Screening of Cellulase Producing Fungus ZDTJ097-1-(7) from Bohai Bay and Its Yielding Conditions

Abstract [ Objective ] This study aimed to screen a marine-derived cellulase producing filamentous fungus and to investigate the yielding conditions and celluase activity. [ Method] A total of 25 marine-derived filamentous fungus were screened out of from Bohai Bay, and one producing cellulase was obtained through Congo red transparent circle method and cellulase activity assay. After that, optimum conditions were examined for cellulase producing and catalyzing. [ Result] CMC-Na could induce ZDTJ097-1-（7 ） strain to produce filter paper cellulase, CMC cellulase and 13-glucosidase. The optimum conditions for ZDTJ097-1-（7） to produce en- zymes were 0.5% CMC-Na, 0. 2% NH4NO3 , pH 6.0 at 25 ℃. [ Conclusion] This study provided reference for furfller development and utilization of cellulase produ-cing fungus ZDTJ097-1-（7）.

卡拉胶酶高产菌株YDK-6的筛选、产酶条件优化及酶学性质研究

从腐烂的角叉菜中筛选出卡拉胶酶高产菌株YDK-6,通过形态观察及16S rDNA序列分析对其进行鉴定,采用正交实验对其产酶条件进行了优化,并对其所产卡拉胶酶的酶学性质进行了研究。结果表明,菌株YDK-6为假单胞菌(Pseudomonas sp.);在葡萄糖加量为15 g·L^(-1)、酵母粉加量为10 g·L^(-1)、卡拉胶加量为2 g·L^(-1)、NaNO _(3)加量为2 g·L^(-1)、NaCl加量为15 g·L^(-1)、K _(2)HPO_( 4)加量为1.00 g·L^(-1)、MgSO_(4)加量为0.05 g·L^(-1)、FePO _( 4)加量为0.01 g·L^(-1)、CaCl_( 2)加量为0.01 g·L^(-1)、起始pH值为7.5的条件下,于28℃摇床培养72 h,所产卡拉胶酶的活力达到111.33 U·mL^(-1),是筛选培养条件下酶活的3.56倍;菌株YDK-6所产卡拉胶酶的最适反应pH值为8、最适反应温度为60℃,在30~70℃时,120 min内均能保持60%以上的酶活;Ca^(2+)、Mg^(2+)、Fe^(2+)、Mn^(2+)对菌株YDK-6所产卡拉胶酶活力有一定促进作用,其米氏常数为0.174 mg·mL^(-1)、最大反应速率为0.63 mg·mL^(-1)·min^(-1)。

枯草芽孢杆菌BS-05产纤维素酶条件的研究

以实验室筛选的枯草芽孢杆菌产纤维素酶菌株BS-05为出发菌株,对其产纤维素酶条件进行了研究。实验结果表明,菌株BS-05产纤维素酶的最佳条件是:以2%的CMC-Na为碳源,2%的蛋白胨和2%的酵母粉为氮源,产酶培养基初始pH为7,装液量为60mL/250mL,接种量5%,在37℃,150r/min下培养48h。在此条件下,该菌株产酶能力最强,羧甲基纤维素酶活力CMCA达195.46U/mL,滤纸酶活力FPA达174.52U/mL。

溴氰菊酯降解菌Pseudomonas sp.P1-1-B3产酶条件的优化

农药降解酶对去除农药残留污染具有良好的应用前景.从海洋沉积物中筛选到一株高产溴氰菊酯降解酶的菌株Pseudomonas sp.P1-1-B3,研究了碳源、氮源、pH值、培养温度、培养时间、接种量及溴氰菊酯对菌株产酶的影响.结果表明,降解菌产酶的最适条件为:以可溶性淀粉作为碳源,m(蛋白胨):m(酵母浸膏)=2:1为氮源,pH 7.5,温度30℃,培养时间2 d,接种量3%,溴氰菊酯含量15μmol/L.在此条件下,菌株产酶的比活力最大为113.3 U/mg.该降解酶对溴氰菊酯的降解,在12 h内降解率达54.6%.

