三棱、莪术含药血清对培养的人脐静脉血管内皮细胞生长和VEGF表达的影响

目的探讨三棱、莪术含药血清对血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)诱导的血管内皮细胞增殖和VEGF表达影响。方法以三棱、莪术含药血清作用于VEGF诱导的人脐静脉血管内皮细胞(humanumbili-calveinendothelialcell-1,HUVEC-1),倒置相差显微镜观察细胞形态学改变,MTT法观察细胞增殖情况,Westernblot和RT-PCR方法分别检测内皮细胞VEGF蛋白和mRNA的表达。结果三棱、莪术5.0g·kg-1·d-1、2·5g·kg-1·d-1大鼠含药血清可使正常人脐静脉血管内皮细胞排列紊乱,明显梭形化。5.0g·kg-1·d-1大鼠10%、5%、2.5%含药血清组和2.5g·kg-1·d-1大鼠10%含药血清组HUVEC-1细胞的增殖显著低于空白血清相同浓度组(P<0·05)。5.0g·kg-1·d-1、2.5g·kg-1·d-1大鼠5%的含药血清使HUVEC-1细胞VEGF蛋白、VEGFmRNA表达均显著降低。结论三棱、莪术含药血清可抑制VEGF诱导的血管内皮细胞增殖,其机制与抑制血管内皮生长因子表达密切相关。

早期康复治疗对小量脑出血病人功能恢复的作用及其可能机制

[目的]探讨早期康复治疗对小量脑出血病人功能恢复的作用及其可能机制。[方法]选取在我院就诊并住院的180例病人,将其随机分成常规治疗组、非早期康复组和早期康复组,所有病人均采取常规内科药物治疗方案,早期康复组的病人给予早期康复治疗,非早期康复组在住院后第14天给予康复治疗,比较在治疗前以及治疗4周后的Barthel指数以及Fugl-Meyer评分,并检测3组病人在治疗前后血清中血管内皮生长因子(VEGF)和循环内皮祖细胞(EPCs)水平的变化。[结果]与常规治疗组和非早期康复组比较,早期康复组病人治疗后Barthel指数与Fugl-Meyer评分均提高(P<0.05);与常规治疗组比较,早期康复组病人血清中VEGF和循环EPCs水平也明显升高(P<0.05)。[结论]小量脑出血病人接受早期康复治疗可有效改善其日常生活自理能力以及肢体运动功能,作用机制可能与血清中VEGF和循环EPCs水平的升高有关。

VEGF通过MAPK途径上调MC3T3-E1及C2C12细胞中Cbfa1基因的表达

目的研究生长因子VEGF对Cbfa1的调节作用及其与MAPK信号传导通路的关系。方法采用瞬时转染技术和RT-PCR方法。结果在MC3T3．E1细胞中，VEGF（1×10^-8～1×10^-6g·L^-1）作用24小时能够增加Cbfa1基因启动子活性，相对荧光素酶活性分别为对照组的1．29（P〈0．05），1．28（P〈0．01）和1．40（P〈0．05）。而加入PD98059（10μmol/L）后不但抑制了Cbfa1基因启动子活性的基础表达，而且完全阻断了VEGF所诱导的Cbfa1基因启动子活性的增加（P〈0．05）。C2C12细胞中不同浓度的VEGF处理组，其相对荧光素酶活性与对照组相比未见显著性差异。MC3T3-E1细胞中，VEGF处理前后，MC3T3-E1细胞中Cbfa1基因mRNA的表达水平未见显著变化。C2C12细胞中，VEGF处理后，第2天和第3天Cbfa1基因mRNA的表达由处理前的32．63±4．41，分别增加至46．56±2．70（P〈0．01）和50．35±5．62（P〈0．05）。PD98059阻断了C2C12细胞中VEGF对Cbfa1基因mRNA表达的上调作用。结论VEGF部分通过MAPK信号传导通路增加MC3T3-E1和C2C12细胞中小鼠Cbfa1基因启动子活性及mRNA的表达。

