Enramycin在鸡体内残留分析研究

本文报道了Ｅｎｒａｍｙｃｉｎ在鸡体内的残留分析结果。供分析的组织经胃蛋白酶消化，甲醇及盐酸混合液抽提，ＸＡＤ－２柱分离杂质、薄层层析及枯草杆菌ＡＴＣＣ６６３３生物显像，进行定性及定量分析。此法在肝、肾、肌肉、脂肪组织和血中Ｅｎｒａｍｙｃｉｎ的回收率分别为５７．７０％、４６．６５％、１４．８０％、３９．３５％及４６．６０％，其敏感度为２５ｐｐｂ。测试样来自喂饲１０ｐｐｍＥｎｒａｌｎｙｃｉｎ８周的试验鸡，分别于停药后０、２４、４８ｈ取样。采用上述方法进行分析，结果显示即使停药后立即采样，组织抽提物均不出现Ｅｎｒａｍｙｃｉｎ抑菌圈，说明其残留量低于２５ｐｐｂ。

基于酶联免疫分析方法检测畜禽饲料中恩拉霉素

本文建立了一种应用于检测畜禽饲料中恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法。采用羰基二咪唑法将生物活性高的恩拉霉素A组分合成的半抗原偶联卵清蛋白,构建检测原;同时将杂交瘤细胞株2H1F91免疫BALB/c小鼠,制备特异性识别恩拉霉素的单克隆抗体。在此基础上,构建了恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法的标准曲线,该曲线IC_(50)为91.61ng/mL,线性范围为25.73~471.39ng/mL,检出限为13.11ng/mL。猪饲料样品的添加回收率为91.60%~95.75%,鸡饲料的添加回收率为89.33%~94.80%,并且二者的变异系数均低于12%,这表明建立的方法结果可靠,适用于畜禽饲料中恩拉霉素含量的快速检测。

十二烷基苯磺酸钠对恩拉霉素发酵的影响

为了研究十二烷基苯磺酸钠对恩拉霉素发酵的影响,首先在恩拉霉素发酵培养基中添加不同量的十二烷基苯磺酸钠进行实验,发现加入适量的十二烷基苯磺酸钠能使发酵效价显著增长,在此基础上对加入时间点进行优化,确定最佳加入时间;其次在最优条件下对发酵过程中的糖耗速度、氨基氮和pH的变化进行了分析;最后研究了优化后的发酵周期。实验结果表明:十二烷基苯磺酸钠在恩拉霉素发酵中起到了重要作用,添加适量的十二烷基苯磺酸钠,能使恩拉霉素发酵效价达到8958μg/mL,效价提高了58%,发酵周期由240 h降至216 h,缩短了24 h,节省了能耗,提高了生产效率。

抗生素对肉鸡生长、屠宰性能和肉品质的影响

试验研究饲粮中添加维吉尼亚霉素、恩拉霉素或黄霉素对肉鸡生长性能、屠宰性能及肌肉品质的影响。试验采用完全随机设计,将216只1日龄AA肉仔鸡随机分为6个处理,每个处理6个重复,每重复6只鸡（公、母各半）。基础饲粮为无抗生素对照组,其余处理在基础饲粮中分别添加维吉尼亚霉素（5、10、20mg/kg）、恩拉霉素（1-21日龄5mg/kg,22-42日龄3mg/kg）或黄霉素（5mg/kg）。与无抗生素对照组相比,添加维吉尼亚霉素和恩拉霉素显著提高11-21日龄平均日增重（ADG）及22-42日龄平均日采食量（ADFI）和ADG（P〈0.10）。添加黄霉素可显著提高22-42日龄ADG（P〈0.10）。黄霉素组胸肌滴水损失显著降于维吉尼亚霉素组（P〈0.10）。维吉尼亚霉素、恩拉霉素对屠宰性能和肌肉品质均无显著影响（P〉0.10）。结果表明：饲粮中添加维吉尼亚霉素、黄霉素和恩拉霉素均可改善肉仔鸡的生长性能,对其屠宰性能均无影响;维吉尼亚霉素和恩拉霉素对肉鸡肌肉品质无显著影响,而黄霉素可降低鸡胸肌滴水损失。

