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四川株多房棘球绦虫elp基因融合表达载体的构建及其诱导表达 被引量:4
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作者 王昌源 陈雅棠 +2 位作者 黄爱龙 唐霓 余登高 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第4期37-41,共5页
目的 实现多房棘球绦虫elp基因在原核中的表达 ,为进一步研究多房棘球绦虫ELP抗原的诊断及免疫保护性提供前提条件。方法 应用RT -PCR方法从中国四川株多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA获得elp基因编码序列 ,克隆测序后亚克隆于含有硫氧环蛋... 目的 实现多房棘球绦虫elp基因在原核中的表达 ,为进一步研究多房棘球绦虫ELP抗原的诊断及免疫保护性提供前提条件。方法 应用RT -PCR方法从中国四川株多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA获得elp基因编码序列 ,克隆测序后亚克隆于含有硫氧环蛋白 (Trx)基因的高效原核表达载体pET32a(+)。经酶切鉴定后以IPTG诱导表达ELP/Trx融合蛋白。SDS -PAGE及Westernblot进行鉴定。亲和层析纯化ELP/Trx融合蛋白 ,用于ELISA检测患者血清特异性抗体。结果 酶切鉴定显示本研究已将elp基因编码序列插入 pET32a(+)的多克隆位点 ,成功地构建了pETrx -ELP融合蛋白原核表达载体。SDS -PAGE及Westernblot分析显示重组质粒转化宿主菌在IPTG诱导下高效表达了ELP/Trx融合蛋白。检测 10份包虫病人血清均阳性 ,10份肝吸虫病、10份乙肝病人和 10份健康人血清均为阴性。结论 中国四川株多房棘球绦虫elp基因在大肠杆菌中获得了高效融合表达 ,初步实验结果显示该融合蛋白对包虫病具有诊断价值。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 elp基因 融合表达载体 构建 诱导表达
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多房棘球绦虫elp基因核酸疫苗诱生免疫应答的实验研究 被引量:4
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作者 王昌源 张洪花 +1 位作者 陈雅棠 黄爱龙 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期446-449,共4页
目的观察多房棘球绦虫elp基因核酸疫苗免疫BALB/c小鼠引起的体液和细胞免疫应答。方法30只BALB/c小鼠随机分成3组:Ⅰ组,肌注空质粒(pcDNA3.1)100μg/鼠;Ⅱ组,肌注多房棘球绦虫elp基因真核表达重组质粒(pcD-ELP)100μg/鼠;NS组,肌注等体... 目的观察多房棘球绦虫elp基因核酸疫苗免疫BALB/c小鼠引起的体液和细胞免疫应答。方法30只BALB/c小鼠随机分成3组:Ⅰ组,肌注空质粒(pcDNA3.1)100μg/鼠;Ⅱ组,肌注多房棘球绦虫elp基因真核表达重组质粒(pcD-ELP)100μg/鼠;NS组,肌注等体积生理盐水。每2周免疫1次,共3次。ELISA方法检测免疫后不同时间产生的特异性IgG1,IgG2a和IgG 2 b水平。双抗体夹心ELISA法检测免疫鼠脾脏单个核细胞(PMNC)在受到特异抗原刺激后,产生IL-4I、L-12和IFN-γ的能力,3H-TdR掺入法检测脾淋巴细胞的增值能力。结果首次免疫后4周,Ⅱ组小鼠血清可检测到特异性IgG1I、gG2a和IgG2b抗体,随免疫时间和免疫次数的增加3种特异性抗体的OD值逐渐增高,实验结束时(首次免疫后7周)3种特异性抗体OD值均最高。Ⅰ组和Ⅱ组小鼠脾PMNC培养上清中IFN-γ浓度分别为50 pg/ml和55 pg/ml,受特异抗原刺激后分别为44 pg/ml和101.5 pg/ml。NS组IFN-γ及各组IL-4和IL-12均未检出。Ⅰ组和Ⅱ组小鼠脾淋巴细胞增殖能力增高,其淋巴细胞CPM值分别为NS组的85倍和123倍,受到特异抗原或刀豆素刺激其淋巴细胞增殖更明显。结论多房棘球绦虫elp基因核酸疫苗可刺激BALB/c小鼠同时产生很强的细胞免疫和体液免疫应答。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫elp基因 核酸疫苗 免疫应答 BALB/e小鼠
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多房棘球绦虫elp基因在真核细胞COS7中的表达 被引量:8
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作者 王昌源 陈雅棠 +2 位作者 黄爱龙 唐霓 余登高 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2003年第1期38-42,共5页
目的 构建中国四川株多房棘球绦虫 elp基因真核表达载体 ,为核酸疫苗研究奠定基础。 方法 应用 RT-PCR方法从多房棘球绦虫续绦期幼虫 RNA获得 elp基因的编码序列 ,定向克隆于 p GEM- 11zf( +)。经酶切鉴定及测序后将目的基因亚克隆... 目的 构建中国四川株多房棘球绦虫 elp基因真核表达载体 ,为核酸疫苗研究奠定基础。 方法 应用 RT-PCR方法从多房棘球绦虫续绦期幼虫 RNA获得 elp基因的编码序列 ,定向克隆于 p GEM- 11zf( +)。经酶切鉴定及测序后将目的基因亚克隆于真核表达载体 pc DNA3.1( +)。重组真核表达载体 pc D- EL P鉴定后 ,纯化无内毒素的重组质粒 ,电穿孔方法转染哺乳动物细胞 COS7。RT- PCR、dot- EL ISA和免疫组化方法鉴定目的基因在 COS7细胞中的表达。 结果 琼脂糖凝胶电泳、酶切及序列分析证实多房棘球绦虫 elp基因编码区已成功地克隆于真核表达载体 pc DNA3.1( +)。RT- PCR、dot- EL ISA和免疫组化证实 ,重组质粒在哺乳动物细胞 COS7中能够表达多房棘球绦虫 EL P抗原。 结论 成功地构建了中国四川株多房棘球绦虫 elp基因的真核表达载体 ,该载体在 COS7哺乳动物细胞中能表达 EL P抗原 ,为多房棘球绦虫 elp基因疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 elp基因 真核表达 COS7 RT-PCR DOT-ELISA 免疫组化
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家蚕长形卵基因(elp)的精细定位及候选基因初步分析
