全自动电泳分析系统筛查地中海贫血的临床应用价值探讨

目的探讨全自动电泳分析系统筛查地中海贫血(简称地贫)的应用价值。方法选择2008年1～12月已被基因诊断确诊的138例地贫患者和69例非地贫患者,对其血红蛋白电泳结果进行回顾性分析。结果与基因分析法相比,全自动电泳分析系统筛查α地贫的敏感性为95.0%,特异性为91.3%,诊断准确性为93.3%,阳性预测值95.0%,阴性预测值94.0%;筛查β地贫的敏感性为98.3%,特异性为95.7%,诊断准确性为96.9%,阳性预测值95.0%,阴性预测值98.5%。结论全自动电泳分析系统具有较高的特异性和较好的敏感性,是一种筛查地贫的理想方法。

黄芪总提物对肝细胞凋亡的抑制作用

为研究黄芪总提物 (TEA)对肝细胞凋亡的保护作用及其机理 ,分别用D 氨基半乳糖 (D GalN ,70 0mg·kg- 1,ip) +脂多糖 (LPS ,1μg·kg- 1,ip)诱导小鼠在体肝细胞凋亡和H2 O2 (0 .1mmol·L- 1,1h)诱导原代培养大鼠肝细胞凋亡 ,采用形态学观察 ,DNA凝胶电泳和流式细胞术等方法检测细胞凋亡 .结果表明 :①TEA (40mg·kg- 1,ig× 2 ,5h)使D GalN +LPS升高的小鼠血中肿瘤坏死因子 (TNF)水平和肝脏丙二醛 (MDA)含量降低 ,以及使降低的肝线粒体锰 超氧化物歧化酶 (Mn SOD)活性升高 ;TEA可明显抑制D GalN +LPS引起的小鼠肝细胞皱缩变小 ,核染色质凝聚和DNA片段化 .②TEA (2 0mg·L- 1)可恢复或减轻由H2 O2 所致肝细胞增殖受抑和肝细胞MDA含量升高 ;TEA (40mg·L- 1)可使H2 O2 致DNA较强的AO荧光染色变淡 ,TEA(2 0mg·L- 1)对H2 O2 所致的DNA片段化有抑制作用 ,使H2 O2 升高的大鼠肝细胞DNA亚G1峰 (即凋亡峰 )明显降低 ,经DNA软件分析 ,TEA可使H2 O2 升高的细胞凋亡率从 6 3.7%降至 4 .2 % .提示 ,TEA对体内外肝细胞凋亡均有保护作用 。

肾脏病患者尿蛋白电泳测定及其病理活检对比分析

[目的]评价十二烷基磺酸钠-琼脂糖凝胶电泳(SDS-AGE)技术进行非浓缩尿蛋白电泳测定的临床意义。[方法]应用SDS-AGE技术对60例肾脏病患者非浓缩尿液样本蛋白组分进行分析,并与同时作肾活检的病理结果作对比。[结果]60例肾脏病患者非浓缩尿液样本根据尿蛋白电泳图谱可以区分为正常生理性蛋白谱带、单一中分子蛋白谱带、中小分子蛋白谱带、中高分子蛋白谱带、混合型(小、中、高)分子蛋白谱带。与肾活检病理结果相符。[结论]非浓缩尿蛋白电泳法敏感性好,快捷简便,可根据尿蛋白组分的分布判断肾脏损伤的部位和程度,有重要的临床诊断意义。

SDS-琼脂糖凝胶电泳分析蛋白尿来源的临床意义

目的分析尿蛋白成分来鉴别蛋白尿来源。方法应用十二烷基磺酸钠-琼脂糖凝胶进行非浓缩尿蛋白电泳分析49例蛋白尿患者的尿蛋白成分。结果在肾后性蛋白尿中往往可以检测到巨球蛋白等一类大分子蛋白,而在肾性则往往缺乏。并且以巨球蛋白作为鉴别蛋白尿的标准,其敏感性和特异性均达到95.8%。结论该方法客观性强,诊断符合率高,重复性好,简便快速,值得临床应用。