苜草素、恩拉霉素和林可霉素对肉用仔鸡的免疫器官发育和生产性能的影响

选择1日龄艾维茵商品代肉鸡2000只,随机分成4组,每组500只.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在基础日粮中分别添加苜草素、恩拉霉素、畜达肥(化学成分为林可霉素),Ⅳ为空白对照组,在相同条件下进行饲养试验,比较苜草素、恩拉霉素、林可霉素对肉用仔鸡的免疫器官发育和生产性能的影响.结果表明:(1)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、对照组肉用仔鸡成活率分别为96.2%、92.6%、93.4%、92.0%,Ⅰ组与其它组差异均达显著水平(P<0.05).(2)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、对照组肉用仔鸡增重分别为2343.39、2283.21、2217.74、2210.83 g,Ⅰ组和Ⅲ、对照组差异达显著水平(P<0.05),Ⅰ和Ⅱ组差异不显著(P>0.05).(3)Ⅰ组肉用仔鸡全期肉料比最低,饲料转化率分别比Ⅱ、Ⅲ、对照组高3.8%、6.9%、7.6%.(4)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、对照组肉用仔鸡的半净膛率和全净膛率差异均不显著(P>0.05).(5)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、对照组肉用仔鸡胸腺重指数分别为2.86、2.63、2.73、2.64,Ⅰ与Ⅱ、对照组差异达显著水平(P<0.05),Ⅰ和Ⅲ组差异不显著(P>0.05);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、对照组肉用仔鸡法氏囊重指数分别为0.63、0.52、0.47、0.53,Ⅰ与其它组差异达显著水平(P<0.05).表明苜草素对肉用仔鸡具有促生长,提高饲料报酬,促进免疫器官发育,增强机体抗病力,提高成活率的作用.

恩拉霉素对肉鸡免疫性能及小肠绒毛形态的影响

选择160只健康1日龄的AA肉仔鸡,相同饲粮饲喂14d,随机分成A组(对照组,基础饲粮),B组(基础饲粮+恩拉霉素5mg·kg-1),C组(基础饲粮+恩拉霉素6mg·kg-1)和D组(基础饲粮+恩拉霉素8mg·kg-1)。每个处理4个重复,试验期35d。第49天时屠宰采血样和肠道组织样测定免疫性能,观察小肠绒毛形态。结果表明:饲喂恩拉霉素后,肉鸡免疫器官指数呈降低趋势,但统计差异不显著(p>0.05),血清中白蛋白、总蛋白和球蛋白各组间差异不显著(p>0.05)。饲喂恩拉霉素后,白蛋白/球蛋白值明显高于对照组(p<0.05)。与对照组相比,肉鸡饲喂恩拉霉素后小肠绒毛高度明显增加(p<0.01),各处理组小肠绒毛(V)高度分别提高12.2%,13.2%和14.4%;隐窝深度(C)明显变浅(p<0.05);绒毛高度与隐窝深度比值(V/C)极显著提高(p<0.01),组织切片显微观察显示饲喂恩拉霉素后肉鸡肠绒毛变长、变粗、外形排列紧密,且上皮细胞间杯状细胞增多。

日粮中添加及停用恩拉霉素对断奶仔猪生长性能和消化吸收功能的影响

本试验旨在研究添加和停用恩拉霉素对断奶仔猪生长性能,以及消化酶活性、肠道形态、肠黏膜钠/葡萄糖共转运载体1(SGLT 1)和二肽转运载体1(PepT 1)mRNA表达量的影响。选取21日龄断奶,体重相近,性别一致的PIC仔猪共20头,随机分成4个处理,每个处理5个重复,每重复1头猪。对照、处理1、处理2和处理3的日粮中分别添加0、5、20和80 mg/kg恩拉霉素,饲喂4周。第5周各处理仔猪停用恩拉霉素,饲喂基础日粮。第36天清晨,所有仔猪腹腔注射200 mg/kg脂多糖(LPS),注射后第3天屠宰取样测定消化酶活性、肠道形态、SGLT 1mRNA和PepT 1 mRNA表达量。结果表明,前4周,处理1和处理2的仔猪日增重与对照组相比有升高的趋势(P>0.05),处理3的仔猪日增重显著低于处理1和处理2(P<0.05);第5周各处理日增重和采食量均无显著差异(P>0.05)。仔猪日粮中连续4周添加恩拉霉素、停用1周后,显著降低了各处理空肠淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶的活性(P<0.05);显著降低了十二指肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度比(P<0.05);并显著升高了SGLT 1、PepT 1 mRNA的表达量(P<0.05)。本试验表明,日粮中添加5～20 mg/kg的恩拉霉素对仔猪具有一定的促生长作用;停用恩拉霉素并受到应激的条件下会降低断奶仔猪消化酶活性,损坏肠黏膜结构,降低仔猪消化吸收功能。

