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Inducible Expression of Translation Elongation Factor 1A Gene in Rice Seedlings in Response to Environmental Stresses 被引量:13
1
作者 李子银 陈受宜 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1999年第8期800-806,共7页
Differences of gene expression between salinity_stressed and control rice ( Oryza sativa L. ssp. indica ) cultivar “Zhaiyeqing 8' were compared using differential display PCR (DD_PCR) technique. Sequence an... Differences of gene expression between salinity_stressed and control rice ( Oryza sativa L. ssp. indica ) cultivar “Zhaiyeqing 8' were compared using differential display PCR (DD_PCR) technique. Sequence analysis of one salt_inducible cDNA clone revealed that this clone represented a new member of rice translation elongation factor 1A (eEF1A) gene family and was tentatively named REF1A. Northern blot hybridization using REF1A fragment as a probe was performed to investigate the expression of rice translation elongation factor 1A gene in response to various environmental factors. It was observed that expression of the eEF1A gene in rice shoots was dramatically induced by salinity stress or exogenous application of abscisic acid (ABA). The induction of this gene by ABA stress occurred more quickly than that by salinity stress. In addition, expression of rice translation elongation factor 1A gene was also induced by drought (15% PEG6000), cold (4 ℃) or heat_shock (37 ℃) stresses. The results suggested that the induction of translation elongation factor 1A gene expression by environmental stresses might reflect the general adaptive response of rice plants to the adverse circumstances. 展开更多
关键词 RICE Differential display PCR Translation elongation factor 1A Environmental factors Differential expression
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Eukaryotic elongation factor-1α 2 knockdown inhibits hepatocarcinogenesis by suppressing PI3K/Akt/NF-κB signaling 被引量:9
2
作者 Fu-Nan Qiu Yi Huang +4 位作者 Dun-Yan Chen Feng Li Yan-An Wu Wen-Bing Wu Xiao-Li Huang 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2016年第16期4226-4237,共12页
AIM: To assess the impact of eukaryotic elongation factor 1 alpha 2 (eEF1A2) on hepatocellular carcinoma (HCC) cell proliferation, apoptosis, migration and invasion, and determine the underlying mechanisms.METHODS: eE... AIM: To assess the impact of eukaryotic elongation factor 1 alpha 2 (eEF1A2) on hepatocellular carcinoma (HCC) cell proliferation, apoptosis, migration and invasion, and determine the underlying mechanisms.METHODS: eEF1A2 levels were detected in 62 HCC tissue samples and paired pericarcinomatous specimens, and the human HCC cell lines SK-HEP-1, HepG2 and BEF-7402, by real-time PCR and