五种石斛兰的胚培养及其快速繁殖研究

对５种石斛兰属植物进行了胚培养试验和快速繁殖研究。结果表明：不同种类的石斛兰萌发时具类似的最适萌发胚龄；石斛兰胚培养的最适通用培养基为改良Ｎ６或自制ＰＴ培养基附加ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ，糖的最适浓度为２％；加入椰乳能提高萌发率，萌发后加入马铃薯汁、绿豆芽汁、香蕉汁对幼苗生长有促进作用，香蕉汁能促进根的生成和生长。对石斛兰试管苗生产降低成本的方法进行了探讨。

不同基因型玉米幼胚愈伤诱导及植株再生研究

本研究通过对不同基因型的玉米幼胚进行愈伤组织诱导实验,从49份玉米自交系材料中筛选出了5个胚性愈伤组织诱导率较高的自交系,其中,K6-64,K6-39,DL283-1诱导出的Ⅱ型胚性愈伤,具有很强的长期继代能力和再生能力,适宜作为转化受体材料进行遗传转化研究。对玉米幼胚在离体培养过程中影响因素进行了研究,1.5～2.0 mg/L 2,4-D能够较好的诱导玉米幼胚产生胚性愈伤组织。一定浓度的6-BA和KT都能够较好的促进玉米愈伤组织分化。

不同培养条件对猪卵母细胞IVM、IVF的影响

通过优化猪卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎体外发育体系,以进一步提高体外胚胎的生产效率和质量。研究了激素存在时间、不同激素和不同血清对猪卵母细胞体外成熟的影响;共培养体系、精卵作用时间、去除卵丘细胞的方法对猪体外受精及早期胚胎发育的影响。猪卵母细胞IVM培养48h,前24h内加入PMSG、hCG,后24h将其去除,卵母细胞总成熟率为79.54%;培养液添加15%FCS或15%NCS,卵母细胞成熟率分别为79.48%和74.81%;PMSG、HCG和E2配合使用后卵母细胞成熟率为81.42%。在IVF前用吹打法获得的卵裂率、桑椹胚率分别为37.89%和8.54%,精卵共孵育6h或8h的卵裂率(40.52%,37.24%)、桑椹胚率(8.42%,7.85%),以及用输卵管上皮细胞共培养所获得的卵裂率(40.84%)、桑椹胚率(9.53%)均显著高于其它各组。

影响山羊超排效果的因素研究

为探讨最佳的超数排卵方案,提高胚胎移植效率,试验以波尔山羊为研究对象,比较了不同超排方法、超排次数、超排季节、授精方式及生育状况等因素对供体超排效果的影响。结果表明:不同超排方法对超排效果有显著影响(P<0.05);经两次超排处理的供体所得可用胚数显著的高于未经过超排过的羊只(P<0.05);经一次超排处理的供体可用胚比例显著高于未经过超排过的羊只(P<0.05);而授精方式、超排季节、生育情况等因素对超排效果没有显著影响(P>0.05)。

海水中Ca^(2+),Mg^(2+), K^+含量对黑鲷胚胎及早期仔鱼发育的影响

１９９２～１９９３年，用不同Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋和Ｋ＋含量的人。配制海水，孵化黑鲷 （Ｓｐａｒｕｓ ｍａｃｒｏｅｐｈａｌｕｓ Ｂａｓｉｌｅｗｓｋｙ）受精卵，培育前期仔鱼。实验揭示了：在没有 Ｃａ２＋的 海水中不能孵出仔鱼，在没有Ｍｇ２＋的海水中能孵出少量畸形仔鱼；低Ｋ＋对黑鲷受 精卵孵化无明显影响，但对早期仔鱼的影响明显。针对咸淡水域海水鱼类育苗的特 点，提出了调配海水中适宜的Ｍｇ２＋／Ｃａ２＋为２．９ ０～３．３ ０和Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋绝对量分别 为 ２９０～３３０ｍｇ／Ｌ和 ８７０～１０００ｍｇ／Ｌ。其结果在 １９９２年和 １９９３年的生产性育苗 中得到验证。

IVF/ICSI妊娠后发生早期流产的相关因素分析

目的:探讨体外受精/卵细胞浆内单精子注射(IVF/ICSI)妊娠后发生早期流产的可能相关因素。方法:将IVF或ICSI获得妊娠的230个周期,按妊娠结局分为早期流产组和继续妊娠组(对照组),分析IVF/ICSI妊娠后发生早期流产的可能相关因素。结果:早期流产组患者年龄(34.00±4.52岁)明显高于对照组(30.84±3.19岁),(P<0.01);Gn用量、移植胚胎数、有自然流产史比率高于对照组(P<0.05);hCG日内膜厚度、胚胎种植率及多胎妊娠率低于对照组(P<0.05);基础卵泡刺激素(FSH)水平高于对照组(P<0.05)。Logistic回归分析显示自然流产史及年龄增高是发生早期自然流产的危险因素。结论:IVF/ICSI治疗周期中患者年龄、Gn用量、有自然流产史、移植胚胎数、多胎妊娠及基础FSH水平与早期流产相关,自然流产史及高龄可增加早期自然流产风险。

