手性高效液相色谱法测定板蓝根中表告依春和告依春含量

采用Chiralpak IC手性柱(250mm×4.6mm,5μm),建立了正相高效液相色谱测定板蓝根中表告依春(R-告依春)和告依春(S-告依春)含量的方法。考察了流动相组成、流速和柱温对分离度的影响。经优化后的实验条件:以正己烷-异丙醇(体积比为90∶10)为流动相,流速为0.8mL/min;检测波长为245nm,柱温为20℃。在此优化条件下,表告依春和告依春分离度为3.4,检出限为2.0mg/L,在0.02～2.0g/L范围内有良好的线性关系,平均回收率为101%,相对标准偏差(RSD)小于3.0%(n=6)。本方法可将具有抗病毒活性的表告依春与其对映体告依春基线分离并测定,专属性强,能有效控制板蓝根的质量。

HPLC测定板蓝根药材及其制剂中表告依春的含量

目的：建立HPLC测定板蓝根药材及其制剂中表告依春含量的方法，为板蓝根药材及其制剂的质量控制提供依据。方法：采用反相高效液相色谱法，色谱柱为ZORBAXSB-C18（4．6mm×150mm，5μm）；流动相乙腈-水-磷酸-三乙胺（8．50：90．72：0．73：0．05）；流速0．7mL·min^-1；检测波长245nm，柱温30℃。结果：表告依春含量测定的线性范围0．0204～0．3060μg（r=0．9998），平均加样回收率98．99％，RSD1．31％。结论：建立了高效液相色谱法测定板蓝根药材及其制剂中表告依春含量的方法，该方法准确、可靠，可用于板蓝根药材及其制剂的质量评价。

干燥方法对板蓝根药材中表告依春和尿苷含量的影响

目的：研究不同干燥方法对板蓝根中表告依春和尿苷含量的影响,为建立适合板蓝根产地加工的干燥方法提供参考。方法：将新采挖的鲜板蓝根随机等份分为12组,分别采用不同温度下的鼓风烘干与远红外线烘干、晾晒、阴干4种方式进行干燥,以高效液相色谱法同时测定表告依春和尿苷含量。结果：各组板蓝根表告依春含量为3.847-5.204 mg/g,尿苷含量为0.701-1.028 mg/g,2种有效成分均在鼓风烘干组样品中含量最高。结论：在该研究考察范围内,建立了板蓝根的最佳干燥方法为55℃鼓风烘干法,对板蓝根的加工生产具有一定的指导意义。

RP-HPLC法测定板蓝根药材中腺苷和表告依春的含量

目的:建立板蓝根药材中腺苷和表告依春含量的高效液相色谱测定方法。方法:Lichrocorb-C_(18)柱(250 mmn×4.6 mm,5μm);柱温:40 ℃;流动相:甲醇-水(15:85);流速:1.0 mL·min^(-1);检测波长:245 nn。结果:精密度和稳定性均良好;腺苷在进样量6.46～646 ng间呈现良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率为97.4%,RSD为1.0%;表告依春在进样量6.01～601ng间呈现良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率为99.0%,RSD为1.9%。结论:该法简便快速,结果准确,重复性好,可作为板蓝根药材的质量控制方法。

不同产地及干燥方式板蓝根中4种活性成分含量比较分析

目的：建立板蓝根中表告依春、腺苷、靛蓝和靛玉红含量测定的方法。方法：采用Agilent 5 TC-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,甲醇-水为流动相梯度洗脱,流速为1 m L·min-1;双波长切换时间序列采样：0~20 min为254 nm,20~40 min为285 nm;柱温30℃。结果：在上述色谱条件下,测得表告依春,腺苷,靛蓝,靛玉红的线性范围分别为0.100~0.600μg（r=0.9998）,0.122~0.732μg（r=0.9998）,0.024~0.144μg（r=0.9998）,0.004~0.024μg（r=0.9998）与峰面积呈良好的线性关系。结论：各产地中四种成分均有显著性差异,表告依春和腺苷的含量相对靛玉红、靛蓝较高;不同干燥方式对四种成分的影响较大,尤其不适合高温干燥。该含量测定的方法简单、准确、重复性良好,可为板蓝根药材的质量控制提供一定的依据。