纤维素降解菌CMC-4的分离鉴定、诱变和酶学特性研究

从秸秆还田土壤中初筛获得一株高效纤维素降解菌CMC-4,根据菌株形态、理化性质及16S rDNA序列分析,初步鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。以此为出发菌株,经亚硝酸钠诱变获得一株稳定高产纤维素酶突变株CMC-4-3。对CMC-4和CMC-4-3的产酶条件和酶学性质进行比较分析,结果表明:CMC-4-3纤维素酶活力较CMC-4提高67.5%;其最适产酶条件是:37℃、pH 6.0、葡萄糖为碳源、蛋白胨为氮源、接种量2.0%、装液量60 ml/250 ml。该菌株所产纤维素酶的最适反应pH为6.0,且在4.0~7.0酶活力较稳定;最适反应温度为50℃,在20~80℃范围内均保持稳定;金属离子Fe^(2+)、Mg^(2+)、Co^(2+)、K^+对酶有激活作用,其余离子均有不同程度抑制作用,而Cu^(2+)和Ca^(2+)抑制作用最强,酶活力减弱近50%,是该酶的强效抑制因子。诱变前后菌株产酶条件和酶学性质等部分表型发生了变化,而突变菌株显示出了更宽泛的环境适应范围。据此,获得一株高效产纤维素酶、耐受范围广的具纤维素降解能力的地衣芽孢杆菌,而CMC-4-3和CMC-4的表型可作为深入探讨基因型变化的线索。

从桑树根际土壤分离的产低温碱性纤维素酶菌株BJ-XH及酶的特性研究

碱性纤维素酶在洗涤、饲料、纺织和食品等领域具有较大的应用潜力。为获得产低温碱性纤维素酶的菌种,于冬季从桑树根际土壤中分离到16株纤维素酶产生菌,通过纤维素刚果红选择培养基分离及酶活性测定,筛选出1株能产酶活较高的纤维素酶的菌株BJ-XH,依据形态特征和生理生化特性初步认为该菌株为诺卡氏菌属(Nocardia)的放线菌。BJ-XH菌株的最佳产酶条件为:培养温度28℃,培养液pH 8.5,接种量6%,培养时间6～8 d。该菌株产生的纤维素酶主要为内切β-1,4葡聚糖酶(Cx酶),其酶活力可达5.6 IU/mL,酶最适催化温度为28℃,最适催化pH 9.0,属于低温碱性纤维素酶。此外,金属离子Fe3+、Mn2+和Co2+对该酶的活性有促进作用,Cu2+和Pb2+对酶的活性有抑制作用。研究结果表明,BJ-XH菌株是能生产低温碱性纤维素酶的菌株,具有进一步研究开发利用的潜力。

产β-半乳糖苷酶酵母菌株15D产酶条件研究

从马克斯克鲁维酵母的突变菌株中,获得了一株高产β-半乳糖苷酶的酵母菌株15D。本文对菌株15D的产酶条件及小型发酵培养实验进行研究,表明在适宜条件下菌株15D产酶水平可达287.8U/mL,比出发菌产酶水平提高了5倍。

耐高温α-淀粉酶产生菌产酶条件的研究

以一株高温淀粉酶产生菌为出发菌,经过单因素法和正交实验法确定优化培养条件为:玉米粉0.50g,黄豆粉1.00g,NaCl0.5g,蒸馏水100mL,pH10.0,接种量0.4%(v/v),装液量14%,50℃,180r/min摇床培养48h后,测定酶活达到32225.4BV,较初始酶活15812.0BV提高了103.8%。

一株降解β-胡萝卜素细菌的分离鉴定及产酶条件优化

从枸杞汁中分离得到一株降解β-胡萝卜素产香菌株GQ-16,根据形态特征及分子生物学分析初步鉴定菌株GQ-16为库特氏菌(Kurthia sp.)。采用单一成分缺失法研究确定了该菌的必需营养素与β-胡萝卜素降解最佳条件,并利用顶空固相微萃取及气相色谱-质谱联用(GC-MS)法,分析测定了该菌降解β-胡萝卜素的产物成分。结果表明,酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Try)、亮氨酸(Leu)、苏氨酸(Thr)和FeSO_4·7H_2O等物质是菌株GQ-16菌体生长的必需营养素,该菌降解β-胡萝卜素产物中主要香气物质为β-环柠檬醛和β-紫罗兰酮。

日本纳豆中β-葡萄糖苷酶高产菌的筛选及产酶条件研究

目的:为大豆异黄酮的酶法制备筛选新的β-葡萄糖苷酶高产菌。方法:应用微生物研究常规方法在日本纳豆中筛选出一株高产β-葡萄糖苷酶的菌株,并对其的产酶条件进行了研究。结果:该菌种经菌落形态、革兰氏染色、生化试验以及16s rRNA测序鉴定为枯草芽孢杆菌,其最适发酵条件为:2%的葡萄糖;2%的大豆蛋白胨;有Ca十、Mg十存在;pH在7.0至7.5之间;温度35～37℃,往复式摇床培养48h。在此条件下,其最高酶活可达158IU/mL。结论:随着大豆异黄酮研究工作的不断深入,大豆异黄酮将显现出越来越多的研究空间和应用价值。