immunohistochemistry. Experimental groups included eEF1A2 silencing in BEL-7402 cells with lentivirus eEF1A2-shRNA (KD group) and eEF1A2 overexpression in SK-HEP-1 cells with eEF1A2 plasmid (OE group). Non-transfected cells (control group) and lentivirus-based empty vector transfected cells (NC group) were considered control groups. Cell proliferation (MTT and colony formation assays), apoptosis (Annexin V-APC assay), cell cycle (DNA ploidy assay), and migration and invasion (Transwell assays) were assessed. Protein levels of PI3K/Akt/NF-&#x003ba;B signaling effectors were evaluated by Western blot.RESULTS: eEF1A2 mRNA and protein levels were significantly higher in HCC cancer tissue samples than in paired pericarcinomatous and normal specimens. SK-HEP-1 cells showed lower eEF1A2 mRNA levels; HepG2 and BEL-7402 cells showed higher eEF1A2 mRNA levels, with BEL-7402 cells displaying the highest amount. Efficient eEF1A2 silencing resulted in reduced cell proliferation, migration and invasion, increased apoptosis, and induced cell cycle arrest. The PI3K/Akt/NF-&#x003ba;B signaling pathway was notably inhibited. Inversely, eEF1A2 overexpression resulted in promoted cell proliferation, migration and invasion.CONCLUSION: eEF1A2, highly expressed in HCC, is a potential oncogene. Its silencing significantly decreases HCC tumorigenesis, likely by inhibiting PI3K/Akt/NF-&#x003ba;B signaling. 展开更多
关键词 Hepatocellular carcinoma CARCINOGENESIS Eukaryotic elongation factor 1 alpha 2 Proliferation PI3K/Akt/NF-κ B signaling pathway
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盐地碱蓬延伸因子 (Ss EF-1α)的克隆与表达分析(英文) 被引量:10
3
作者 孙伟 李燕 +1 位作者 赵彦修 张慧 《西北植物学报》 CAS CSCD 2004年第9期1657-1661,共5页
从盐胁迫下的盐地碱蓬(Suaedasalsa)的cDNA文库中获得了一个延伸因子(SsEF-1α)的cDNA片段。以此片段为探针,对其在不同胁迫处理下的盐地碱蓬中表达利用Northern杂交进行分析,结果表明,不同盐浓度处理、同一盐浓度不同时间处理下及双氧... 从盐胁迫下的盐地碱蓬(Suaedasalsa)的cDNA文库中获得了一个延伸因子(SsEF-1α)的cDNA片段。以此片段为探针,对其在不同胁迫处理下的盐地碱蓬中表达利用Northern杂交进行分析,结果表明,不同盐浓度处理、同一盐浓度不同时间处理下及双氧水刺激条件下延伸因子在碱蓬叶中的表达量先呈现减少然后增加的趋势;聚乙二醇(PEG)及低温诱导下均呈现上升趋势。由此可见该基因在盐、氧化、高渗和低温胁迫条件下产生一定的反应。 展开更多
关键词 盐地碱蓬 延伸引子 杂交 胁迫
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EEF1A1对急性心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡及Notch/AKT转导途径的影响
4
作者 朱涛 张为民 +3 位作者 阿不都乃比·麦麦提艾力 刘正 艾克热木·吐尔逊 霍强 《中西医结合心脑血管病杂志》 2024年第19期3519-3523,共5页
目的:探讨人类真核翻译延长因子(EEF1A1)对急性心肌梗死(AMI)模型大鼠心肌细胞凋亡及Notch/蛋白激酶B(AKT)转导途径的影响。方法:将30只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、干预组,每组10只,模型组、干预组于冠状动脉左前降支结扎建立... 目的:探讨人类真核翻译延长因子(EEF1A1)对急性心肌梗死(AMI)模型大鼠心肌细胞凋亡及Notch/蛋白激酶B(AKT)转导途径的影响。方法:将30只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、干预组,每组10只,模型组、干预组于冠状动脉左前降支结扎建立AMI大鼠模型,对照组仅手术穿线处理不结扎。建模后24 h干预组于心肌梗死区原位注射EEF1A1腺病毒,模型组、对照组注射等量生理盐水。