜蛾嗅觉反应的活性组分分析

为探究植物挥发物中引起旋幽夜蛾嗅觉电生理反应的活性组分,本研究采用动态顶空吸附法收集藜、甜菜和棉花植株的挥发物,利用气相色谱触角电位联用仪(GC-EAD)和气相色谱质谱联用仪(GC-MS)定性鉴定寄主挥发物中引起旋幽夜蛾嗅觉反应的活性组分。结果表明,藜挥发物中有6种活性组分,甜菜和棉花挥发物中各有5种,其中乙酸叶醇酯、1,2-二乙苯、对二乙苯、壬醛、二乙二醇丁醚为3种植物共有的挥发物组分,异佛尔酮仅在藜挥发物中发现。触角电位(EAG)测定结果显示,以上6种组分都能引起旋幽夜蛾雌雄成虫的EAG反应,且随浓度增加EAG相对反应值增大。雌雄成虫对壬醛和异佛尔酮的EAG反应最强烈,其次是乙酸叶醇酯和1,2-二乙苯。在相同浓度条件下,雌雄成虫对同种化合物的EAG反应无性别特异性。本研究为探明旋幽夜蛾定位寄主机制及开发行为调控产品提供基础。

茶尺蠖绒茧蜂对茶梢挥发物的EAG和行为反应

为筛选有效诱集茶尺蠖绒茧蜂Apanteles sp.的信息化合物及其组合,选用了源于健康和虫害茶梢的27种典型挥发物的10-2g/mL石蜡溶液、混合物1(含等量反-2-己烯醛、顺-3-己烯-1-醇和芳樟醇石蜡溶液)和混合物2(含等量反-2-己烯醛、顺-3-己烯-1-醇、2-戊烯-1-醇、反-2-戊烯醛、顺-3-己烯乙酸酯、正戊醇、正己醇和1-戊烯-3-醇石蜡溶液),用1～2日龄雌蜂为试虫,测试其EAG反应,并采用Y形嗅觉仪测定其行为反应;另外,选择5个茶园进行了野外生测试验。EAG结果表明:各味源的EAG值之间差异显著;脂肪酸衍生物引起较强EAG反应,其次为芳香化合物和异硫氰酸酯,再次为倍半萜类和单萜类;单组分中,顺-3-己烯乙酸酯、反-2-己烯醛、水杨酸甲酯、反-2-戊烯醛、苯乙酮、苯乙醇、苯甲醇、苯甲醛和茉莉酸甲酯引起的EAG值较大,1-戊烯-3-醇、2-戊烯-1-醇、顺-3-己烯-1-醇、香叶醇、罗勒烯、α-萜品烯、(+)-雪松醇、(+)-3-蒈烯、α-忽布烯和β-紫罗酮引起的值较小,Z-茉莉酮引起的最小;混合物1引起的EAG值最大,混合物2引起的较小。使用EAG值较大的水杨酸甲酯、反-2-戊烯醛和混合物1等8种味源,以Y形嗅觉仪进行的行为测定结果与EAG反应基本一致。以正己烷为溶剂的10-3,10-2和10-1g/mL水杨酸甲酯、10-2g/mL水杨酸甲酯和反-2-己烯醛混合溶液分别制成诱集剂,载于橡皮头诱芯,在浙滇闽粤茶园强烈地诱集茶尺蠖绒茧蜂、单白绵绒茧蜂和其他茧蜂,并表现梯度效应。据此认为虫害诱发的茶梢互利素引起该蜂强烈EAG反应和趋向性,互利素与互利素或普通植物挥发物的恰当组合可于茶园中有效诱集该蜂。