产蛋白酶波茨坦短芽孢杆菌的鉴定及产酶条件优化

该研究旨在提高一株环境分离菌株的产酶效率,为后续菌株及其蛋白酶的应用提供前期实验基础。通过水解圈法初步检测菌株S8的产蛋白酶能力,并通过16S rRNA序列比对确认其为波茨坦短芽孢杆菌。通过单因素试验确定了最佳培养条件和培养基添加成分。并采用Plackett-Burman设计和最陡爬坡试验对培养条件和培养基进行响应面优化。优化结果显示,在发酵时间为38.70 h、菌液接种量为1.84%(V/V)、发酵温度为35℃、酵母粉添加量为23.70 g/L、胰蛋白胨添加量为11.70 g/L、MgSO4添加量为20.20 g/L的条件下,菌株的产酶活力可达到114.79 U/mL,相比优化前提升了209.70%。研究结果为该菌株的后续发酵应用提供了科学数据。

四种微生物产L-天冬酰胺酶及其发酵条件初探

L-天冬酰胺酶即L-天冬酰胺基水解酶,对白血病和淋巴瘤有很好的抑制作用。从发酵pH值、发酵温度以及添加葡萄糖等方面对L-天冬酰胺酶的发酵条件进行了探讨。结果发现,大肠杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌4种微生物中产酶最好的为大肠杆菌,大肠杆菌在pH值为7.0、温度为37℃条件下发酵产L-天冬酰胺酶效果最好,牛肉膏蛋白胨培养基以不加葡萄糖为宜。

烟曲霉A-16产纤维素酶工艺优化及酶学特性

分离筛选高效降解稻草的菌株,研究菌株产纤维素酶工艺条件及酶学性质。采用刚果红染色法从腐败木质下的土壤中分离筛选到一株产纤维素酶菌株,结合菌株的形态特征和18S rDNA序列同源性比较进行鉴定;通过单因素试验和响应面分析法确定菌株最适产酶条件,并对纤维素酶的稳定性进行研究。分离纯化得到的菌株命名为烟曲霉(Aspergillus fumigatus A-16);响应面实验结果表明,最优产纤维素酶工艺参数为:稻草粉添加量7 g/100 mL,pH 6.0,温度65℃,发酵时间5 d;在此最优条件下,该菌产生的羧甲基纤维素酶(CMCase)和滤纸酶(FPA)活力分别为2 954.76 U/mL和1 086.37 U/mL;其总活力较优化前提高了26.4%。该纤维素酶的适宜反应温度为70℃,适宜pH 6.0。在80℃热处理90 min条件下酶活力可保持在80%以上,说明该酶热稳定性较好。同时,在pH 5.0-7.0范围内比较稳定,放置1 d后可保持70%以上的酶活力。该研究可为利用富含纤维素的生物质原料开发洁净能源及食品级葡萄糖资源提供了基础支撑。

南极海冰细菌中产低温 α-淀粉酶菌株的发酵和酶学特性的初步研究

从147株南极海冰细菌中筛选出一株高产低温a-淀粉酶的菌株Pseudoalteromonas sp.AN175。生长发酵单因素试验表明,菌株AN175在1%麦芽糖、0.5%酵母粉、0.01%磷酸铁、0.5%氯化钙、1%可溶性淀粉、5%NaCl、pH 6.0的培养基,10℃,30%装液量,130 r/min条件下振荡培养9 d可达到最大酶活132.5 U/mL,为优化前的2倍多。生长和产酶试验表明,该菌生长较常温菌缓慢,酶分泌时间滞后。粗酶特性研究显示,该酶催化的最适条件为温度30℃,pH值8.0。

一株产α-淀粉酶嗜热菌的分离鉴定及其产酶条件的优化

从江西省宜春市温汤镇温泉水域中筛选出35株产α-淀粉酶嗜热菌株,选取一株产α-淀粉酶活力较高的嗜热菌YC-15为出发菌株,对其进行16S rRNA基因序列分析。结果表明,YC-15与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的16S rRNA序列相似性达98%,结合其形态、生理生化特征,进一步证明了YC-15在分类上应归属枯草芽孢杆菌。并对YC-15产酶条件进行了研究,其最佳碳源为2%可溶性淀粉,最佳氮源为0.5%酵母膏+0.5%蛋白胨,最适产酶初始pH为7.0,最适产酶温度55℃,属中性嗜热产α-淀粉酶菌。