干预72 h后,心脏彩超测定大鼠心功能,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色法评估心肌细胞凋亡,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TCC)染色法评估心肌梗死面积,采用实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定EEF1A1 mRNA表达量,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织EEF1A1蛋白以及Notch/AKT信号通路相关蛋白表达情况。结果:干预前,模型组、干预组左室射血分数(LVEF)明显低于假手术组(P<0.05),而左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)明显高于假手术组(P<0.05);干预后3 d后,干预组LVEDD、LVESD明显降低,而LVEF明显增加,模型组LVEDD、LVESD明显增加,而LVEF明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。干预组心肌组织EEF1A1蛋白及mRNA表达水平高于假手术组、模型组(P<0.05),而模型组心肌组织EEF1A1蛋白及mRNA表达水平高于假手术组(P<0.05)。干预组心肌梗死面积小于模型组(P<0.05)。干预组心肌细胞凋亡率明显高于假手术组(P<0.05),明显低于模型组(P<0.05)。干预组Notch1、Hes1、磷酸化AKT(p-AKT)/AKT相关蛋白表达明显高于模型组、假手术组,模型组Notch1、Hes1、p-AKT/AKT相关蛋白表达均明显高于假手术组(P<0.05)。结论:EEF1A1可抑制AMI大鼠心肌细胞损伤、凋亡,缩小心肌梗死面积,改善心脏功能,其作用机制可能与上调Notch/AKT转导途径有关。 展开更多
关键词 急性心肌梗死 人类真核翻译延长因子 细胞凋亡 心脏功能 Notch/AKT转导途径 实验研究
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NECK LEAF 1, a GATA type transcription factor, modulates organogenesis by regulating the expression of multiple regulatory genes during reproductive development in rice 被引量:6
5
作者 Liping Wang Hengfu Yin +4 位作者 Qian Qian Jun Yang Chaofeng Huang Xiaohe Hu Da Luo 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2009年第5期598-611,共14页
In the monocot rice species Oryza sativa L., one of the most striking morphological processes during reproductive development is the concurrence of panicle development with the sequential elongation of upper internod... In the monocot rice species Oryza sativa L., one of the most striking morphological processes during reproductive development is the concurrence of panicle development with the sequential elongation of upper internodes (UPIs). To elucidate the underlying molecular mechanisms, we cloned the rice gene NECK LEAF 1 (NL1), which when mutated results in delays in flowering time, smaller panicles with overgrown bracts and abnormal UPI elongation patterns. The NL1 gene encodes a GATA-type transcription factor with a single zinc finger domain, and its transcripts are de- tected predominantly in the bract primordia, which normally degenerate in the wild-type plants. Overexpression of NL1 in transgenic plants often gives rise to severe growth retardation, less vegetative phytomers and smaller leaves, suggesting that NL1 plays an important role in organ differentiation. A novel mutant allele of PLASTOCHRON1 (PLAD, a gene known to play a key role in regulating leaf initiation, was identified in this study. Genetic analysis demonstrated an interaction between nil and plal, with NL1 acting upstream of PLA1. The expression level and spatial pattern of PLA1 were found to be altered in the nil mutant. Furthermore, the expression of two regulators of flowering, Hd3a and OsMADS1, was also affected in the nil mutant. On the basis of these findings, we propose that NL1 is an intrinsic factor that modulates and coordinates organogenesis through regulating the expression of PLA1 and other regulatory genes during reproductive development in rice. 展开更多
