先导编辑在鸡胚成纤维细胞系中的效率研究

为探究先导编辑在鸡细胞系中的基因编辑效率,研究通过点突变和重组连接的方式构建先导编辑的表达质粒,使用在线软件设计并化学合成靶向OVM、MSTN和NHE1基因的先导编辑引导RNA(pegRNA)质粒,脂质体转染上述质粒至鸡胚成纤维细胞系(DF-1)中并进行药物筛选,PCR产物TA克隆测序检测并统计各位点的编辑效率。结果显示:测序和PCR鉴定结果表明先导编辑表达质粒构建成功;DF-1中OVM基因经先导编辑后成功产生错义突变,其中精确编辑效率为41.10%、错误插入与缺失(indel)效率为6.67%,均显著优于对照组的常规基因编辑(P<0.05);MSTN基因的先导编辑精确编辑效率为10.24%、indel效率为13.57%,NHE1基因的先导编辑精确编辑效率为24.88%、indel效率为7.18%。结果验证了先导编辑在鸡细胞系中的有效性和普适性,为其进一步应用于基因编辑鸡的制备奠定基础。

涕灭威及其复合污染对斑马鱼胚胎DNA的影响

研究了一种毒性很高的氨基甲酸酯类杀虫剂———涕灭威和广泛使用的阴离子表面活性剂十二烷基苯磺酸钠 (SDBS)组成的复合污染体系对斑马鱼胚胎DNA的影响 .结果表明 ,涕灭威对斑马鱼胚胎DNA的损伤随浓度增大而加重 ,但低浓度涕灭威在短时间内造成的DNA单链断裂是可以修复的 ,高浓度则导致难以修复的双链断裂 .一定浓度 ( 2 0mg·L-1)

重离子射线照射后家蚕胚胎造血器官的修复再生

为了研究重离子射线照射后家蚕造血器官的修复再生作用,用碳离子射线局部照射家蚕接近孵化时紧贴翅原基内侧的胚胎造血器官,局部细微手术损伤造血器官,观察了对幼虫造血功能的影响,了解了造血器官的修复程度。100Gy以上剂量照射,家蚕出现变态困难,幼虫和蛹的生存率下降,眠中、化蛹或羽化时期出现死亡个体等缺血生理障碍,其影响程度随射线剂量增加而加重。200Gy照射组5龄存活幼虫血细胞含量下降,但其中部分个体的血细胞含量接近对照未照射处理,其体内出现了再生的造血器官。家蚕幼虫有很强的修复再生造血器官功能。

基于胚胎电子电路的自修复数字电路研究

为了满足航空电子装备的战时损伤下的应用要求,延长航空装备的使用寿命,降低其维护费用,对航空电子装备的数字电路部分的容错性和自修复进行了研究,提出了基于胚胎电子电路的自修复数字电路;分别对自修复数字电路的逻辑功能模块、配置寄存器模块和自修复辅助电路模块进行了结构设计,研究了自修复数字电路在故障状态下,其细胞单元重构过程,并给出了例子进行说明。最后成功将该研究运用某型测试设备适配器上。

双酚A对人胚肝细胞DNA损伤和修复功能的影响

[目的]研究双酚A(BisphenolA,BPA)对人肝L-02细胞DNA损伤修复功能的影响。[方法]分别以1、10、50、100μmol/LBPA和100μmol/LBPA+30μg/LVitC处理L-02细胞,比较处理和未处理的人胚肝L-02细胞在DNA损伤程度、切除修复鼠缺陷交叉互补蛋白1(ERCC1)、尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)、错配修复hMSH2基因(hMSH2)、DNA依赖蛋白激酶复合物(DNA-PKcs)及O6-甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)表达水平的差异。每组细胞数均为1×106个/ml。[结果]BPA处理后,彗星试验显示BPA在低剂量(10μmol/L)时即具有DNA损伤作用(P<0.05),随着剂量增大,DNA损伤效应增加。100μmol/LBPA+30μg/LVitC组DNA损伤效应降低,显示抗氧化剂VitC可减缓BPA所致的DNA损伤效应,氧化损伤是BPA所致DNA损伤的方式之一。5种DNA损伤修复酶表达水平在1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L剂量组依次降低,在100μmol/L、100μmol/L+VitC组依次增加,50μmol/L组各种DNA损伤修复酶表达水平最低。BPA50μmol/L组与溶剂对照比较,5种DNA损伤修复酶均有明显降低,差异具有显著性(P<0.05)。100μmol/L组的表达水平均高于50μmol/L组,100μmol/L+VitC组均高于100μmol/L组。除DNA-PKcs与hMSH2外,其他DNA损伤修复酶在100μmol/L+VitC组与溶剂对照组比较差异均无显著性(P>0.05)。[结论]BPA对L-02细胞具有氧化损伤作用,并可导致DNA损伤,多种DNA损伤修复酶参与修复双酚A所导致的DNA损伤。VitC可减缓双酚A的DNA损伤作用。