高效液相色谱法测定板蓝根颗粒中(R,S)-告依春的含量

目的建立高效液相色谱（HPLC）法测定板蓝根颗粒中（R，s）-告依春的含量并讨论含量限度。方法色谱柱为SHIMADZUVP—ODS柱（150mmx4．6mm，5m），流动相为甲醇-0．02％磷酸溶液（7：93），流速1．0mL·min-1，检测波长为245nm，自动进样器进样，进样量10μL-1分别依照转移率、测定结果统计数据讨论含量限度。结果（R，S）-告依春在0-0587～150．3495μg·mL-1质量浓度范围内线性关系良好（r=0．9997，n=7），低、中、高加入量平均回收率分别为98．72％，98．40％，98．60％，RSD分别为1．84％，0．50％，1．82％。依照转移率、测定结果统计数据确定含量限度存在问题。结论该法操作方便、结果准确，精密度好，专属性强，可用于板蓝根颗粒的质量控制；（R，S）-告依春的含量限度应依据药动学和药效学数据确定。

采收期对河西走廊产板蓝根产量和品质的影响

目的:研究不同采收期板蓝根产量和检测成分(R,S)-告依春含量变化,确定河西走廊民乐县栽培板蓝根的最佳采收期。方法:采用单因素试验,设置9月1日、9月11日、9月21日、10月2日、10月12日、10月22日、11月2日、11月12日和11月22日9个采收时期,室内测定板蓝根药材产量,高效液相色谱法测定(R,S)-告依春含量,比较各时期差异。结果:板蓝根根干重随生长天数呈现"S"型曲线变化趋势,符合Logistic生长模型,方程为y=11.606/(1+e^(3.385-0.0301x))(R^2=0.9506,P<0.01);9月产量最低,单株产量仅5.2~6.759 g,11月产量最高,单株产量达9.79~9.96 g;(R,S)-告依春含量10月12日最低,为0.008%,11月12日最高,达0.083%,并显著高于其他采收期;综合产量和(R,S)-告依春含量最佳采收期应为11月10~18日。结论:民乐县板蓝根的最佳采收期为11月中旬。

不同采收期板蓝根核苷类及(R,S)-告依春含量变化研究

目的考察不同采收期板蓝根药材中核苷类及(R,S)-告依春含量的动态变化规律,确定板蓝根最佳采收期。方法建立板蓝根5种核苷和(R,S)-告依春HPLC-DAD同步测定方法,测定板蓝根药材中核苷类及(R,S)-告依春的含量。结果板蓝根药材中总核苷类成分成峰谷变化,(R,S)-告依春以8月初采集的药材含量最低,10月初采集的药材含量最高。结论如以核苷类和(R,S)-告依春作为板蓝根药材质量的指标性成分,则板蓝根药材最佳采收期应为10月初采集,该结果为板蓝根药材采收期的确定和质量评价提供一定的科学依据。

一测多评法同时测定板蓝根中4种核苷及(R,S)-告依春

目的建立同时测定板蓝根中4种核苷(腺苷、胞苷、尿苷、鸟苷)及(R,S)-告依春的HPLC-DAD定量检测方法。方法板蓝根水提取,采用Agilent 1260、Agilent 1100、Waters 2695-2996高效液相色谱仪,流动相为水-甲醇,梯度洗脱。以腺苷、胞苷和尿苷为参照成分计算色谱峰之间的相对校正因子,再与外标法比较。结果 33批板蓝根药材中5种成分相对校正因子在3种仪器检测的耐用性良好。计算值与实测值(外标法)相对误差<5%。结论本研究建立了准确、快速且耐用性良好的板蓝根中5种活性成分同时测定的"一测多评"方法,但本方法得到的相对校正因子受检测波长变化影响较大,5种活性成分同时测定的波长宜为254 nm。

板蓝根中的抗病毒活性成分

目的:寻找板蓝根中的主要抗病毒成分。方法:利用色谱法和结晶法对成分进行分离,鸡胚法为抗病毒活性检验法。结果:分离得到3个化合物,2,4(1H,3H)喹唑二酮(Ⅰ)、表告依春(Ⅱ)、靛玉红(Ⅲ),其中Ⅱ显示出较强抗病毒活性。结论:表告依春为板蓝根抗流感病毒的主要有效成分之一。