关键词 elongation of upper internodes ORGANOGENESIS panicle development phase transition NECK LEAF 1 GATA- like transcription factor
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HIV-1转录延伸调控潜伏感染的分子机制
6
作者 胡淑婧 邓凯 《广西医科大学学报》 CAS 2024年第10期1331-1337,共7页
人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)作为获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的主要致病病原体,目前尚无有效治愈方法。现有的抗逆转录病毒疗法(ART)虽然可以有效抑制病毒复制,但却无法清除潜伏感染的细胞。因此,当前面临的主要挑战是找到安全、有效的... 人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)作为获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的主要致病病原体,目前尚无有效治愈方法。现有的抗逆转录病毒疗法(ART)虽然可以有效抑制病毒复制,但却无法清除潜伏感染的细胞。因此,当前面临的主要挑战是找到安全、有效的方法清除HIV-1潜伏储存库。HIV-1潜伏维持和再激活分子机制的研究已经揭示了HIV-1转录延伸过程在其中所起的核心作用。本综述主要概述HIV-1转录延伸的具体分子过程以及对潜伏感染的调控作用,为进一步探究HIV-1如何实现潜伏和活跃转录之间的平衡提供理论支持,为实现AIDS治愈提供新方向。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒1 潜伏感染 转录延伸 反式激活蛋白(Tat) 正转录延伸因子b(P-TEFb)
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亚洲牛带绦虫成虫延伸因子-1基因的表达、纯化及免疫学分析 被引量:3
7
作者 申萍香 吴璇 +4 位作者 黄江 胡旭初 余新炳 包怀恩 廖兴江 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期379-382,共4页
目的对亚洲牛带绦虫成虫延伸因子-1(elongation factor1,EF-1)基因进行克隆、表达和免疫学初步研究。方法将亚洲牛带绦虫成虫EF-1克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中用异丙硫代-β-D半乳糖苷诱导表达,表达产物通过... 目的对亚洲牛带绦虫成虫延伸因子-1(elongation factor1,EF-1)基因进行克隆、表达和免疫学初步研究。方法将亚洲牛带绦虫成虫EF-1克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中用异丙硫代-β-D半乳糖苷诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,用蛋白印迹法(Western blotting)进行免疫学分析。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET-28a(+)-EF-1构建成功。重组蛋白可被感染了亚洲牛带绦虫患者血清和猪血清识别,表明其具有免疫反应性。结论亚洲牛带绦虫成虫EF-1基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 亚洲牛带绦虫 延伸因子-1 基因克隆 原核表达
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翻译延伸因子1A的研究进展 被引量:39
8
作者 周冰 曹诚 刘传暄 《生物技术通讯》 CAS 2007年第2期281-284,共4页
翻译延伸因子1A(EF1α)是一个主要的翻译因子,EF1α.GTP催化氨酰tRNA结合到核糖体的A位点。EF1α不仅仅是翻译必须的蛋白,而且是一个重要的多功能蛋白。EF1α参与许多重要的细胞过程和疾病,包括信号传导、翻译控制、凋亡、细胞骨架组成... 翻译延伸因子1A(EF1α)是一个主要的翻译因子,EF1α.GTP催化氨酰tRNA结合到核糖体的A位点。EF1α不仅仅是翻译必须的蛋白,而且是一个重要的多功能蛋白。EF1α参与许多重要的细胞过程和疾病,包括信号传导、翻译控制、凋亡、细胞骨架组成、病毒复制及癌基因转化等。 展开更多
关键词 翻译延伸因子1A 细胞骨架 病毒 蛋白翻译 凋亡
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印度南瓜延伸因子基因CmEF1a的克隆与分析 被引量:5
9
作者 朱海生 刘建汀 +4 位作者 温文旭 李永平 王彬 陈敏氡 温庆放 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1096-1104,共9页
