犬瘟热病毒中国分离株囊膜糖蛋白基因免疫小鼠诱发的抗体应答

将CDV中国分离株 (YZ0 10 1)的两囊膜糖蛋白基因F和H与pGEM_Teasy载体构建的重组质粒分别采用EcoRI和KpnI、BamHI和KpnI双酶切后定向克隆进真核表达载体pcDNA3.1(一 )中 ,DNA测序和限制性酶切分析筛选阳性克隆pcDNA_H和pcDNA_F ,以重组质粒DNA和脂质体共转染COS_7细胞 ,用间接免疫荧光试验验证转染的COS_7细胞胞浆中分别表达了CDV的H和F蛋白。以聚乙烯胺 (PEI)为佐剂 ,将犬瘟热病毒F和H基因重组质粒pcDNA_H和pcDNA_F的DNA分别或混合肌注 6周龄BABL/c小鼠 ,同时设pcDNA原载体DNA对照。以 2周为间隔共免疫 4次。最后一次免疫后 3周 ,采血分离血清 ,酶联免疫吸附试验 (ELISA)和病毒中和试验 (SN)分析基因免疫在小鼠体内诱导的免疫应答。结果显示 :pcDNA_H和pcDNA_F试验组免疫 4次后分别激发了 10 2 .99+ 0 .13 4 、10 2 .93 + 0 .164滴度的ELISA抗体 ;两种质粒DNA混合免疫后产生了 1∶32～ 1∶12 8的抗CDV的中和抗体 ;而原载体DNA免疫后 ,用ELISA和SN未检测出特异的CDV抗体。表明犬瘟热病毒囊膜糖蛋白F和H基因免疫小鼠可诱发产生特异性的体液免疫。