成单玉米悬浮细胞系的建立及植株再生

作者利用成单玉米 15,18号的幼胚诱导的愈伤组织 ,系统地研究了愈伤组织的改良、悬浮细胞系的建立及植株再生 .结果表明 ,通过调节 2 ,4 D的浓度、调节盐离子浓度、加入一定浓度的NaCl、添加一定量的KT、GA3、NH4 NO3以及采用液体适应培养等改良措施 ,选择得到了颜色鲜黄、小颗粒状结构、不分泌粘液、生长较迅速和易于悬浮的松脆愈伤组织 ;在悬浮培养初期 ,经过高浓度 2 ,4 D的启动 ,先后建立了 5个悬浮细胞系 ,对其中一个系的生长特性进行了测定 ,结果表明 :PCV和DWT在 4～ 6d时为其对数增长期 ,8d后则增长缓慢 ;采用过渡分化的方法 ,由该悬浮细胞系再生出了完整植株 ,植株再生率约为 50 % .作者还对悬浮系建立过程中悬浮细胞的细胞形态变化进行了观察 .

影响山羊胚胎移植效果的因素初探

为探讨最佳的胚胎移植方案,提高胚胎移植效率,试验以不同受体山羊为研究对象,比较了不同受体品种、移植胚胎数目、不同季节等因素对胚胎移植效果的影响。结果表明:不同品种受体和移植季节对胚胎移植效果影响不显著(P>0.05);胚胎移植数目对妊娠率没有显著影响(P>0.05),但移植一枚胚胎的胚胎受孕率显著高于移植二枚和三枚胚胎(P<0.01)。

生长环境和取蕾时间对大白菜小孢子培养胚诱导率的影响

对影响大白菜小孢子培养供试材料的不同生长环境和取蕾时间2个因素进行了研究,结果表明,耐热夏大白菜品种在高温下容易诱导出胚,不耐热秋大白菜品种在较低温度下容易诱导出胚;下午取蕾的胚诱导率高于上午取蕾,大白菜小孢子培养胚适宜取蕾时间应选择在下午。

鸡胚细胞的微载体培养

国外有许多利用微载体培养各种贴壁细胞的报道。鸡胚细胞(CEF cells)是最早用于体外培养的细胞之一,用它可生产多种鸡的疫苗,如法氏囊、新城疫、马立克疫苗等。我国生产上多采用滚瓶法,近年来才有微载体法培养的探索。要进行细胞的大规模培养,转瓶是有效的模拟。

输卵管切除对试管婴儿结局及血清抗苗勒管激素的影响

目的探讨输卵管切除对试管婴儿结局及血清抗苗勒管激素(AMH)的影响。方法回顾性分析行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的患者共206例,其中单侧输卵管切除行IVF-ET治疗60例(A组),双侧输卵管切除行IVF-ET治疗44例(B组),输卵管未切除行IVF-ET治疗102例(C组)。分析3组患者的试管婴儿结局及血清AMH水平。结果 3组患者基础促黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)及雌二醇(E2)水平、不孕年限差异均无统计学意义(均P>0.05)。A组和B组的输卵管切除时间差异无统计学意义(P>0.05)。B组血清AMH水平明显低于C组[(3.76±2.44)、(5.10±3.86)ng/ml],差异有统计学意义(P<0.05)。B组的启动日窦卵泡数(AFC)较C组明显减少[(8.55±2.97)、(11.41±4.07)个],差异有统计学意义(P<0.01)。A组和B组的夜针日E2水平明显低于C组[(1 945.23±1 111.97)、(1 771.16±832.80)、(2 494.00±1 208.89)p g/ml],差异均有统计学意义(P<0.05或0.01)。A组和B组的获卵数[(10.96±3.69)、(11.31±5.11)、(12.92±5.13)个]和可利用胚胎数[(4.43±2.72)、(5.02±3.26)、(5.96±3.27)个]均较C组减少,差异均有统计学意义(均P<0.05)。A组和B组的促性腺激素(Gn)启动量[(197.91±54.78)、(205.58±58.93)、(181.63±53.30)U]、Gn天数[(11.85±2.00)、(12.50±1.33)、(10.93±2.01)d]和Gn总量[(2 492.90±980.13)、(2 566.01±1 011.36)、(2216.79±1 063.51)U]均较C组增加,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论输卵管切除术明显影响患者的卵巢储备功能,使患者在IVF-ET过程中的卵巢反应性降低。

