电针百会和大椎穴对癫痫大鼠海马CA3和DG区ephrinA5表达的影响

目的探讨电针百会和大椎穴对颞叶癫痫大鼠海马组织中CA3和DG区ephrin A5的调控作用。方法将30只SpragueDawley(SD)大鼠随机分为对照组、癫痫组和电针+癫痫组,每组各10只。建立氯化锂―匹罗卡品颞叶癫痫大鼠模型。造模成功的大鼠电针百会和大椎穴治疗8周后,分别取3组大鼠海马组织,采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测各组大鼠海马CA3和DG区ephrin A5 m RNA水平表达变化;采用Western blotting和免疫组织化学(免疫组化)法检测各组大鼠海马CA3和DG区ephrin A5蛋白水平表达变化。结果 q RT-PCR结果显示:与对照组相比,癫痫组大鼠海马组织中ephrin A5 m RNA表达下调(P <0.05)。通过8周电针百会和大椎穴连续治疗后,ephrin A5 m RNA水平上调(P <0.05)。Western blotting结果显示:ephrin A5蛋白水平变化趋势与m RNA水平相一致。免疫组化结果显示:在CA3区,癫痫组ephrin A5蛋白水平下调;电针后ephrin A5蛋白水平上调。而在DG区与对照组相比,癫痫组和电针+癫痫组,ephrin A5蛋白水平变化不明显。结论电针百会和大椎穴的抗癫痫作用机制很可能与ephrin A5在海马CA3区中的调控机制密切相关。

EphA5/ephrinA5在癫癎大鼠海马CA3区的表达变化及作用

探讨EphA5及其配体ephrinA5在癫癎大鼠模型海马内表达变化及其在颞叶癫癎发病中的作用。方法将240只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组(n=120)和癫癎组(n=120),建立氯化锂-匹罗卡品颞叶癫癎大鼠模型。致癎后分别选取12 h、24 h、7 d、15 d、30 d和60 d 6个时间点为亚组(n=20),采用原位杂交法检测各亚组大鼠海马CA3区和齿状回(DG)ephrinA5 m RNA表达水平(n=9);采用免疫组化法检测各亚组大鼠海马CA3区和DG EphA5蛋白的表达水平(n=9);采用Neo-Timm银染法观察各亚组大鼠海马CA3区的苔藓纤维出芽情况(n=2)。结果原位杂交结果显示:ephrinA5 m RNA在海马CA3区可见表达,但在DG无表达;与同时间点对照组相比,致癎后7 d、15 d,癫癎组大鼠海马CA3区ephrinA5 m RNA表达明显下调(P<0.05),在致癎后30 d、60 d,癫癎组大鼠海马CA3区ephrinA5 m RNA表达逐渐上调(P<0.05),且与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化结果显示:EphA5蛋白在大鼠海马CA3区及DG区均有表达,其水平变化趋势与ephrinA5 m RNA相一致。Neo-Timm银染法结果显示:致癎后7 d、15 d,癫癎组大鼠海马CA3区存在明显苔藓纤维出芽。结论配体ephrinA5协同受体EphA5在海马CA3区的表达下调,可能共同参与了CA3区的苔藓纤维出芽作用机制,并与癫癎的发生、发展关系密切。