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作者 刘先方 马晓 +2 位作者 易晓莉 侯成香 李木旺 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期344-347,共4页
长形卵为家蚕卵形突变型之一,由位于第18连锁群上的隐性基因elp控制。对家蚕长形卵突变基因进行分子定位,有助于研究该卵形突变的发生机制。在对elp基因初步定位的基础上,用STS分子标记对elp基因进行精细定位并筛选候选基因,构建了elp... 长形卵为家蚕卵形突变型之一,由位于第18连锁群上的隐性基因elp控制。对家蚕长形卵突变基因进行分子定位,有助于研究该卵形突变的发生机制。在对elp基因初步定位的基础上,用STS分子标记对elp基因进行精细定位并筛选候选基因,构建了elp基因的分子标记遗传连锁图,初步将该基因定位在家蚕基因组nsacf2902的标记T1809与T1826之间,候选区域约550 kb。通过检索KaikoBase和SilkDB数据库,对定位区域内具有EST序列的候选基因进行功能分析,并根据候选基因的CDS和EST序列设计引物进行RT-PCR扩增,在扩增的序列范围内,家蚕长形卵品系167elp与正常卵形品系P50没有差异,需要进一步对侯选基因的全长序列进行克隆和测序分析。 展开更多
关键词 家蚕 长形卵基因 精细定位 STS标记 候选基因
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Herbivore defense responses and associated herbivore defense mechanism as revealed by comparing a resistant wild soybean with a susceptible cultivar 被引量:1
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作者 Xiaoyi Wang Haifeng Chen +9 位作者 Zhihui Shan Qingnan Hao Chanjuan Zhang Zhonglu Yang Xiaojuan Zhang Songli Yuan Dezhen Qiu Shuilian Chen Yongqin Jiao Xin'an Zhou 《The Crop Journal》 SCIE CAS CSCD 2015年第6期451-467,共17页
Plants have evolved sophisticated defense mechanisms against herbivores to help them adapt to the environment. Understanding the defense mechanisms in plants can help us control insects in a more effective manner. In ... Plants have evolved sophisticated defense mechanisms against herbivores to help them adapt to the environment. Understanding the defense mechanisms in plants can help us control insects in a more effective manner. In this study, we found that compared with Tianlong 2(a cultivated soybean with insect susceptibility), ED059(a wild soybean line with insect resistance)contains sharper pubescence tips, as well as lower transcript levels of wound-induced protein kinase(WIPK) and salicylic acid-induced protein kinase(SIPK), which are important mitogen-activated protein kinases involved in early defense response to herbivores. The observed lower transcript levels of WIPK and SIPK induced higher levels of jasmonic acid(JA), JA biosynthesis enzymes(AOC3) and some secondary metabolites in ED059. Functional analysis of the KTI1 gene via Agrobacterium-mediated transformation in Arabidopsis thaliana indicated that it plays an important role in herbivore defense in ED059. We further investigated the molecular response of third-instar Helicoverpa armigera(Hübner) larvae to Tianlong 2 and ED059. We found apoptotic cells only in the midguts of larvae that fed on ED059. Compared with larvae reared on the susceptible cultivar Tianlong 2, transcript levels of catalase(CAT) and glutathione S-transferase(GST) were up-regulated, whereas those of CAR, CHSB, and TRY were down-regulated in larvae that fed on the highly resistant variety ED059. We propose that these differences underlie the different herbivore defense responses of ED059 and Tianlong 2. 展开更多
关键词 Soybean H.armigera Morphology gene expression level polymorphism(elp) DETOXIFICATION and toxin-tolerance gene
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