抗Fas mAb和IFN联合诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的观察联合应用抗 Fas 单克隆抗体(mAb)和干扰素-γ(IFNγ)诱导人胃癌细胞系 SGC-7901细胞凋亡,并探讨其在胃癌治疗中的意义.方法应用细胞形态观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度术检测抗 Fas mAb,IFN-γ单独及联合应用诱导的人胃癌细胞系SGC-7901细胞凋亡,并应用流式细胞光度术检测 IFN-γ对人胃癌细胞系 SGC-7901细胞表达 Fas 抗原的影响.结果抗 Fas mAb 显著诱导 SGC-7901细胞凋亡(19.3%),细胞 DNA 裂解片段呈现典型的"阶梯状"排列的条带.联合应用抗 Fas mAb 和 IFN-γ处理人胃癌细胞系 SGC-7901细胞凋亡率(29.4%)显著高于对照组、IFN-γ及抗 Fas mAb 处理组(1.2%,1.9%,19.3%,t=17.345,17.276,5.425,P<0.01及P<0.05).IFN-γ处理组人胃癌细胞系 SGC-7901细胞 Fas 抗原的表达阳性细胞数(59.3%)显著高于对照组(27.1%,t=12.995,P<0.05),抗 Fas mAb 诱导 SGC-7901细胞凋亡的敏感性与 Fas 抗原的表达水平显著相关.结论抗 Fas mAb 可以诱导 SGC-7901细胞凋亡.联合应用抗Fas mAb 和 IFN-γ具有协同诱导人胃癌细胞凋亡的作用,其机制可能与干扰素-γ显著上调人胃癌细胞系 SGC-7901细胞Fas 抗原的表达水平有关.

非甾体类抗炎药对荷瘤小鼠肝癌的促凋亡作用(英文)

目的 :探讨非甾体类抗炎药 (NSAIDs)中选择性及非选择性的环氧化酶 - 2抑制剂对小鼠移植的肝肿瘤的凋亡诱导作用和其分子机理。方法 :昆明种小鼠腋下无菌接种腹水保种的鼠肝癌H2 2细胞 ,给予布洛芬 ,吲哚美辛和尼美舒利灌胃每天 1次 ,2 1d后断颈法处死小鼠 ,应用电镜 ,DNAladder,流式细胞术及Westernblot等方法研究NSAIDs对小鼠荷瘤的作用及分子机理。结果 :3种药均能诱导Hep2 2肿瘤细胞的凋亡 ,与对照组 (3.3%± 0 .6 % )相比 ,布洛芬 ,吲哚美辛和尼美舒利的细胞凋亡率分别上升为 15 %± 1.0 % ,2 9.7%± 1.5 %和 4 6 .3%± 3.5 %。尼美舒利治疗组呈现更为明显的凋亡形态和DNA梯度 ,也明显下调bcl-xL和bcl- 2的表达 ,而吲哚美辛和布洛芬下调bcl- 2表达的同时上调bcl-xL 的表达。 3种药物都不改变c -myc的表达。结论 :NSAIDs可抑制小鼠肝肿瘤的生长 ,诱导其肿瘤细胞调亡 ,其中选择性COX - 2抑制剂尼美舒利的作用最为明显 ,并与调节bcl-xL和bcl- 2的表达有关。

白藜三醇对人低密度脂蛋白氧化修饰的影响

为探讨白藜三醇的抗脂质氧化作用及其可能机制，采用Ｃｕ２＋和２，２＇－盐酸脒基丙烷两种不同的氧化体系诱导正常人低密度脂蛋白的氧化反应，应用硫代巴比妥酸法测定低密度脂蛋白氧化过程中硫代巴比妥酸反应物质和氧化型低密度脂蛋白的相对电泳迁移率的变化。结果发现５０μｍｏｌ／Ｌ白藜三醇可使Ｃｕ２＋介导的低密度脂蛋白氧化反应明显减弱，其硫代巴比妥酸反应物质和相对电泳迁移率分别下降７０．５％和４２．３％（Ｐ＜０．０１）；同时白藜三醇使Ｃｕ２＋和２，２＇－盐酸脒基丙烷诱导的低密度脂蛋白氧化反应潜伏期延长。上述结果提示白藜三醇具有抑制低密度脂蛋白氧化反应作用，推测其作用机制可能与捕获自由基等有关。