人胎海马发育的研究1.光镜观察

本文用光镜对Niss1染色和Golgi染色的4-10月人胎海马本部的锥体细胞和胶质细胞的发育进行了形态学研究。结果:(1)锥体细胞密度随胎龄的增大而减小,减小最明显的时间于6-7月间;(2)锥体细胞的体积随胎龄增大而增大,最明显的时间于8-9月间;(3)锥体细胞的树突可以分为顶树突和底树突两种,但前者萌出早于后者,且生长的快,并反复分支,后者为多支萌出,无分支,树突野呈扇形分布;胶质细胞密度随胎龄增大而增大,增大最明显的时间与锥体细胞密度减小的时间一致。两者呈高度负相关系(r=-0.89)。

Experimental Study on Treatment of Glioma by Embyonic Neural Stem Cell Transplnation in Rats

The neural stem cells in Wistar rats were cultured in vitro, purified, and transplanted into C6 glioma model in order to observe their biological characters and provide a basic foundation for treatment of neurological diseases by neural stem cell transplantation. The cells at hippocampal area from gestation 15-day rats were cultured in vitro, and frozen and preserved in liquid nitrogen. C6 tumor-bearing models （n=25） and neural stem cells transplantation models （n=35） were established. When the tumor grew to 3 to 4 weeks, 5 rats in each group were randomly selected for MRI examination. At different intervals, the rats were perfused and sampled for HE staining, GFAP and BrdU immunohistochemical staining. The results showed that after resuscitation of neural stem cells at 1 -4 passages, the cell viability was 40%--63% with the difference being not significant. The cells could proliferate, passage, and most cells transplanted into glioma model survived. The mean survival time in neural stem cell transplantation group and control was 4.28 and 3.88 weeks respectively, and the average tumor size in the former was smaller than in the latter. It was concluded that embryonic neural stem cells in rats could proliferate and differentiate, and after resuscitation the biological characteristic and viability of the cells were not influenced. Neural stem cells had inhibitory effects on the growth of glioma cells and could prolong the survival of rat model.

人胚胎期表皮干细胞与汗腺发生过程关系的研究

目的:探讨表皮干细胞与胚胎期汗腺发生过程中的相关性,为诱导表皮干细胞向汗腺细胞定向分化奠定基础。方法:分别取13～31周胚龄人胎儿背部全层皮肤,行常规组织学观察,并以免疫组织化学染色法(SP法),动态观察汗腺原基细胞、汗腺胚芽细胞及汗腺细胞对β1整合素与细胞角蛋白-19(K19)的表达特征。以细胞角蛋白-8(K8)免疫组化染色阳性为汗腺发生及成熟的鉴定标准。结果:不仅汗腺原基细胞、汗腺胚芽细胞表达β1整合素与 K19,成熟的汗腺细胞亦有表达,并持续存在于汗腺发生全过程。K8始于14～16周在汗腺芽细胞内表达,并持续存在。结论:汗腺于胚龄14～16周开始发生,至第24周基本成熟。胚胎期汗腺发生过程中,表皮干细胞是汗腺发生的源泉。

北京地区板栗胚珠发育的研究

北京地区,板栗胚珠原基于5月下旬在子房室壁上发生并缓慢生长。6月中旬生长迅速,到6月下旬,分化形成了内、外珠被和珠心。胚囊位于珠心顶部,胚囊下方的珠心组织形成珠心柱。7月上旬胚珠发育出现差别。7月下旬成育胚珠在珠孔端形成球形胚,败育胚珠的珠心组织解体。本文还对板栗产生空篷的原因做了分析。

大鼠同种异体胎肝组织微片移植治疗慢性肝衰的实验研究

目的探讨大鼠胎肝组织微片移植对慢性肝衰大鼠的治疗作用及可行性,为临床胎肝组织微片移植提供动物实验依据。方法选择肝硬化模型SD大鼠20只,随机分为对照组(n=10)与移植组(n=10)。孕14d的SD胎鼠肝组织作为供体。移植组每只受体接受3个胎鼠肝组织微片移植,移植部位在受体肝组织中;对照组只行开腹手术。手术后1周检测受体ALT、AST、TBIL及ALB的变化;1个月后观察死亡大鼠数量,并处死存活的大鼠,取肝组织检测PCNA、ALB及糖原的表达水平。结果与对照组比较,移植组ALT、AST及TBIL明显下降,ALB显著升高。PCNA、ALB及糖原染色阳性率明显高于对照组。结论大鼠同种异体胎肝组织微片移植可以改善肝硬化大鼠的生存时间及肝功能;移植肝组织可以在受体肝组织内存活,手术方法安全可行。