应用人胚软骨细胞修复关节软骨缺损的研究

目的 了解应用人胚胎关节软骨细胞修复家兔膝关节软骨大面积深层缺损的效果 ,为临床上进一步应用人胚胎关节软骨细胞进行同种异体细胞移植的可行性提供佐证。方法 将分离的人胚胎关节软骨细胞以天然胶原作为细胞外基质网架 ,进行体外三维培养 1周后 ,植入家兔关节软骨大面积深层 (5 m m× 5 mm× 4 m m)缺损处 ,对修复组织进行大体观察及组织学评估。结果 移植术后 12周 ,缺损部位平坦、光滑 ,已为类似关节软骨的半透明组织填充 ,修复组织与宿主关节软骨组织整合较好 ,界限模糊 ;移植术后 2 4周 ,缺损表面为透明软骨填充 ,缺损深部的软骨下骨组织已经重建。结论 人胚胎关节软骨细胞可以作为软骨组织工程的种子细胞用于修复关节软骨组织的缺损。

uPA和uPA-R在人胚胎角膜碱烧伤后修复过程中作用的体外研究

目的 研究体外条件下人胚胎角膜碱烧伤后修复过程中尿激酶型纤溶酶原激活剂 (UrokinasetypePA ,uPA)和尿激酶型纤溶酶原激活剂受体 (uPA receptor ,uPA R)的作用。方法 在建立体外碱烧伤模型的基础上 ,采用细胞培养和形态学观察、ICC法以及图像分析等技术。结果 角膜缘和中央角膜源性的离体细胞的生长情况无明显差异 ,几乎所有细胞均表达AE1 AE3。碱烧伤后uPA和uPA R的表达在碱烧伤后 2 4h左右达到峰值 ,其中uPA的表达部位多位于胞浆 ,uPA R则相对较多位于胞膜。结论 组织块法培养可以获得纯度较高的角膜上皮细胞 ,胚胎组织的发育和细胞活力与成体角膜之间可能存在着差异 ,uPA和uPA R的作用在上皮组织中也可能存在着较强的共性。

体外培养脊髓神经元损伤后c-Jun蛋白表达

目的 建立一个模拟脊髓全横断损伤后脊髓组分———原代培养的脊髓神经元损伤的模型。探讨中枢神经损伤后损伤应答基因c jun的表达及变化。 方法 取Wistar大鼠 (孕 14d)脊髓 ,培养 10～ 12d后 ,采用所设计的标准模板 ,直视下进行损伤。观察损伤前、后不同时间神经元的形态及即刻早期基因c jun的表达及变化。 结果 脊髓神经元损伤 10min后胞核即有c Jun标记 ,损伤 2h后最多 ,而且阳性神经元的密度与划痕之间的距离呈明显的反比关系。 结论 受机械损伤的神经元中 ,c Jun表达阳性意味着此即刻早期基因产物已进入细胞核内起着“第三信使”的作用。

植入前遗传学筛查在高精子DNA碎片指数不育夫妇行ICSI中的应用

目的:探讨植入前遗传学筛查(PGS)对高精子DNA碎片指数(DFI)不育夫妇的辅助生殖妊娠结局的应用价值。方法:选取2015年4月至2016年10月精子DFI≥15%行ICSI治疗的男性不育患者60例作为病例组,其中行PGS-ICSI治疗的患者30例作为高DFI-PGS组,未行PGS检测的患者30例作为高DFI-ICSI组;另选取DFI<15%行ICSI治疗的30例患者作为低DFI-ICSI组。比较高DFI-ICSI组与低DFI-ICSI组正常受精率、优质胚胎率、囊胚形成率、胚胎种植率的差异;比较高DFI-PGS组与高DFI-ICSI组女方年龄,男方年龄、精子浓度、前向运动精子百分率、正常形态精子百分率、FSH、LH、T、精子DFI、核蛋白不成熟精子百分率,正常受精率、优质胚胎率、囊胚形成率、胚胎种植率差异。结果:高DFI-ICSI组与低DFI-ICSI组相比,正常受精率[(65.38±24.62)%vs(73.00±17.00)%]、优质胚胎率[(62.41±25.97)%vs(73.00±22.10%)]、囊胚形成率[(62.55±25.21)%vs(64.30±18.60)%]均无统计学差异(P均>0.05),胚胎种植率[31.25%vs 52.50%]有统计学差异(P<0.01)。高DFI-PGS组与高DFI-ICSI组相比,女方年龄,男方年龄、精子浓度、前向运动精子百分率、正常形态精子百分率、FSH、LH、T、精子DFI、核蛋白不成熟精子百分率,正常受精率[(69.76±15.82)%vs(65.38±24.62)%]、优质胚胎率[(64.42±30.75)%vs(62.41±25.97)%]、囊胚形成率[(67.53±19.24)%vs(62.55±25.21)%]均无统计学差异(P均>0.05),两组间胚胎种植率(60.97%vs 31.25%)差异有统计学意义(P<0.01)。结论:对于精子DFI≥15%的不育患者,行单纯ICSI治疗并不能提高其胚胎种植率;而行PGS可以显著提高患者胚胎种植率。