真核生物延伸因子(EF1a)是一种重要的内参基因,广泛应用于RT-qPCR中。为获得印度南瓜EF1a基因,开发合适的荧光定量PCR引物,本研究通过转录组测序和RT-PCR方法获得了1条长度为1 701 bp的cDNA,命名为CmEF1a,GeneBank登录号:MH310443。结... 真核生物延伸因子(EF1a)是一种重要的内参基因,广泛应用于RT-qPCR中。为获得印度南瓜EF1a基因,开发合适的荧光定量PCR引物,本研究通过转录组测序和RT-PCR方法获得了1条长度为1 701 bp的cDNA,命名为CmEF1a,GeneBank登录号:MH310443。结果表明,CmEF1a包含1个ORF,大小为1 344 bp,编码447个氨基酸,理论分子大小约为49.30 kD,蛋白质等电点为9.14。Wolf Psort分析发现, CmEF1a蛋白亚细胞定位于细胞质基质中;Motif Scan分析显示, CmEF1a蛋白质的氨基酸序列2~432位和322~430位分别为EF1结构域和EF1的C端保守结构域。同源性分析表明,CmEF1a基因编码的蛋白质与同为葫芦科的中国南瓜、甜瓜和黄瓜同源蛋白的相似性达到99%,具有高度的保守性。在此基础上设计了1对RT-qPCR引物,该引物具有较高的特异性和扩增效率,在印度南瓜不同组织和不同胁迫处理下均能稳定表达,适合作为内参基因应用于印度南瓜基因表达研究。本研究结果为印度南瓜重要功能基因的表达分析及相关分子调控机制的研究奠定了一定的理论基础。 展开更多
关键词 印度南瓜 延伸因子 内参基因 表达分析
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酵母双杂交技术鉴定FAT10新的结合蛋白:eEF1A1 被引量:2
10
作者 余新 刘天德 +3 位作者 袁荣发 王庆诺 李国惠 邵江华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期870-877,共8页
目的:利用酵母双杂交技术筛选类泛素蛋白FAT10(HLA-F adjacent transcript 10)在肝癌细胞Hep3B中相互作用的蛋白,为探讨FAT10蛋白在肝癌发生中的作用机制提供依据。方法:利用Clontech GAL4酵母双杂交系统筛选人肝癌细胞系Hep3B的cDNA文... 目的:利用酵母双杂交技术筛选类泛素蛋白FAT10(HLA-F adjacent transcript 10)在肝癌细胞Hep3B中相互作用的蛋白,为探讨FAT10蛋白在肝癌发生中的作用机制提供依据。方法:利用Clontech GAL4酵母双杂交系统筛选人肝癌细胞系Hep3B的cDNA文库,以获得与FAT10相互作用的蛋白分子;通过回交实验、免疫共沉淀和激光共聚焦细胞内共定位实验验证两者之间的相互作用;通过RNA干扰降低FAT10表达观察真核翻译延伸因子1α1(eEF1A1)的表达情况。结果:酵母双杂交筛选得到相互作用蛋白eEF1A1,激光共聚焦细胞内共定位确定FAT10和eEF1A1均位于细胞质内,存在共定位;回交实验和免疫共沉淀实验再次确认eEF1A1能够与FAT10相互作用;FAT10表达降低伴随着eEF1A1的表达下调。结论:FAT10能够与eEF1A1相互作用;FAT10可能通过eEF1A1来实现其部分功能。 展开更多
关键词 FAT10蛋白质 真核翻译延伸因子1α1 RNA干扰
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EEF1A2基因慢病毒表达载体的构建及慢病毒表达系统的建立 被引量:2
11
作者 许朝 胡端敏 诸琦 《生物学杂志》 CAS CSCD 2013年第2期18-22,共5页
利用PCR方法合成EEF1A2的基因全长,经NotⅠ和NsiⅠ酶切后克隆到慢病毒载体pGLV5-EF1a-EGFP/Puro上。构建的重组质粒pGLV5/EEF1A2经PCR、酶切及测序鉴定正确后,利用慢病毒表达系统(pGLV5 Lentiviral Expression Systems),将重组质粒与包... 利用PCR方法合成EEF1A2的基因全长,经NotⅠ和NsiⅠ酶切后克隆到慢病毒载体pGLV5-EF1a-EGFP/Puro上。构建的重组质粒pGLV5/EEF1A2经PCR、酶切及测序鉴定正确后,利用慢病毒表达系统(pGLV5 Lentiviral Expression Systems),将重组质粒与包装系统质粒(pVSV-G,pGag/Pol,pRev)4质粒共转染293T细胞,收集培养上清并感染人胰腺癌SW1990细胞,经嘌呤霉素筛选出稳定过表达细胞株EEF1A2/SW1990。Real-time PCR和West-ern blot检测结果显示EEF1A2在EEF1A2/SW1990细胞中表达较原代细胞明显增高(P<0.05),MTT结果显示EEF1A2/SW1990细胞的增殖能力亦较原代细胞显著增强(P<0.05)。成功构建了EEF1A2基因的慢病毒载体质粒pGLV5-EEF1A2及其慢病毒表达系统,并筛选出稳定过表达EEF1A2的人胰腺癌细胞株EEF1A2/SW1990。 展开更多
关键词 真核延伸因子1A2 慢病毒载体 真核表达
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肝细胞癌中真核延伸因子1A2的表达及意义
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作者 黄燕 易纯 +5 位作者 李琳子 刘莉莉 陆世旬 周璇 谢国斌 云径平 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期293-298,共6页
【目的】探讨真核延伸因子1A2(eEF1A2)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床病理意义。【方法】收集104例HCC患者的临床病理资料,利用组织芯片对其癌及癌旁肝组织进行免疫组化检测,应用统计学方法分析eEF1A2在这些组织中的表达水平及与患者... 【目的】探讨真核延伸因子1A2(eEF1A2)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床病理意义。【方法】收集104例HCC患者的临床病理资料,利用组织芯片对其癌及癌旁肝组织进行免疫组化检测,应用统计学方法分析eEF1A2在这些组织中的表达水平及与患者临床病理特征的关系。【结果】免疫组化结果显示:56.7%肝癌组织中eEF1A2高表达(eEF1A2++,eEF1A2+++),而仅13.5%的癌旁肝组织呈高表达,差异具有统计学意义(P=0.014)。eEF1A2的表达与乙肝病毒感染(P=0.030)和复发(P=0.012)相关。Kaplan-Meier分析表明:eEF1A2高表达患者的总体生存时间(P=0.024)和无复发生存时间(P=0.023)较eEF1A2低表达患者更长。多因素Cox回归分析提示:eEF1A2表达为影响HCC患者总体生存的独立危险因素(P=0.038)。【结论】HCC中eEF1A2蛋白表达增高,与肝癌患者术后复发和预后相关,eEF1A2可以作为判断肝癌患者预后的潜在分子标志物。 展开更多