追施氮肥量对菘蓝根的外形品质、干物质积累及活性成分含量的影响

采用田间小区试验,设5个处理,氮肥用量分别为225、450、675、900、1125 kg/hm2,每一个处理3个重复小区,研究不同追施氮肥量对菘蓝的光合参数、根的外形品质、干物质积累及活性成分含量的影响,探讨氮肥施用量对菘蓝植株地上部和地下部生长的生理影响,优选菘蓝最佳追施氮肥量。结果表明,追施氮肥有利于提高菘蓝叶片的净光合速率、气孔导度、胞间CO2浓度、蒸腾速率,可以显著增加菘蓝根主根直径和根长,有明显的壮根效应;而菘蓝总鲜重随着施氮量提高而增加,但超过900 kg/hm2后就不再增加;在450 kg/hm2下菘蓝根侧根数最少,低氮(225 kg/hm2)和高氮(900、1125 kg/hm2)水平下菘蓝根侧根数增加过多,影响了菘蓝根药材外形品质;随着施氮量增加,地上部和地下部干物质积累先增加后下降,而根冠比不断下降,氮肥量为675 kg/hm2时地上部干物质积累最大,氮肥量为900 kg/hm2的地下部干物质积累最大,追施氮肥对地上部的促进效应明显高于地下部。施氮量增加,多糖含量先增加后下降,施氮量为675 kg/hm2时菘蓝根中多糖含量最高为158.383 mg/g,而(R,S)-告依春含量没有明显的变化规律,氮肥量为900 kg/hm2时含量最高达到0.5655 mg/g。为保证菘蓝根产量和药用品质适宜的追施氮肥量是675 900 kg/hm2。

不同施氮水平对盐胁迫下苗期菘蓝生理特性及根中(R,S)-告依春含量的影响

为探讨不同施氮水平培养下菘蓝幼苗对盐胁迫的响应,以河北栽培的菘蓝居群为材料,在3.75(T1)、7.5(T2)、11.25(CK)、15(T3)、18.75 mmol·L-1(T4)5个不同的施氮水平下,以100 mmol·L-1Na Cl进行胁迫处理,研究了施氮水平对盐胁迫下苗期菘蓝生长、抗氧化酶系统、可溶性蛋白质含量、氮素代谢及根中指标性成分(R,S)-告依春积累的影响。结果表明,高氮水平的T4(18.75 mmol·L-1)显著促进盐胁迫下菘蓝幼苗的生长。低氮(T1、T2)和高氮(T3、T4)处理均提高了盐胁迫下菘蓝幼苗中保护酶的活性,且高氮水平处理显著降低幼苗中丙二醛(MDA)的含量。在盐胁迫下,随着施氮水平的增加,菘蓝体内硝酸还原酶(NR)活性、谷氨酰胺合成酶(GS)活性,可溶性蛋白质及根中(R,S)-告依春含量均呈先升高后降低的趋势。盐胁迫条件下,不同施氮水平对苗期菘蓝体内抗氧化酶与氮素同化关键酶之间、生物量与(R,S)-告依春含量之间的调控表现出差异性。本研究结果为苗期菘蓝的耐盐性生理研究提供了理论依据。

氮营养对菘蓝生长及活性成分积累的影响

为探讨氮营养对菘蓝生长及活性成分积累动态的影响,采用盆栽试验,在菘蓝营养生长前期和后期分别施用不同次数的氮素组合A[7.5 mmol·L-1的(NH4)2SO4,2.5 mmol·L-1的KNO3,5.0 mmol·L-1的CO(NH2)2]和组合B[2.5 mmol·L-1的(NH4)2SO4、5.0 mmol·L-1的KNO3、10.0 mmol·L-1的CO(NH2)2],分别记作T1~T9,测定了各处理的叶绿素含量、光合参数、生长指标和活性成分含量。结果表明,2个氮素组合施用不同次数后,叶绿素、叶干重与根干重随时间逐渐增加,叶片的净光合速率与叶的靛蓝、靛玉红和根的(R,S)-告依春含量随时间延长的变化规律不明显。在采样后期T3的主根直径、T1的根干重、T7的叶干重、T4的根(R,S)-告依春含量、T2的叶靛蓝含量与T3的叶靛玉红含量为各处理间最大。结合菘蓝根、叶干重及其叶内指标成分靛玉红含量、根内(R,S)-告依春含量,为了获得高产优质的板蓝根药材,建议前期施用1次氮素组合A,后期施1次氮素组合B;为了获得高产优质的大青叶药材,建议菘蓝生长前期施3次氮素组合A,后期施1次氮素组合B。本研究结果为菘蓝合理施用氮肥提供了理论依据。

HPLC法测定双根口服液中(R,S)-告依春的含量

目的建立HPLC法测定双根口服液中（R，S）-告依春的含量。方法色谱柱为SHIMADZUVP—ODS色谱柱（150mm×4．6mm，5μm），流动相为甲醇-0．025％磷酸溶液（7：93），流速为1．0ml·min^-1，检测波长为245rim，柱温为30℃；自动进样器进样，进样量10μl。结果（R，S）-告依春在1．8794～60．1398μg·ml^-1浓度范围内线性关系良好（r=0．9999，n=6），平均回收率为98．92％，RSD为1．02％（n=9），并依据试验数据，讨论了（R，S）-告依春的含量限度。结论本法操作方便、结果准确，精密度好，专属性强，可用于双根口服液的质量控制。