洛伐他汀保护内皮祖细胞的机制研究

目的探讨洛伐他汀(lovastatin)保护内皮祖细胞(en-dothelial progenitor cells,EPCs)的机制。方法EPCs与洛伐他汀或者血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体(lectin-like oxi-dized low density lipoprotein receptor,LOX-1)的特异性阻断抗体(LOX-1 mAb)预处理24 h后,再与氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)孵育48 h。然后,检测EPCs迁移、粘附和管状结构形成能力。为探讨洛伐他汀的作用机制,检测EPCs生成一氧化氮(nitric oxide,NO)的量,内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)和LOX-1蛋白及mRNA表达。结果oxLDL抑制EPCs迁移、粘附及管状结构形成能力,降低NO产生、eNOS蛋白及mRNA表达,增加LOX-1蛋白及mRNA表达。洛伐他汀和LOX-1 mAb恢复EPCs功能,逆转oxLDL对NO、eNOS及LOX-1的调节。结论洛伐他汀通过调节eNOS和LOX-1而保护EPCs免受oxLDL的损害。

肝素对HL-60细胞与人脐静脉内皮细胞粘附作用的影响

目的:研究肝素对HL-60细胞与脐静脉内皮细胞粘附作用的影响。方法:通过原代培养人脐静脉内皮细胞,在静止及动态条件下观察肝素对HL-60细胞与脐静脉内皮细胞的粘附作用的影响。结果:TNF-α处理脐静脉内皮细胞能明显增加HL-60细胞与脐静脉内皮细胞粘附;肝素处理脐静脉内皮细胞及HL-60细胞能明显抑制两者之间的粘附作用。讨论:肝素可抑制体外条件下HL-60细胞与人脐静脉内皮细胞粘附,该结果为进一步研究白细胞粘附机制及筛选抗炎药物提供了条件。

Kv1．5蛋白与脂多糖诱导的血管内皮细胞损伤的相关性

目的探讨Kv1.5蛋白与脂多糖（LPS）诱导的血管内皮细胞损伤的相关性。方法LPS以浓度梯度（0.5、1.0、5.0、10.0 μg/ml）及时间梯度（0、6、12、24、48 h）作用于人脐静脉内皮细胞（HUVECs），应用流式细胞仪检测细胞凋亡率，建立内皮细胞损伤模型，并通过Western blot法检测内皮细胞中Kv1.5蛋白水平；分别予以75、125、250、500 mmol/L浓度的Kv1.5特异性通道阻滞剂（MT）预处理30 min阻断Kv1.5通道后，运用流式细胞术检测内皮细胞凋亡率，酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定内皮细胞损伤标志物内皮细胞特异性分子-1（endocan）、血管细胞间黏附分子-1（VCAM-1）的浓度。结果LPS浓度为0.5、1.0、5.0、10.0 μg/ml刺激HUVECs 24 h，内皮细胞凋亡率分别为（33.530±1.266）%、（35.530±0.551）%、（48.270±0.901）%、（51.600±2.179）%，与对照组比较差异有统计学意义（P值分别为0.025、0.027、0.011、0.004），且在LPS 5.0 μg/ml时作用最显著；LPS（5.0 μg/ml）处理内皮细胞6、12、24、48 h，内皮细胞凋亡率分别为（30.200±1.113）%、（32.470±0.814）%、（46.630±0.513）%、（50.870±1.498）%，与对照组比较差异有统计学意义（P值分别为0.027、0.025、0.012、0.006），并且在24 h时作用最明显；建立内皮细胞损伤模型适宜的条件为5.0 μg/ml LPS刺激HUVECs 24 h；同时可见不同浓度LPS组Kv1.5蛋白表达明显上调（P值分别为0.036、0.027、0.008、0.005），12、24、48 h时LPS组Kv1.5蛋白表达亦上升（P值分别为0.004、0.036、0.007），Kv1.5蛋白表达与LPS呈一定的浓度及时间依赖性。与LPS组比较，不同浓度梯度MT组（75、125、250、500 mmol/L）内皮细胞凋亡率明显降低（P值均为0.000），且细胞损伤标志物endocan（P值分别为0.001、0.000、0.001、0.006）及VCAM-1分泌减少（P值分别为0.006、0.000、0.000、0.000）。结论内毒素诱导损伤的血管内皮细胞表达Kv1.5蛋白增多；阻断Kv1.5通道能减轻内毒素诱导的血管内皮细胞损伤。