人源抗菌肽LL-37衍生物GLL-37抗菌活性研究

目的:对人源抗菌肽LL-37的特定氨基酸残基进行替换,获得衍生抗菌肽GLL-37,以增强其抗蛋白酶解能力和抗菌活性。方法:肽LL-37和GLL-37均由化学合成。采用微量稀释法测定它们对6种革兰氏阴性和阳性菌的最低抑菌浓度,以及在不同NaCl浓度下,它们对大肠埃希菌ATCC 25922的最低抑菌浓度。将LL-37和GLL-37与弹性蛋白酶共孵育后,通过对共孵育产物进行蛋白聚丙烯凝胶电泳和抗菌活性测定,研究它们抗弹性蛋白酶水解的能力。结果:GLL-37较LL-37对弹性蛋白酶的水解作用更具抵抗力。在高浓度NaCl下,GLL-37也较LL-37具有更强的抗菌活性。结论:通过对LL-37氨基酸序列中特定氨基酸残基的替换,可增强其抗菌活性及抗弹性蛋白酶水解能力,获得的衍生肽GLL-37具有很高的研究开发价值。

原发性高血压患者GNB3基因多态性的研究

目的探讨GNB3基因多态性与原发性高血压(EH)发病的关系。方法采用聚合酶链反应结合限制性内切酶片段长度多态分析方法(PCR-RFLP)对110例40岁及以上成年人和92例EH患者GNB3基因多态性进行检测,记录性别、年龄、糖尿病史、吸烟史、饮酒史,并测定体质量指数(BMI)、腰臀比(WHR)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及空腹血糖(FPG)浓度。结果 C825T多态性位点在两组人群中的分布均符合Hardy-weinberg遗传平衡定律,EH患者中CC、CT、TT 3种基因型频率分布依次为32.2%、54.3%、13.0%;对照组3种基因型频率分布依次为30.9%、63.0%、5.5%;两组人群中825T等位基因频率分别为40.2%、37.3%,两组比较差异无统计学意义。结论 GNB3基因多态性可能与EH发病无关。

基于毛细管电泳的片段分析和克隆测序在脊髓小脑共济失调动态突变检测中的应用研究

目的探讨基于毛细管电泳的片段分析和克隆测序在脊髓小脑共济失调(SCA)动态突变检测中的准确性和稳定性。方法采用基于毛细管电泳的片段分析和克隆测序对14例脊髓小脑共济失调患者(包括3例SCA2型、2例SCA7型、7例SCA8型和2例SCA17型)致病基因三核苷酸重复序列进行检测。结果 3例SCA2基因样本基于毛细管电泳的片段分析显示,扩展片段胞嘧啶-腺嘌呤-鸟嘌呤(CAG)重复序列分别为31、30和32次,每例样本取3个菌落进行克隆测序,CAG重复序列分别为37/40/40、37/38/39和38/39/40次;2例SCA7基因样本基于毛细管电泳的片段分析显示,扩展片段CAG重复序列分别为57和34次,1例取3个菌落进行克隆测序,CAG重复序列为69、74和75次,1例为45次;7例SCA8基因样本基于毛细管电泳的片段分析显示,扩展片段胞嘧啶-胸腺嘧啶-腺嘌呤(CTA)/胞嘧啶-胸腺嘧啶-鸟嘌呤(CTG)重复序列分别为99、111、104、92、89、104和75次,克隆测序分别为97、116、104、90、90、102和76次;2例SCA17基因样本基于毛细管电泳的片段分析显示,短片段/扩展片段CAG重复序列为37/50和36/45次,扩展片段分别取3和2个菌落进行克隆测序,CAG重复序列为51/50/52和45/44次。结论基于毛细管电泳的片段分析在判读重复序列时存在一定偏倚,但可以预估,可重复性佳,不影响基因检测结果的判定;而克隆测序具有明显不稳定性,尤其是SCA2和SCA7基因,可能与其重复序列组成较为单纯有关。克隆测序不适宜作为检测基因动态突变的方法,更不适宜作为判定动态突变序列组成的标准。