寄主挥发物对青杨脊虎天牛EAG和行为的影响

通过GC-MS分析,鉴定出青杨脊虎天牛(Xylotrechus rusticus L.)蛀屑和寄主杨树皮中92种挥发性物质;选取顺-3-己烯醇和蛀屑中具有的邻甲氧基苯甲醛、反式-1,2-环己二醇、N-乙基苯胺、苯并噻唑、棕榈酸及2种混合物进行触角电生理测试,采用‘Y’型双向选择嗅觉仪对触角电位反应值较大的6种物质的不同质量浓度进行了室内趋向试验。结果表明:雌虫对质量浓度大于10-3g.L-1的7号混合物(由顺-3-己烯醇、邻甲氧基苯甲醛、N-乙基苯胺、苯并噻唑1∶1∶1∶1组成)发生强烈反应(P<0.05,P<0.01),电位反应值最高,达0.497。雄虫对0.1、1.0 g.L-17号混合物均表现出显著的驱避行为(P<0.05)。雌虫对1.0 g.L-1反式-1,2-环己二醇表现出显著的驱避行为,而对0.1 g.L-1苯并噻唑表现出诱引行为(P<0.05)。

六斑平颜蚜蝇雄虫对雌性腺化合物的触角电位和行为反应

初步探究肉苁蓉Cistanche deserticola蛀茎蝇—六斑平颜蚜蝇Eumerus seximaculatum雌虫性腺化合物的主要成分并对其生物活性进行检测,为六斑平颜蚜蝇的生物防治提供理论依据。本研究采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术对雌性腺化合物进行分析鉴定,根据雄成虫的触角电位(EAG)及行为反应对各组分进行筛选、分析及确定。在雌性腺化合物中共鉴定出31种挥发性物质,从中选取5种,设置5个浓度梯度,进行EAG测试。结果表明,雄成虫对5种物质不同浓度的EAG反应敏感性差异明显。其中,雄成虫对1μg/mL 1,4-丁二醇二甲基丙烯酸酯、100μg/mL邻苯二甲酸二异丁酯最为敏感;把对雄虫引诱率最高的1,4-丁二醇二甲基丙烯酸酯和邻苯二甲酸二异丁酯按照不同体积比混合后开展行为选择试验,结果显示,当两者比例为1∶3时,对雄虫的引诱率最高,可达60%以上。综上所述,1,4-丁二醇二甲基丙烯酸酯和邻苯二甲酸二异丁酯被认为是雌虫性信息素的重要成分,对雄虫有明显的引诱作用,为苁蓉蛀茎蝇性诱剂的开发奠定理论基础。

红缘天牛对沙枣花中8种化合物的EAG及行为反应

为了研究沙枣花对红缘天牛的引诱效果,采用GC-MS技术分析出沙枣花挥发物合有47种化合物.选取相对分子质量在100～300之间的8种化合物,分别采用单一组分和多组分混合配方对红缘天牛进行EAG和嗅觉行为实验.结果表明：（1）在单一组分不同浓度的EAG实验中,红缘天牛对肉桂酸乙酯的反应最为强烈,且当质量分数为1.00％时红缘天牛的EAG相对反应值最大,除肉桂酸甲酯和愈创木酚反应不明显外,其他化合物均在质量分数为1.00％时EAG反应活性最高;（2）嗅觉行为反应中,红缘天牛对单一组分的8种化合物相对选择率均在质量分数1.00％时最高;（3）邻苯二甲酸二甲酯、肉桂酸乙酯、癸酸酯、芳樟醇、肉豆蔻酸异丙酯和4,4-亚甲基（2,6-叔丁基苯酚）这6种化合物配制成21种混合物,其中配方P、Q在EAG和嗅觉行为反应中效果均较好,这说明邻苯二甲酸二甲酯、肉豆蔻酸异丙酯、肉桂酸乙酯、癸酸酯、芳樟醇这5种化合物在一定的配比情况下对红缘天牛有较好的引诱活性.