关键词 肝细胞癌 真核延伸因子1A2 预后 复发
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木犀草素通过MIEF1抗H9c2心肌细胞损伤的机制研究 被引量:8
13
作者 史有阳 杨瑞 +2 位作者 张洋 孙霃平 刘胜 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期820-825,共6页
研究木犀草素(luteolin,Lut)抗H9c2心肌细胞损伤的作用及其机制。采用大鼠H9c2心肌细胞株,以1μM阿霉素(doxorubicin,Dox)建立心肌细胞损伤模型,不同浓度Lut(5、10、20μM)进行干预。细胞增殖法(MTT)检测细胞活力。通过高通量转录组测... 研究木犀草素(luteolin,Lut)抗H9c2心肌细胞损伤的作用及其机制。采用大鼠H9c2心肌细胞株,以1μM阿霉素(doxorubicin,Dox)建立心肌细胞损伤模型,不同浓度Lut(5、10、20μM)进行干预。细胞增殖法(MTT)检测细胞活力。通过高通量转录组测序筛选Lut(20μM)改善H9c2心肌细胞损伤的靶点基因。利用分子克隆技术,将心肌细胞中线粒体延长因子1(mitochondrial elongation factor 1,MIEF1)表达抑制,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Lut对低表达MIEF1心肌细胞中MIEF1,Ser637位点磷酸化-Drp1(p-Drp1,Ser637),Caspase-3蛋白表达水平。与模型Dox组比较,Lut显著改善H9c2细胞活力(P<0.05)。Dox组与正常组进行比较得到3582个差异基因;Lut加Dox组与Dox组进行比较得到1981个差异基因。利用小干扰RNA(siRNA)技术成功构建低表达MIEF1心肌细胞,Western blot结果显示,Lut能够增加低表达MIEF1心肌细胞中MIEF1、p-Drp1(Ser637)蛋白表达水平(P<0.05),降低Caspase-3蛋白表达水平(P<0.05)。总之,Lut对H9c2心肌细胞的保护作用可能与促进MIEF1表达有关,本实验结果为Lut治疗阿霉素导致的心肌细胞损伤提供理论依据。 展开更多
关键词 木犀草素 转录组学 心肌细胞 线粒体延长因子1
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真核翻译延伸因子1A蛋白家族功能位点的进化踪迹分析 被引量:5
14
作者 周峰 刘燕 +1 位作者 马永贵 黄原 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期773-782,共10页
真核翻译延伸因子1A(eEF1A)是真核生物蛋白质翻译过程中能将氨酰tRNA运送到核糖体A位点参与多肽延伸反应的多功能蛋白质.本文主要利用多种生物信息学分析工具进行地中海涡虫翻译延伸因子1A(SmEF1A)蛋白序列的查找与eEF1A直系同源蛋白的... 真核翻译延伸因子1A(eEF1A)是真核生物蛋白质翻译过程中能将氨酰tRNA运送到核糖体A位点参与多肽延伸反应的多功能蛋白质.本文主要利用多种生物信息学分析工具进行地中海涡虫翻译延伸因子1A(SmEF1A)蛋白序列的查找与eEF1A直系同源蛋白的搜索,并基于90条直系同源蛋白进行eEF1A蛋白家族的进化踪迹分析和SmEF1A蛋白功能位点的比较研究.结果表明,在eEF1A蛋白家族中共识别到338个踪迹残基位点和20个踪迹残基富集区域,SmEF1A蛋白的功能位点与踪迹残基位点密切相关,与GTP/Mg2+结合相关的S21、T72、D91、G94等重要位点均为全家族保守的踪迹残基,N-糖基化、磷酸化等蛋白修饰位点中踪迹残基位点往往是被修饰的部位或修饰功能发挥的关键辅助位点,而位于分子表面的配基结合口袋则与20个踪迹残基富集区域在分子表面形成的踪迹残基簇关系密切.eEF1A蛋白家族的进化踪迹分析为eEF1A蛋白重要功能区域关键残基的确定和未知功能位点的预测提供了重要信息. 展开更多
关键词 真核翻译延伸因子1A(eEF1A) 地中海涡虫 进化踪迹分析 功能位点
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真核翻译延伸因子eEF1A功能研究进展 被引量:5
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作者 高爽 查笑君 潘建伟 《浙江师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2013年第4期444-449,共6页
总结了近年来对于真核翻译延伸因子eEFlA生物学功能和作用机制研究的一些新进展,具体包括:eEFlA参与介导受损或错误折叠的蛋白质的降解;对微丝、微管骨架系统的组织与调控;参与调控细胞凋亡;参与细胞核输出氨酰-tRNA;与病毒基因组和RNA... 总结了近年来对于真核翻译延伸因子eEFlA生物学功能和作用机制研究的一些新进展,具体包括:eEFlA参与介导受损或错误折叠的蛋白质的降解;对微丝、微管骨架系统的组织与调控;参与调控细胞凋亡;参与细胞核输出氨酰-tRNA;与病毒基因组和RNA依赖性RNA聚合酶类(RNA-dependent RNA polymerase,RdRP)互作,参与病毒繁殖.阐述了对eEFlA进行研究的意义和价值,并提供了新的见解和展望. 展开更多
关键词 真核生物 翻译延伸因子1A(eEF1A) 功能 作用机制
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人呼吸道合胞病毒RNA聚合酶复合体蛋白N、P、L和M2-1重组质粒的构建和鉴定 被引量:1
16
作者 赵秀玲 张梅 +1 位作者 何金生 付远辉 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第8期895-899,共5页