高效液相色谱法测定板山岗颗粒中(R,S)-告依春含量

目的建立测定板山岗颗粒中(R,S)-告依春含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法色谱柱为Kromasil 100-5 C18柱(250 mm×4. 6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(12∶88,V/V),流速为1. 0 m L/min,检测波长为244 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。结果(R,S)-告依春进样量在0. 04~0. 32μg范围内与峰面积积分值线性关系良好;精密度、稳定性、重复性试验的RSD值均小于2%;平均加样回收率为97. 96%,RSD为1. 63%(n=9)。结论该方法操作简便、准确,精密度、稳定性、重复性均良好,可用于板山岗颗粒中(R,S)-告依春含量的测定。

不同品种类型菘蓝根中表告依春累积规律研究

目的:研究不同品种类型菘蓝根中表告依春的分布,为筛选优质菘蓝品种提供科学依据。方法:HPLC测定白菜叶型、甘蓝叶型、芥菜叶型与四倍体4个品种类型菘蓝主根与侧根中表告依春的含量,并比较了菘蓝根中木部与皮部表告依春含量的差异。结果:不同品种类型菘蓝主根与侧根中表告依春含量差异显著,4个品种类型菘蓝侧根中表告依春含量均高于主根;不同品种类型菘蓝木部与皮部表告依春含量差异显著,4个品种类型菘蓝皮部表告依春含量均高于木部。结论:菘蓝侧根中表告依春含量高于主根,且表告依春主要分布于皮部。

HPLC-DAD法测定板蓝根药材及其制剂中主要抗病毒生物碱含量

目的:利用HPLC-DAD测定板蓝根药材及其制剂中表告依春(Epigoitrin)和2,4(1H,3H)喹唑二酮(2,4(1H,3H)-quinazolinedione)的含量。方法:ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈-(0.1%磷酸+0.03%三乙胺)水溶液=12∶88;流速为0.7 mL/min;检测波长为224 nm,柱温为30℃。结果:表告依春在0.040 9μg^1.103 8μg,2,4(1H,3H)喹唑二酮在0.010 6μg^0.169 6μg与峰面积呈良好的线性关系,回收率分别为98.44%,RSD为1.43%;98.67%,RSD为1.65%。结论:本方法能够很好地测定板蓝根药材及其制剂中主要抗病毒类生物碱表告依春、2,4(1H,3H)喹唑二酮的含量,可用于板蓝根药材及其制剂的质量控制。

大孔树脂对板蓝根中表告依春的纯化工艺研究

[目的]优选板蓝根中表告依春的最佳纯化工艺。[方法]以吸附率和解吸率为指标,利用静态吸附试验对6种大孔树脂进行筛选,并通过静态吸附和动态吸附的单因素影响试验,优选树脂的最佳分离纯化条件。[结果]ADS-7大孔树脂的分离纯化效果最好,其最佳纯化条件为:样品浓度为8.00 mg/ml,温度为45℃,pH值为9.0,洗脱液为浓度40%的乙醇溶液;动态吸附流速为1.5 BV/h,动态洗脱流速为2.0 BV/h,洗脱液用量为4.0 BV。[结论]该方法简便、可靠,可用于板蓝根中表告依春的纯化。

HPLC法同时测定复方板蓝根颗粒中的尿苷、腺苷和表告依春的含量

目的建立复方板蓝根颗粒中尿苷、腺苷和表告依春的含量测定方法。方法采用Aglient XDB-C18分析柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为：甲醇-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱,柱温为室温;流速0.7 m l/m in,检测波长254 mm;进样量20μl。结果尿苷、腺苷和表告依春分别在0.093 7~2.811 0μg（r=1.000）、0.060 9~1.827 0μg（r=1.000）、0.117 3~3.519 0μg（r=1.000）的范围内与峰面积呈良好的线性关系。加样回收率试验中尿苷、腺苷和表告依春的平均回收率分别为98.6%、99.6%、101.1%,RSD分别为0.6%、0.6%、0.8%。结论采用HPLC法同时测定复方板蓝根颗粒中的尿苷、腺苷和表告依春3种成分的含量,方法简便、快速,准确。

板蓝根药材及其制剂中告依春稳定性研究

目的考察板蓝根药材及其制剂中告依春的稳定性,为板蓝根及其制剂的质量控制提供依据。方法色谱柱为Aglient TC-C18(2)柱,流动相为乙腈-0.02%磷酸溶液(9∶91),流速1mL/min,检测波长245nm,柱温30℃。结果告依春在8-96μg范围内(r=1.0000)线性关系良好。结论告依春在(40±2)℃,相对湿度(75±5)%时,稳定性差。