全自动毛细管电泳法和琼脂糖凝胶法检测一例多发性骨髓瘤患者血清蛋白结果变化

目的证明全自动毛细管电泳法比琼脂糖凝胶法更灵敏快捷。方法分别用毛细管电泳法和琼脂糖凝胶法分析一例多发性骨髓瘤(MM)患者治疗前后血清蛋白。结果毛细管电泳法治疗前、后,β-球蛋白为41.6%和19.7%;琼脂糖凝胶法治疗前、后,β-球蛋白为29.6%和13.3%。结论全自动毛细管电泳法比琼脂糖凝胶法更灵敏,是血清蛋白电泳有效方法。

一种经济、快速的凝胶DNA回收方法

目的:用明胶海绵吸收法回收DNA片段,并验证该方法能否有效、快速的从电泳后琼脂糖凝胶中回收DNA片段。方法:将明胶海绵剪成楔形,在紫外灯照射下插入含有目的DNA片段的琼脂糖凝胶中,待海绵完全膨胀后取出,离心收集DNA溶液;并用该法回收的DNA片段进行PCR扩增,检验其回收的DNA质量。结果:明胶海绵吸收法回收DNA样品的得率介于63%～98%,所回收的DNA进行PCR扩增能够获得相应的目的条带。结论:明胶海绵吸收法是一种快速、有效的DNA回收方法。

临产妇血清蛋白电泳谱分析

[目的]探讨临产妇血清蛋白电泳谱的改变。[方法]利用Helena全自动琼脂糖蛋白电泳仪对50例临产妇(实验组)及30名育龄非孕健康女性(正常对照组)血清蛋白电泳、总蛋白、白蛋白、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白、血清钙同时采用散射比浊法测定了20例实验组、10例对照组血清转铁蛋白(TRF)、铜蓝蛋白(CER)、C3、CRP、IgG、IgA、IgM。[结果]发现其图谱有一定的特征:α1、α2、β球蛋白显著增高(P<0.01),而白蛋白、γ球蛋白降低(P<0.01)。血清中脂类测定的结果显示高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白、总胆固醇、甘油三脂均增高(P<0.001)。另外,血清钙的水平以及TRF、CER、CRP、IgG、IgA的水平也增高(P<0.01),而IgM和C3的水平却是无显著的变化(P>0.05)。[结论]对临产妇进行血清蛋白电泳谱分析对孕妇的临床生理研究提供一定的理论支持。

大黄素对抗顺铂引起的WI-38细胞凋亡

目的 从细胞水平研究大黄素对顺铂引起WI 38细胞凋亡的影响。方法 采用MTT法检测细胞毒性 ,用形态学观察、DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 WI 38细胞经大黄素和顺铂同时处理 2 2h后 ,30mg·L- 1大黄素可明显减轻顺铂引起的细胞毒性 ,其IC50 值由 (16± 3)mg·L- 1增加至 (34± 6 )mg·L- 1;可明显抑制顺铂引起的细胞形态学改变、核异染色质边集和DNA片段化 ,使顺铂 10和 30mg·L- 1导致的细胞凋亡率由 35 .5 6 %和33.99%降至 9.2 1%和 10 .2 5 % ,S期细胞百分数由6 2 .6 6 %和 4 8.4 6 %降至 4 8.6 7%和 36 .18%。结论 大黄素可对抗顺铂所致WI 38细胞凋亡 。