目的构建可表达人呼吸道合胞病毒(RSV)转录延长/终止抑制因子M2-1(简称M2-1)、核蛋白(N)、磷蛋白(P)和大蛋白(L)的真核表达载体并鉴定蛋白表达情况。方法采用合成T7启动子Oligo DNA及PCR方法获得含有T7启动子的表达盒,通过体外连接方法... 目的构建可表达人呼吸道合胞病毒(RSV)转录延长/终止抑制因子M2-1(简称M2-1)、核蛋白(N)、磷蛋白(P)和大蛋白(L)的真核表达载体并鉴定蛋白表达情况。方法采用合成T7启动子Oligo DNA及PCR方法获得含有T7启动子的表达盒,通过体外连接方法克隆入载体px8δT,制备表达载体px8δT-PT。设计3对PCR引物,PCR扩增出RSV的M2-1、N和P基因,并克隆至px8δT-PT,构建px8δT-PT-M2-1、px8δT-PT-N和px8δT-PT-P。同时利用已有的质粒pcDNA3.1-L构建px8δT-PT-L。用重组质粒转染BSR T7/5细胞,72 h后再用Western blot法鉴定蛋白的表达。结果成功实现px8δT的改造,构建的4种重组质粒px8δT-PT-M2-1、px8δT-PT-N、px8δT-PT-P和px8δT-PT-L,经限制性内切酶分析与预期一致,经Western blot法分析证实M2-1、N及P蛋白被表达。结论获得以T7为启动子的表达载体px8δT-P,成功构建了含有M2-1、N及P编码基因的表达载体,为利用反向遗传学技术进一步改造RSV奠定了基础。 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 核蛋白 磷蛋白 转录延长/终止抑制因子M2-1 大蛋白
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RIPK3基因转染的SH-SY5Y细胞中HIF-1α基因及其信号通路相关基因表达变化 被引量:1
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作者 张国禄 程世翔 +4 位作者 徐忠伟 衣泰龙 廖吉连 涂悦 张赛 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第7期13-16,共4页
目的观察受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)基因转染的神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA及其信号通路相关基因表达变化。方法构建表达RIPK3基因的p CMV6-AC-GFP质粒(重组质粒),培养SH-SY5Y细胞,分为实验组及对照组... 目的观察受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)基因转染的神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA及其信号通路相关基因表达变化。方法构建表达RIPK3基因的p CMV6-AC-GFP质粒(重组质粒),培养SH-SY5Y细胞,分为实验组及对照组,分别转染重组质粒和空载质粒。采用Western blotting法检测细胞中的RIPK3蛋白,分别于培养8、14、20、26、32、38 h后,通过MTT实验检测细胞增殖情况(OD值)。采用转录组测序技术(RNAseq)及Ingenuity Pathway Analysis(IPA)软件检测并筛选RIPK3-HIF1α下游信号通路中的关键基因。采用微滴式数字PCR(dd PCR)检测两组细胞中的HIF-1αmRNA。结果实验组细胞中RIPK3蛋白相对表达量(0.806±0.097 5)高于对照组(0.455±0.088 6),P<0.05。随培养时间延长,实验组细胞增殖受到抑制。实验组细胞中HIF-1αmRNA相对表达量(0.015 43±0.003 47)低于对照组(0.046 28±0.010 26),P<0.05。在HIF-1α为核心的相互作用关系网络中,筛选出关键分子泛素缀合酶样蛋白(UBC)、希佩尔-林道蛋白(VHL)、转录延伸因子B多肽1(TCEB1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)。结论 RIPK3基因转染SH-SY5Y后,细胞中HIF-1αmRNA表达下调,同时HIF-1α信号通路相关基因(UBC、VHL、TCEB1、VEGFA)的表达水平受到影响。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤 受体相互作用蛋白激酶3 低氧诱导因子1Α 泛素缀合酶样蛋白 希佩尔-林道蛋白 转录延伸因子B多肽 血管内皮生长因子A
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YAP通过调控EEF1A2的表达促进肝癌细胞的迁移和侵袭 被引量:1
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作者 田祯 庄皓冉 +6 位作者 江楚雯 尹靖 韦晓莹 张枝林 史琳 张育 沈维干 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2023年第1期8-16,共9页
目的:研究Yes相关蛋白(yes-associated protein,YAP)通过调控真核细胞翻译延伸因子1A2(eukaryotic translation elongation factor 1 alpha 2,EEF1A2)的表达促进肝癌细胞迁移和侵袭的机制。方法:通过建立YAP和EEF1A2干扰表达或过表达的S... 目的:研究Yes相关蛋白(yes-associated protein,YAP)通过调控真核细胞翻译延伸因子1A2(eukaryotic translation elongation factor 1 alpha 2,EEF1A2)的表达促进肝癌细胞迁移和侵袭的机制。方法:通过建立YAP和EEF1A2干扰表达或过表达的SMMC-7721和SK-HEP1肝癌细胞模型,采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的改变;应用反转录和实时定量PCR(reverse transcription-quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)和Western blot法检测相关基因的mRNA和蛋白表达水平;利用染色质靶向酶切检测(cleavage under targets and release using nuclease,CUT&RUN)-qPCR实验检测YAP能否与EEF1A2基因的启动子序列结合。