大孔树脂分离纯化持久霉素

以吸附量、解吸率、洗脱流速等为考察指标,确定持久霉素的最佳纯化工艺为:Ab-8型树脂具有最佳的吸附及洗脱效果,在树脂柱中静止吸附的时间为0.5h,上柱液质量浓度为13.03mg/mL,最佳上样量为20mL,洗脱流速为5mL/min,用700mL的70%溶剂A与30%溶剂B去除杂质,得到纯度较高的持久霉素,经过葡聚糖凝胶纯化后的试样中,持久霉素的相对含量可达到95%以上。

紫外诱变选育恩拉霉素高产菌株

本研究采用紫外诱变育种技术对一株产恩拉霉素抗真菌链霉菌(Streptomyces fungicidicus)F110进行了诱变处理,经链霉素抗性、利福霉素B抗性以及双重抗性筛选,共获得了132株抗生素抗性突变株,其中26株突变菌株的恩拉霉素产量与出发菌株相比均有明显提高。摇瓶发酵条件下,突变株SR93的恩拉霉素产量最高可达2 400μg/m L,与出发菌株相比提高了38%。传代结果表明:该突变株产素水平稳定,因此具备较好的开发及工业应用价值。

恩拉霉素的研究进展

概述了恩拉霉素的理化特性、药效学、毒理学和临床应用研究进展,展望了今后恩拉霉素的研究方向。

恩拉霉素微生物检定法的研究

以枯草芽孢杆菌为检定菌,检定培养基Ⅰ号为试验用培养基,采用双碟法进行恩拉霉素样品测定。通过浸提溶液组成、浸提时间、检定菌浓度考察,优化了检定条件。在此基础上,确立了恩拉霉素浓度的对数值与抑菌圈直径的线性范围,并对所建立的微生物检定法进行准确度、最小检出限等考察。结果表明,采用丙酮浸提液B、浸提恩拉霉素样品80min,恩拉霉素浸提较完全。在检定菌浓度106个/mL的条件下,恩拉霉素浓度在0.56～35.79U/mL之间,其浓度的对数值与相应的抑菌圈直径呈直线相关,相关系数r为0.9960。将建立的恩拉霉素微生物检定法用于恩拉霉素样品测定,回收率为95.90%,相对标准偏差(RSD)为1.95%。本方法可用于含恩拉霉素的样品测定。

恩拉霉素人工抗原合成工艺的优化

为制备恩拉霉素(Enramycin)抗体及建立恩拉霉素残留检测方法提供参考,采用L9(34)正交试验设计优化恩拉霉素-牛血清白蛋白人工免疫抗原(Er-BSA)的合成工艺条件,通过紫外光谱对合成效果进行鉴定。结果表明:最佳合成反应条件为反应物质量比(mBSA∶mER)为1∶1,反应溶剂比(VPBS∶V二氧六环)为2∶1,pH 6.7和反应温度28℃,其合成物的偶联率为25.70。反应物质量比和反应温度是影响反应的主要因素。

恩拉霉素质量标准的建立

目的建立恩拉霉素质量标准。方法采用HPLC-PDA法建立鉴别及恩拉霉素组分检查方法,采用效价法建立恩拉霉素含量测定方法,并根据药品质量标准分析方法验证指导原则的要求,进行相应方法验证。结果鉴别恩拉霉素组分检查方法专属性良好,在100~350u/mL范围内浓度与组分A与B峰面积之和具有良好的线性关系(r=0.9999);效价含量测定方法专属性良好,在10~48u/mL范围内浓度与抑菌圈直径具有良好的线性关系(r=0.9995),方法准确度回收率96.3%,RSD为2.9%。结论该质量标准考察项目全面,方法简单准确,可作为恩拉霉素质量控制的方法。