基于连接酶-琼脂糖凝胶电泳的单核苷酸多态性快速检测方法

目的研究一种简便、快速、灵敏的单核苷酸多态性（SNP）分型方法,使其能够在简单实验条件下进行常规的临床检测。方法基于连接酶-琼脂糖凝胶电泳技术,设计突变位点的检测探针,通过对检测探针的连接、纯化和通用扩增反应,根据琼脂糖凝胶电泳条带的出现情况判定检测位点的突变类型。以表皮生长因子受体（EGFR）基因的3个SNP突变位点EGFR,c.2573T〉G（L858R）,EGFR,c.2582T〉A（L861Q）和EGFR,c.2155G〉T（G719C）为检测对象,分别对质粒模板和肺癌血浆循环DNA样本进行了检测。结果建立方法操作简便,具有较高的特异性和灵敏度。经过20-30个循环的PCR扩增,能够根据扩增条带的有无清晰判断检测位点的基因型。在对不均一样本中混合等位基因检测时,能够最低检测出2.5%的突变型等位基因。本方法和直接测序法分别能够从62例肺癌样本检测出6例和2例L858R位点杂合子突变。结论 SNP突变检测方法适合于在简单实验条件下对不均一样本进行常规突变检测。

快速琼脂糖电泳测定VLDL联合non-HDL的初步临床应用

目的快速分析测定动脉粥样硬化性疾病患者空腹血清脂蛋白中VLDL的百分含量、观察非高密度脂蛋白(non-HDL)及脂肪餐后血清中三酰甘油(TG)、VLDL的变化。方法使用SE-BIAMG300,自制琼脂糖凝胶平板,等电流电泳测定77例冠心病与脑梗死患者和62例健康体检者空腹血清脂蛋白中VLDL的百分含量,常规测定血脂,计算non-HDL(TC-HDL-c),并分析两组之间的差异。随机选取男女性患者各2例,给予脂肪餐进食,观察脂肪餐后1～6hTG、VLDL的变化。结果1)近1h左右的区带电泳法非常简单、快速,VLDL%扫描低值与高值的批内CV为9.3%和5.3%。2)健康对照组中女性VLDL%显著低于男性〔(10.5±5.8)%vs(14.7±9.3)%〕;其他差异表现为成年女性的HDL绝对值和在脂蛋白中所占的百分比都明显高于男性,apoA1也显著高于男性,而apoB100则低于男性水平(P<0.05)。3)动脉粥样硬化性疾病组血清脂蛋白中VLDL的含量及non-HDL显著高于健康对照组,分别为(15.5±7.3)%vs(12.7±8.1)%,(3.26±0.93)vs(2.91±0.96)mmol/L,(P<0.05);表观血脂水平正常(三酰甘油小于2.2mmol/L、总胆固醇小于5.7mmol/L)的动脉粥样硬化性疾病患者血清TG、non-HDL、apoB、VLDL%、LDL%显著高于血脂正常的对照人群,而HDL、HDL%、apoA1显著降低,其中VLDL%与non-HDL分别为(14.4±5.7)%vs(10.9±4.6)%、(3.14±0.88)vs(2.74±0.91)mmol/L,(P<0.05)。4)脂肪餐后血脂测定,其中3例TG、VLDL均在4h左右达到峰值,而1例糖尿病患者TG、VLDL在2h提前升高至峰值;脂肪餐后1～6h,2例男性VLDL变化与TG的改变趋势相同,但2例女性餐后VLDL改变与TG的变化未见明显相关性,且女性的TG代谢明显慢于男性。结论1)男性相对于女性来说,HDL低而VLDL高,因此建议在临床关注non-HDL时,应分别列出男女性不同的参考范围。2)脂蛋白中高含量的VLDL是致冠状动脉粥样硬化性疾病的危险因素之一,且更需要关注表观血脂水平正常或接近正常人群的non-HDL,快速琼脂糖电泳测定VLDL%,提供了反映non-HDL的一项简单、直观的定量指标。