典型胚胎电子系统结构与性能的数学描述方法

为从数学角度分析和研究胚胎电子系统,提出了一种典型胚胎电子系统的数学描述方法。分析胚胎电子系统的结构特点和工作原理,建立电子系统的功能函数和工作状态函数。基于自修复能力和硬件消耗两个指标,建立电子系统的性能函数。利用建立的功能函数、工作状态函数和性能函数实现电子系统的数学描述,进而研究胚胎电子系统的功能判断、可靠性分析、性能评估、结构设计优化、自修复方式选择和预防性维修决策等。结果表明,胚胎电子系统的数学描述方法能够准确地对系统功能、性能和工作状态进行描述,从数学角度对胚胎电子系统开展理论研究。

伦理,胚胎和干细胞研究

道德是关于规则、直觉、理解和观点的一个复杂系统。而后者影响着我们相互间处理事务的方式。它们交叉地渗入我们的道德思考。这种思维与胚胎、干细胞的伦理密切相关,因为胚胎和干细胞涉及我们对与治疗和移植组织有关的人的生命及其启始问题。就像在许多对待生命及其可以阐释的研究方法方面,要有一个道德的思辩历程一样,解决这些问题,部分地需要讨论,部分地需要回答。只有在我们认定这种讨论能够融入应用干细胞治疗的胚胎及其类源和人体组织的使用中时,我们才会清楚,大多数人体不同部位的干细胞应用是经过了对人的生命启始、我们儿童、家庭进行了思考。

鸡胚营养组合物对衰老大鼠基因损伤修复的影响

目的:观察鸡胚营养组合物对衰老大鼠基因损伤修复的影响,探讨其延缓衰老的可能机制。方法:采用D-半乳糖建立衰老SD大鼠动物模型,每日1次颈背部皮下注射D-半乳糖500mg/(kg·d),连续造模90天,对照组颈背部皮下注射等剂量的生理盐水注射液。从第1天起,鸡胚营养组合物组、鸡胚组、营养组合物组、蛋清组,分别以相应剂量对大鼠进行灌胃,每天1次,直至第90天,拉颈处死大鼠。取各组大鼠肝脏、骨髓和脑组织,采用RT-PCR法检测各组织修复基因的表达情况。结果:与衰老模型组相比,鸡胚营养组合物组衰老大鼠肝脏和骨髓组织中错配修复基因MSH2表达量升高(P<0.05);鸡胚营养组合物组衰老大鼠肝脏组织中同源重组修复基因Xrcc1、Xrcc2、骨髓中同源重组修复基因Rad51以及脑组织中同源重组修复基因Rad51、Xrcc1表达量升高(P<0.05)。结论:鸡胚营养组合物能够修复衰老大鼠肝脏、骨髓和脑组织基因的损伤,此可能为其延缓衰老的作用机制之一。

咖啡碱对椎实螺胚增长的影响

作者采用简单的螺胚生长抑制法,证明软体动物细胞具有DNA复制后修复功能,并受咖啡碱抑制。在没有其他诱变剂的参与下,咖啡碱并不损伤DNA,但也没有保护作用。

短期培养对玻璃化冷冻小鼠2-细胞胚胎低渗抵抗力的修复作用

为研究短期培养对玻璃化冷冻小鼠2-细胞胚胎低渗抵抗力的修复作用,对玻璃化冷冻小鼠2-细胞胚胎解冻后进行短期(2～4 h)培养,然后使用20%的低渗PBS液于25℃条件下处理20 min,观察48 h发育率、囊胚率和移植后妊娠率、产仔率。获得93%的48 h发育率和48%的囊胚率,显著高于低渗处理前未培养组(47%和9%)(P＜0.05)。证明解冻后的短期培养中可以有效修复玻璃化冷冻对小鼠2-细胞胚胎低渗抵抗力的损伤。

神经组织联合移植修复成鼠脊髓损伤的比较研究

目的 比较胚胎脊髓与带蒂或游离周围神经联合移植修复脊髓损伤的能力。 方法 30只成年大鼠损伤胸髓后行胚胎脊髓加游离正中神经 (P +F组 )或加带蒂正中神经 (V +F组 )移植。术后 8周行体感诱发电位 (SEP)和光、电镜检查。 结果 V +F组胚胎脊髓与受体融合较好 ,体积增长 378.4%、神经微丝蛋白密度 (7.46± 0 .77)万个 /mm2 、神经元密度 (1.36± 0 .34)万个 /mm2 ,均高于P +F组 (P <0 .0 5 ) ,细胞分化程度高 ,SEP的P1、N1波潜伏期显著缩短 (P <0 .0 5 )。 结论 胚胎脊髓与带蒂神经联合移植 ,能促进胚胎脊髓成熟分化和损伤神经元再生 。