绿盲蝽对七种锦葵科植物挥发物的EAG和趋向行为反应

研究绿盲蝽Apolygus lucorum(Meyer-Dür)对锦葵科植物挥发物的EAG和趋向行为反应,为研发绿盲蝽引诱剂或驱避剂策略提供科学依据。田间采用动态顶空采样方法收集了7种锦葵科植物的挥发物,通过室内气相-质谱联用系统(GC-MS)进行物质鉴定及定量分析,最终测定了雌、雄绿盲蝽成虫对11种候选特征挥发物的触角电位(EAG)反应和嗅觉趋向选择行为。结果表明,7种锦葵科植物的挥发物种类和含量有较大差异,而且4种棉花品种之间的挥发物差异也很显著。棉花石远321的挥发物总量最大,其中4,8-二甲基-1,3,7-壬三烯(DMNT)含量最高,壬醛和罗勒烯其次。蜀葵的挥发物种类和含量均最少。11种候选特征挥发物均能够引起绿盲蝽雌、雄成虫EAG反应,且雄性成虫的反应值大都高于雌性成虫。其中,绿盲蝽雌、雄成虫触角对反-2-己烯酸丁酯EAG反应值最大,芳樟醇、乙酸叶醇酯、甲基庚烯酮及DMNT也能够激发绿盲蝽较大的EAG反应。在趋向行为检测中发现,DMNT及柠檬烯等对雄性成虫具有吸引作用。对雌性成虫有吸引作用的物质有γ-萜品烯、DMNT、月桂烯、α-石竹烯、罗勒烯及乙酸叶醇酯等,其中γ-萜品烯和乙酸叶醇酯对雌性成虫具有极显著吸引效果。锦葵科候选植物挥发物对绿盲蝽雌、雄虫具有不同EAG和趋向行为反应影响,候选气味化合物可以作为设计绿盲蝽引诱剂组分进行害虫防控田间实践。

红缘天牛对不同诱剂的EAG与行为反应及野外诱集效果

采用目前广泛应用的植物挥发性物质和性信息素配制成25种引诱剂,对红缘天牛进行了行为、电生理测定及野外诱集实验.结果显示:诱剂W的诱集效果最好,相对诱捕率达21.8%,EAG值为4.116,亦最高.其次为诱剂T,相对诱捕率为17.2%,EAG值为3.714.诱剂X和V的相对诱捕率也较高,分别为9.2%和8.0%.另外,以青霉素注射剂药瓶作为诱芯的载体、以植物挥发性物质和性信息素作为诱剂研制而成的诱芯,缓释作用很好,具有应用推广价值.

不同生境异色瓢虫对茶梢互利素和蚜虫利它素EAG和行为反应

触角电位 ( EAG)研究和选择性行为反应表明茶梢受茶蚜 ( Toxoptera aurantii Boyer)为害后能释放引诱异色瓢虫[Leisaxyridis( Pallas) ]的互利素 ,茶蚜、萝卜蚜 Lipaphiserysimi ( Kaltenbach)体表和茶蚜蜜露中含有吸引异色瓢虫的利它素 ,其中的少数特异性组分引诱活性较强。源于茶园、桑园和菜园的互利素或利它素对各自生境中的异色瓢虫更具刺激性 ,显示了生境特定性。 EAG剂量反应表明茶园中的显明变种比显现变种稍敏感 。

棉铃虫齿唇姬蜂对植物挥发物和寄主性信息素腺体化合物的EAG反应

测试了棉铃虫齿唇姬蜂CampoletischlorideaeUchida对58种植物挥发物和5种寄主性信息素腺体化合物的EAG反应。在100μg的刺激剂量下,棉铃虫齿唇姬蜂对C5～C7脂肪醇的EAG反应最强,碳链延长或缩短都将导致反应的降低;对脂肪醛、酮、酸和酯都有一定的反应。棉铃虫齿唇姬蜂对萜烯的EAG反应很低,对氧化萜的反应普遍升高。3种芳香化合物均可激起棉铃虫齿唇姬蜂较强的EAG反应。剂量反应曲线表明,具有EAG活性的化合物激起的反应强度与化合物的剂量呈正相关,而2种萜烯———α_蒎烯和反式石竹烯,在测定的剂量范围内EAG活性都很低。棉铃虫齿唇姬蜂对寄主性信息素腺体化合物也有EAG反应,用100μg和1000μg的寄主性信息素刺激,雄蜂的反应可比雌蜂的反应高出1倍。对植物挥发物在棉铃虫齿唇姬蜂寻找寄主中的作用进行了讨论。