纤维素分解复合菌系St-13的筛选及产酶条件的研究

从腐烂的枯枝落叶中分离到一组分解能力较强的纤维素分解复合菌系St-13,该复合菌系由平板可分离的细菌和难培养细菌组成。5d内可使滤纸完全崩溃,液体培养到14d时能够分解玉米秸秆中85.27%的纤维素,总失重率为58.03%。通过正交优化试验,确定该复合菌系的产酶最佳条件为:2%微晶纤维素,1.5%NaNO3,初始pH7.0,温度32℃;摇床培养48h时其CMCase为0.455IU/mL。

β-葡聚糖酶高产菌株的选育及发酵条件的研究

从土样中筛选到一株产β－聚精酶的曲霉ＦＳ６８野生菌株，经ＵＶ，ＮＴＧ等五代诱变，获得变株ＦＳＵＮ－５１。对该菌株产酶条件优化实验结果表明：最佳培养基配方（％）：大麦粉５，黄豆饼粉 ２， ＦｅＳＯ_４· ７Ｈ_２Ｏ ０． ０１， Ｎａ_２ＨＰＯ_４ ０． １， ＣａＣＯ_３ ０． ５， ＭｇＳＯ_４ ０． ０３， ＮａＮＯ_３ ０． ４；最适的发酵条件为产酶ｐＨ为６．５，温度为３１℃，在２５０ｍｌ三角瓶中装量为２５ｍｌ，发酵周期为７２ｈ，摇瓶相对酶活比野生菌株提高６９％。

链霉菌RX-17溶菌酶的产生条件及溶菌特异性研究

通过液体及平板溶菌活性测定 ,证明了灰色链霉菌 (Streptomycesgriseus)RX 17发酵液中存在对变链球菌 (Streptococcusmutans)Ingbritt有强力溶解作用的物质—RX 17溶菌酶。产酶培养基碳、氮源最适配比为蔗糖3 %、大豆蛋白胨 1.2 5%、牛肉膏 0 .2 % ;最适产酶温度为 3 3℃ ;高溶氧水平对酶的产生有利。溶菌特异性试验证实了RX 17溶菌酶对金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)、乳脂链球菌 (S .cremoris)、保加利亚乳杆菌 (Lactoba cillusbulgaricus)、短乳杆菌 (L .brevis)、产氨短杆菌 (Brevibacteriumammoniagenes)及铜绿假单胞菌 (Pseudomonasaeruginosa)等多种G+ 、G-

紫外线诱变选育高产豆豉纤溶酶菌株及其产酶条件优化

该研究以分离自豆豉样品中产豆豉纤溶酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)DC-1为出发菌株,采用紫外线诱变选育高产豆豉纤溶酶且稳定遗传的菌株,并以豆豉纤溶酶活力为评价指标,通过单因素试验及正交试验对其发酵条件进行优化。结果表明,筛选出一株高产豆豉纤溶酶活力且稳定遗传的诱变菌株DC-V5,其最优发酵条件为:接种量3%、装液量70 mL/250 mL、发酵温度34℃、初始pH 6.5。在此优化发酵条件下,诱变菌株DC-V5产豆豉纤溶酶活力最高达到(451.26±11.09)IU/mL,是优化前出发菌株DC-1的1.74倍。

用于烟叶提质的苏云金芽孢杆菌SY-1产淀粉酶条件的优化研究

为了提高苏云金芽孢杆菌SY-1菌株淀粉酶活性,提升烟叶生物酶发酵过程中淀粉降解效率,从而提高烟叶品质,以淀粉酶活性为指标,对SY-1菌株产酶培养基及发酵条件进行单因素及响应面试验优化。结果显示,SY-1菌株产淀粉酶的最优培养基及发酵条件:可溶性淀粉+玉米淀粉(m_(可溶性淀粉)∶m_(玉米淀粉)=1∶1)15.69 g/L,蛋白胨+酵母粉(m_(蛋白胨):m_(酵母粉)=1∶1)16.87 g/L,CaCl_(2)5.91 g/L;温度36.83℃、转速189.71 r/min。酶活性为223.45 U/mL,与优化前相比提高92.55%。利用优化后SY-1酶液处理烟叶,淀粉降解率达40.68%。与优化前酶液处理相比,淀粉降解率提高23.80个百分点,优化后酶液处理烟叶中水溶性总糖和还原糖含量分别增加5.91%和7.84%,总氮和烟碱含量分别下降4.23%和2.84%,两糖差降低,糖碱比提高,有利于提高烟叶吃味品质。