免疫固定电泳在血清M蛋白鉴定中的应用

目的 :探讨免疫固定电泳 (immunofixation electrophoresis,IFE)在检测 M蛋白中的应用 ,以及在试验中应注意的一些问题。方法 :采用琼脂糖凝胶免疫固定电泳法检测 5 0 0份临床送检血清。结果 :检测出 M蛋白 70例 ,其中有1例为双克隆表达。这 70例 M蛋白阳性患者的临床诊断包括 :多发性骨髓瘤 5 9例 ,非霍奇金淋巴瘤 1例 ,干燥综合征 1例 ,POEMS综合征 1例 ,华氏巨球蛋白血症 6例和良性单克隆丙种球蛋白病 2例。结论 :IFE特异性和敏感性较高 ,是检测和鉴定 M蛋白的一个很好的方法 ,干扰少 ,容易鉴别 ,应加强其在临床中的应用 ,但也应注意它的一些局限性。

妊娠高血压综合征患者载脂蛋白J基因的筛查

目的 :探讨载脂蛋白J(apoJ)基因在妊娠高血压综合征 (妊高征 )遗传背景中的地位。方法 :运用聚合酶链反应 变性梯度凝胶电泳 (PCR DGGE)技术对 5 0例妊高征患者和 5 0例正常孕妇的apoJ基因外显子进行了多态变异筛查。结果 :对apoJ基因 5号外显子筛查 ,共检出 38例杂合子和 1例纯合子 ,其中正常孕妇组有 2 5例杂合子和 1例纯合子 ;妊高征组有 1 3例杂合子 ,有 1例的 7号外显子也为杂合子。 5号外显子的杂合子多态变异基因型频率在妊高征组为 2 6 % ,显著低于对照组的 5 2 % (P <0 0 1 )。其余外显子DGGE未检出异常电泳条带。结论 :apoJ基因

孕妇外周血中胎儿γ血红蛋白基因的检测

目的 探索检测孕妇外周血中胎儿γ血红蛋白基因表达的方法。方法 提取孕妇全血mRNA ,经体外逆转录后 ,用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法 ,应用ε/γ特异引物引导扩增胎儿ε/γ血红蛋白基因 ,以NdeⅡ酶切后 ,经琼脂糖凝胶电泳 ,在凝胶成像系统下观察。结果 成功自孕妇外周血中扩增出胎儿ε/γ血红蛋白基因 ,ε/γ基因被NdeⅡ酶切成三个γ基因片断 ,大小分别为 191、5 7和 2 6bp。结论 孕妇全血中微量的胎儿mRNA已基本满足体外逆转录及扩增的要求 ,胎儿γ血红蛋白基因的检测可为无创伤性产前诊断的发展奠定基础。

一氧化氮作用不同时间对食管癌细胞核DNA的损伤作用

目的 :研究一定浓度的一氧化氮 (nitricoxide ,NO)作用不同时间对食管癌细胞核DNA损伤作用的特征性规律。方法 :以硝普钠 (sodiumnitroprusside ,SNP)作为NO的体外供体 ,以食管癌细胞系EC10 9作为细胞模型 ,采用单细胞凝胶电泳法检测一定浓度的SNP作用不同时间后 ,食管癌细胞核DNA被损伤的情况。结果 :SNP的浓度无论是 2 5 0 μmol L还是 5 0 0 μmol L ,随着对食管癌细胞作用时间的延长 ,彗星状细胞核所占的百分率均越来越高 ,经 χ2 检验总得来看各组间的差异有极显著性 (P <0 0 1)。回归分析结果表明 ,食管癌细胞彗星状细胞核生成的百分率与SNP的作用时间之间显著相关。结论 :NO对食管癌细胞核DNA的损伤作用具有明显的作用时间依赖性特征 ,总体规律是 ,在浓度一定的条件下 ,NO对细胞作用的时间越长 。