侧柏树干的超临界CO_2萃取物组分分析及双条杉天牛的EAG反应

利用超临界CO2萃取法和索氏提取法分别提取侧柏Platycladus orientalis(L.)的韧皮部和木质部挥发物,经GC/MS分析其成分,结果表明:超临界CO2萃取物中检测到的21种组分中以倍半萜烯及其氧化物为主,没有检测到单萜类物质;索氏提取法检测到23种组分,韧皮部中检测到的组分以高沸点的树脂酸和二萜等为主,单萜烯和倍半萜及其氧化物含量较低;木质部中以倍半萜烯及其氧化物为主。将不同提取样品进行双条杉天牛Semanotus bifasciatus(Motschulsky)的触角电位反应,结果表明:2种方法的萃取物均能引起天牛的EAG反应,但以超临界萃取物引起的EAG反应较强,且与索氏提取物的反应值差异显著。罗汉柏烯和雪松醇可能是侧柏植物中引诱双条杉天牛的重要活性组分。

Cre-LoxP系统在炭疽芽胞杆菌基因敲除中的应用及eag基因的敲除

将Cre-LoxP系统应用于Bacillus anthracis中并成功敲除eag基因.以B.anthracis基因组为模板扩增得到上下游同源臂,联合两端带有LoxP位点的壮观霉素抗性基因片段构建好同源重组载体,转化B.anthracisAP422,通过一系列筛选得到带有抗性标记的重组菌.然后,通过转入Cre重组酶表达质粒,去除抗性标记,得到eag基因缺失的重组菌,并在DNA水平、RNA水平和蛋白质水平进行了系统的鉴定.最终建立了Cre-LoxP系统在B.anthracis中的应用方法,并成功敲除eag基因.

Eag1钾离子通道、HIF-1α以及VEGF在子宫颈癌中的表达及其临床意义

目的：探讨Eag1钾离子通道、缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）与血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在不同病变宫颈组织中的表达及其临床意义.方法：应用免疫组化方法（S-P法）检测40例慢性宫颈炎、40例CIN和100例宫颈癌组织中Eag1、HIF-1α及VEGF表达情况,并分析其与宫颈癌临床病理因素的关系.结果：宫颈鳞癌组织内Eag1、HIF-1α与VEGF蛋白的表达明显高于宫颈上皮内瘤变组和慢性炎症组（P＜0.01）;非角化型宫颈鳞癌组织中Eag1、HIF-1α与VEGF的表达高于角化型宫颈鳞癌（均为P＜0.05）; Ⅱb期及以上期宫颈癌组织中Eag1、HIF-1α与VEGF 表达高于Ⅰ～Ⅱa期（均为P＜0.05）;伴有淋巴结转移者三者的表达均高于无淋巴结转移（均为P＜0.05）;放疗前三者的表达高于放疗后（均为P＜0.05）;Eag1、HIF-1α与VEGF三种蛋白在宫颈鳞癌组织表达呈正相关（均为P＜0.05）.结论：Eag1、HIF-1α和VEGF的表达在宫颈鳞癌发生发展过程中起重要作用,与宫颈鳞癌进展密切相关,是宫颈鳞癌早期诊断和治疗的潜在靶点.

槐绿虎天牛对不同诱剂的EAG反应及诱剂的诱捕效果

本实验研究了14种引诱剂对槐绿虎天牛的诱捕效果,结果表明,14种引诱剂对槐绿虎天牛都有一定的引诱效果.野外诱捕结果显示:引诱剂D的效果最好,日平均诱捕率为0.82%;H次之,为0.64%;G最弱,日平均诱捕率为0.11%.所用诱剂对其它鞘翅目、鳞翅目、膜翅目、半翅目、双翅目、同翅目和脉翅目昆虫也有引诱作用.特别是D诱剂对金龟子科害虫的诱集效果极好.经触角电位测定,D诱剂的EAG反应相对值最高,为1.95;I诱剂次之,为1.80.表明D和I都是很好的诱剂配方.各诱剂所捕到槐绿虎天牛雌雄比约为2∶1.