恩拉霉素人工抗原的合成与鉴定

建立酶联免疫方法以检测食品中恩拉霉素的残留,采用戊二醛法,偶联半抗原恩拉霉素(Er)和载体牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA),制备人工免疫抗原和人工包被抗原,分别为Er-BSA和Er-OVA。经紫外光谱鉴定,在紫外270～280 nm波长处得到Er-BSA和Er-OVA特征性偶联吸收峰。试验结果表明人工合成的2个人工抗原均偶联成功。人工免疫抗原和人工包被抗原的偶联比均达到26∶1,为进一步制备抗血清和酶联检测方法的建立奠定了基础。

安来霉素在肉鸡日粮中的应用研究

应用安来霉素、金霉素、杆菌肽锌三种抗生素药物添加剂，对１２００只ＡＡ肉鸡进行生产性能和经济效益对比，试验分三组。安来霉素组（１０ｍｇ／ｋｇ）、金霉素组（１００ｍｇ／ｋｇ）；杆菌肽锌组（７５ｍｇ／ｋｇ）。每组设４个重复组。采食安来霉素饲养的鸡只，日增重比金霉素高０５６％（Ｐ＞００５）、比杆菌肽锌组高６１７％（Ｐ＜００５）。饲料转化率分别比金霉素组高１４３％（Ｐ＞００５），比杆菌肽锌组高７２％（Ｐ＜００５），屠宰测定表明三组之间差异不显著（Ｐ＞００５）。经济效益分析表明安来霉素组分别比金霉素高组３７５％，比杆菌肽锌高组３１６％。试验结果表明安来霉素可以显著改善肉鸡的生产性能，提高经济效益。

恩拉霉素预混剂含量测定方法的改进

对《进口兽药质量标准》中收载的恩拉霉素预混剂的含量测定方法进行了适当的改进，将pH4．0的醋酸盐缓冲液改为pH7．8的磷酸盐缓冲液，将贮备液浓度由1000单位／mL降低为200单位／mL，提取时间延长至2—3h，优化了检测条件，能充分提取样品中的恩拉霉素，使检测数据更准确可靠。

HPLC法测定预混剂中恩拉霉素的含量

目的采用高效液相色谱法测定饲料中恩拉霉素的含量。方法测定色谱条件为：色谱柱为C18（5um，4．6mm×250mm），流动相为0．05mol／L磷酸二氢钠-乙腈（70：30），检测波长为267nm。结果恩拉霉素A及恩拉霉素B在12．5～200ug/mL范围内线性关系良好，相关系数R。分别为0．9960和0．9945；恩拉霉素A的回收率为96．4％-101．6％，恩拉霉素B的回收率为96．8％～101．2％。恩拉霉素A及恩拉霉素B的RSD分别为0．65％和1．12％。结论该方法线性范围宽、分析时间短、样品前处理简便、定量结果准确、重复性好，为其质量控制提供了依据。

恩拉霉素在动物生产中的应用进展

恩拉霉素是一种较为常用的多肽类饲用抗生素,本文综述了恩拉霉素的理化性质、抗菌活性,对动物生产与肠道菌群的影响以及检测方法的研究进展。

恩拉霉素高产菌株的筛选

从原始生产菌BKSFJ06出发,对其进行了紫外诱变、氯化锂与紫外复合诱变、亚硝基胍诱变和亚硝基胍与紫外的复合诱变及恩拉霉素抗性筛选工作,用HPLC检测方法,以恩拉霉素的产量为指标,筛选高产菌株。最终筛选出的最优突变菌株ERS42-101108产量提高了50%,且该菌株具有良好的遗传稳定性。通过实验内容可以看出,通过亚硝基胍和紫外复合诱变的方法,抗自身产物定向筛选出的突变株具有较优良的性质。

响应面法优化恩拉霉素发酵培养基

通过Plackett-Burman实验对杀真菌链霉菌Streptomyces fungicidious ERS42-101108产恩拉霉素初始发酵培养基中的8个因素的最佳水平进行评价,表明棉籽饼粉、麸质粉和磷酸二氢钾对恩拉霉素产量影响显著。用最陡爬坡实验逼近关键因素的最大响应区域,通过中心组合实验和和响应面分析,确定了最佳发酵培养基。经上述优化,恩拉霉素发酵单位从8300 u/m L提高到10250 u/m L。