同种异体胎肝组织微片移植治疗大鼠急性肝功能衰竭的实验研究

目的探讨同种异体胎肝组织微片移植对大鼠急性肝功能衰竭的治疗作用,为胎肝微组织移植的临床试验提供动物实验依据.方法选择急性肝功能衰竭SD大鼠40只,随机分为对照组(n=20)、移植组(n=20).孕14 d的SD胎鼠肝组织作为供体;移植组每只受体接受两个胎鼠肝脏组织微片移植,移植部位在受体肝组织中;对照组只行开腹手术;手术后24 h、72 h、7 d及30 d分别检测受体ALT、AST、TBIL及ALB的变化,统计存活大鼠数量.结果与对照组比较,手术后24 h、72 h、7 d移植组ALT、AST及TBIL明显下降,ALB显著升高,死亡率下降.术后30 d两组间上述指标差异无统计学意义.结论同种异体胎肝组织微片移植可以改善急性肝功能衰竭大鼠的肝功能,降低大鼠死亡率.这种作用随术后时间的延长而下降.

水质毒性精确检测的斑马鱼胚胎心率观测系统

基于计算机视觉技术,构建了精确检测斑马鱼胚胎心率的自动观测系统。系统由实验室卵胚胎培养装置、组装的高速摄像显微镜和视频图像心率识别程序3部分组成。实验室卵胚胎培养装置采用了可以模仿接近自然条件的卵胚胎水浴观测环境,从而使观测结果更为精确,并接近水样的真实值;心率识别程序能够对视频图像进行分析处理,通过心室面积变化定量化表征斑马鱼的胚胎心率。通过培养和观测试验,随机选取4组1 min时长进行计数,所得结果分别为112、105、108、114次/min,平均心率为110次/min,与实际人工计数的斑马鱼胚胎平均心跳数108次/min的数值接近,波峰与心率基本吻合,验证了此方法对斑马鱼胚胎心率观测的准确性。

肥胖不孕患者体外受精-胚胎移植治疗中应用重组人生长激素的临床效果分析

目的探讨肥胖不孕患者在行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗时应用重组人生长激素(GH)的临床效果。方法选取2017年1月至2019年12月锦州市妇婴医院收治的129例行IVF-ET治疗的患者作为研究对象。按照促性腺激素(Gn)启动日期的单号、双号分为观察组(n=67)和对照组(n=62)。两组均采用促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRH-a)方案治疗。观察组在常规用药基础上,于Gn启动日皮下注射重组人GH直至人绒毛膜促性腺素(HCG)日。比较两组Gn使用天数、Gn总用量、获卵数、可利用胚胎数、优质胚胎数、胚胎异常事件发生情况、临床妊娠率。结果两组获卵数、可利用胚胎数、优质胚胎数、胚胎异常事件发生情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组Gn使用天数、Gn总用量均较对照组少,临床妊娠率较对照组高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论肥胖不孕患者在行IVF-ET治疗时应用重组人GH,可缩短Gn使用天数,减少Gn使用量,并可获得较好的临床妊娠率。

汗腺发生过程中基质金属蛋白酶与层黏连蛋白、纤连蛋白的表达特征

目的 探讨汗腺发生过程中基质金属蛋白酶 - 2 (MMP - 2 )、基质金属蛋白酶 - 7(MMP - 7)、层黏连蛋白 (LN)、纤连蛋白 (FN)的表达特征 ,为诱导表皮干细胞向汗腺细胞定向分化奠定基础。 方法 取 1 1～ 31周胎龄人胎儿背部全层皮肤 ,以免疫组化 (SP)与原位杂交法动态观察汗腺MMP - 2、MMP - 7、LN、FN的蛋白质表达及mRNA信号特征。细胞角蛋白 - 8(K8)免疫组化阳性为汗腺的鉴定标准。 结果 MMP - 2、MMP - 7蛋白在 1 4～ 2 0周于汗腺细胞及其周围局部基质表达逐渐加强 ,2 0～ 2 2周达峰值 ,此后表达减弱。同期LN、FN表达主要位于基底膜及汗腺芽周围基质 ,并呈进行性下降趋势 ,2 0～ 2 2周达最低值 ,此后则逐渐回升。MMP - 2、MMP - 7、LN、FN的mRNA信号强弱在汗腺胚芽细胞或汗腺细胞中与其蛋白质表达相吻合。K8于 1 4～ 1 6周开始在汗腺胚芽细胞内表达 ,并持续存在于汗腺发生全过程。 结论 汗腺于胚龄 1 4～ 1 6周开始发生 ,至2 4周基本成熟。MMP - 2、MMP - 7所介导的LN。