棉铃虫对几种信息化合物的触角电位 (EAG)反应

通过棉铃虫成虫对 1 0种寄主植物挥发性物质、两种性信息素组分及两者的混合作用的触角电位反应 ( EAG) ,发现棉铃虫雌雄蛾对 1 0种挥发性物质的 EAG反应差异显著 ( P<0 .0 5 ) ,说明了 1 0种挥发物质对棉铃虫成虫的感应功能有所不同。 1 0种寄主植物挥发物质与性信息素主要组分混合后能引起雄蛾 EAG反应明显高于单独性信息素的反应 ,其中有 4种挥发性物质明显地增强棉铃虫对性信息素的反应 ( P<0 .0 5 ) ,即庚醛、1 -己醇、反 - 2 -己烯醇、顺 - 3-己醇 - 1 ,说明了以寄主植物挥发物质与昆虫性信息素混合作用来增强昆虫性信息素的应用效果。不同光温条件下饲养的雄蛾对寄主植物挥发性物质与性信息素相互作用的 EAG反应差异显著 ( P<0 .0 5 )。

红缘天牛对枣树6种挥发物EAG和嗅觉行为反应

为探明枣树挥发物吸引红缘天牛成虫的原因,应用触角电位仪和嗅觉仪分别测定红缘天牛成虫对6种枣树挥发物的电生理反应和嗅觉行为反应。结果表明:试验所选的6种化合物均能引起红缘天牛的触角电位反应,随着浓度增加,电生理反应逐渐增加,当刺激物的浓度达到100μg/μL时,红缘天牛对6种化合物的EAG达到最高值。红缘天牛雌雄成虫对正十一烷的触角电位反应相对值均为最大,分别可以达到2.34、2.29。在嗅觉行为反应测定中,正十一烷和乙酸叶醇酯对红缘天牛雌雄成虫产生明显的引诱作用。本研究为进一步研发红缘天牛植物源引诱剂提供了理论依据。

日本双棘长蠹成虫对8种植物挥发物的EAG和行为反应

为了寻找新型的防治日本双棘长蠹(Sinoxylon japonicum Lesne)的植物源引诱剂,分别测定了成虫对8种植物挥发物的EAG和行为反应.EAG测定结果表明:1.00 mol/L的愈创木酚和邻苯二甲酸二甲酯均能引起日本双棘长蠹较强的EAG反应(p≤0.05)."Y"型嗅觉仪测定结果表明:1.00 mol/L的愈创木酚对日本双棘长蠹成虫的引诱效果最好,选择率达到57%;1.00 mol/L的邻苯二甲酸二甲酯对日本双棘长蠹成虫具有较好的驱避作用.其他挥发物对日本双棘长蠹均无明显的定向作用.

甜菜夜蛾(Spodopt eraexigua Hübner)雄蛾触角对雌蛾性信息素的EAG反应

采用 EAG生测技术研究表明 ,甜菜夜蛾雄蛾触角上具有 4种性信息素组分 (Z9,E1 2 - 1 4∶Ac(A)、Z9- 1 4∶ OH (B)、Z9- 1 4∶ Ac(C)和 Z9,E1 2 - 1 4∶ OH(D) )的感受细胞。单一组分 A,二元组分 AB和 AD,三元组分 ABC、ABD和 ACD及四元组分 ABCD的 EAG反应显著较高 ,与 3头雌蛾性信息素腺体浸提液的反应强度相当。进一步对 AB二元混合物中两组分的最佳比例以及最佳比例的剂量反应进行了测定。当 AB间的比例为 5∶ 5时可产生最大的 EAG反应 ,其它比例 (9∶ 1、7∶ 3、3∶ 7、1∶ 9)间无明显差异。 AB(5∶ 5)混合物的使用剂量在 0 .0 4～ 4μg范围内 ,EAG值随剂量增加呈直线上升 ;使用剂量低于 0 .0 4μg或高于 40μg。