结果:EEF1A2在肝癌组织中高表达,并与肝癌细胞的迁移能力呈正相关;EEF1A2可以促进低迁移能力的SMMC-7721细胞和高迁移能力的SK-HEP1细胞迁移和侵袭,调控细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物Snail和E-cadherin的表达;YAP可以上调EEF1A2的表达而促进肝癌细胞的迁移和侵袭;CUT&RUN-qPCR实验结果显示YAP可以与EEF1A2基因的启动子序列结合。结论:YAP可以通过与EEF1A2基因的启动子序列结合,促进EEF1A2的表达,进一步促进肝癌细胞的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 真核细胞翻译延伸因子1A2 Yes相关蛋白 细胞迁移 细胞侵袭 肝癌细胞
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基于生物信息学分析TCEB1在肝癌中的表达及意义
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作者 陈平 李林海 吴为 《生命科学研究》 CAS CSCD 2022年第5期452-459,470,共9页
为探讨转录延伸因子B1(transcription elongation factor B subunit 1,TCEB1)基因在肝癌中的表达和临床意义,利用GEPIA、UALCAN分析TCEB1在肝癌中的表达以及与患者临床病理特征和预后的关系;采用cBioPortal分析肝癌中TCEB1基因的改变情... 为探讨转录延伸因子B1(transcription elongation factor B subunit 1,TCEB1)基因在肝癌中的表达和临床意义,利用GEPIA、UALCAN分析TCEB1在肝癌中的表达以及与患者临床病理特征和预后的关系;采用cBioPortal分析肝癌中TCEB1基因的改变情况;利用LinkedOmics分析肝癌中TCEB1的相关基因,并通过Metascape对TCEB1相关基因进行GO和KEGG通路分析;最后通过GeneMANIA构建TCEB1相互作用蛋白质网络。GEPIA和UALCAN的分析结果显示,TCEB1在肝癌组织中显著高表达(P<0.05),且表达水平越高,患者肿瘤分级和预后越差(P<0.05)。cBioPortal数据库检测结果显示,5%(52/1136)的肝癌患者的肝癌样本发生TCEB1基因改变,且基因拷贝数扩增与TCEB1 m RNA表达呈正相关,发生基因改变的患者预后显著较差(P=0.0129)。GO分析结果提示,TCEB1及其相关基因的分子功能主要与转录因子结合、泛素样蛋白转移酶活性、钙黏着蛋白的结合等有关。GeneMANIA分析提示,TCEB1与TCEB2、VHL、CUL2等蛋白质相互作用。本研究表明,TCEB1可作为肝癌患者预后的生物标志物和肝癌治疗新的潜在靶点。 展开更多
关键词 肝癌 转录延伸因子B1(TCEB1) 预后 生物信息学
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真核翻译延伸因子1家族成员在肺腺癌发生发展中的作用
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作者 武乐 柳江枫 +3 位作者 梁万丰 杨晔宏 胡刚 杨俊涛 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期867-885,共19页
目的基于公共数据库,分析真核翻译延伸因子1(EEF1)家族成员在肺腺癌中的作用和机制。方法利用UCSC Xena下载癌症基因组图谱项目的人类肺腺癌转录组表达数据,并通过临床蛋白质组肿瘤分析联盟数据库下载人类肺腺癌蛋白质表达数据,通过Mann... 目的基于公共数据库,分析真核翻译延伸因子1(EEF1)家族成员在肺腺癌中的作用和机制。方法利用UCSC Xena下载癌症基因组图谱项目的人类肺腺癌转录组表达数据,并通过临床蛋白质组肿瘤分析联盟数据库下载人类肺腺癌蛋白质表达数据,通过Mann-Whitney U检验分析EEF1D、EEF1A1和EEF1A2基因和蛋白表达水平及其与临床变量间的相关性,应用Kaplan-Meier生存分析检测EEF1D、EEF1A1、EEF1A2对肺腺癌总生存期的影响。利用单样本基因集富集分析算法探讨EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达水平与肿瘤免疫细胞浸润的关系,采用Spearman和Pearson相关分析评估EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路的相关性。采用免疫组织化学方法分析肺腺癌(n=75)和癌旁组织(n=75)中EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达水平。结果EEF1D、EEF1A1、EEF1A2基因和蛋白的表达水平在肺腺癌和非癌组织间的差异均有统计学意义(P均<0.001)。EEF1A1蛋白高表达患者的总生存期预后较差(P=0.039),EEF1A2蛋白高表达患者的总生存期预后较好(P=0.012),在一些临床病理特征上,患者的EEF1D基因表达水平与总生存期的预后有关。EEF1D、EEF1A1、EEF1A2表达水平与多种免疫细胞浸润和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路中的关键基因表达显著相关。结论EEF1D、EEF1A1、EEF1A2与肺腺癌进展相关,为肺腺癌候选的预后相关标志分子。 展开更多
关键词 肺腺癌 真核翻译延伸因子1 免疫 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路
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