Bioactive Study on Mixtures of Epimedin C and Icariin Monomers with Invariant Molarity to Zebrafish Osteoporosis Model

Objective To evaluate the anti-osteoporosis effect of the mixtures of epimedin C and icariin monomers with invariant molarity on zebrafish osteoporosis model. Methods The zebrafishes, fertilized 4 d ago, were exposed in 11 groups of nutrient solutions with prednisolone （25 μmol/L） as well as epimedin C and icariin （15 μmol/L） of various contents. The ratio of epimedin C and icariin in the 11 groups were as follows： A （10：0）, B （9：1）, C （8：2）, D （7：3）, E （6：4）, F （5：5）, G （4：6）, H （3：7）, I （2：8）, J （1：9）, and K （0：10）. Meanwhile, a negative control group with prednisolone （25μmol/L） was prepare as S. The selected zebrafish fetus was put into the 24-hole culture plate, and ensure every 5 zebrafishes in 1 hole and 2 holes as a group. They were placed in incubator at 28.5 oC, and the daily changes of fluid were investigated until they were put to death on day 8 and then fixed. After dyeing with alizarin red, the segmental venter of zebrafish skulls was observed and quantitative analysis of dyed area was conducted. Results Compared with the negative control group S, the integrated optical density （IOD） values of cranial dyed area in all groups increased significantly （P 〈 0.05）; Compared with group S, the IOD value of cranial dyed area in mixtures of epimedium monomers increased significantly （P 〈 0.05）. The mixtures of epimedium monomers were all effective in facilitating zebrafish cranial mineralization and preventing prednisolone from inducing osteoporosis. According to mixtures of A-K groups, zebrafish cranial mineralization gradually decreased with gradually reduced content of epimedin C, with significant difference among groups （P〈 0.05）. Conclusion The higher the content of epimedin C in mixtures with invariant molarity is, the more active the anti-osteoporosis effect of epimedinC to zebrafish osteoporosis model is.

α-L-鼠李糖苷酶水解朝藿定C制备淫羊藿苷工艺研究

目的研究α-L-鼠李糖苷酶水解朝藿定C制备淫羊藿苷工艺。方法以缓冲液种类、pH值、温度、底物与酶用量比例、反应时间、底物质量浓度为影响因素,朝藿定C转化率、淫羊藿苷得率为评价指标,单因素试验优化制备工艺。再进行放大试验,柱色谱分离得到酶解产物,^(1)H-NMR、^(13)C-NMR对产物进行鉴定。结果最佳条件为磷酸盐缓冲液,pH值4.5,温度50℃,底物与酶用量比例1∶2,反应时间72 h,底物质量浓度2 mg/mL,朝藿定C转化率为88.68%,淫羊藿苷得率为92.65%。在底物质量浓度2 mg/mL、反应体系200 mL条件下,朝藿定C转化率均在88%以上,淫羊藿苷产率均在90%以上,而且几乎无副产物生成。结论该方法反应条件温和,底物质量浓度高,成本低,简便可靠,可为淫羊藿资源综合开发利用、淫羊藿苷绿色工业化生产提供基础。

巫山淫羊藿资源、人工种植及活性成分转化应用研究进展

巫山淫羊藿是《中华人民共和国药典》规定的淫羊藿属植物5个品种之一,其用药历史悠久、药效显著、活性成分含量高、种植面积大,是当前主流品种之一。但现代分析发现巫山淫羊藿的淫羊藿苷含量低,达不到《中华人民共和国药典》规定量,而被单列,致使其开发应用受限、种植面积有所缩减。综述我国巫山淫羊藿资源状况、形态与生长特征、人工种植、主要活性物质种类与功效及其转化、加工制备等新近研究文献,为促进巫山淫羊藿人工种植、加大其加工制备及其产品开发应用产业化提供参考。

高效液相色谱法测定淫羊藿中淫羊藿定C和淫羊藿苷的含量

目的 :测定不同种和不同产地的淫羊藿中淫羊藿定C和淫羊藿苷的含量 ,探讨淫羊藿药材的质量控制方法。方法 :色谱柱为HypersilBDS C18(4mm× 2 50mm ,5μm ) ,以乙腈 0 .0 5%磷酸作为梯度洗脱流动相 ,G 13 15A光电二极管阵列检测器 ,检测波长 2 72nm。结果 :淫羊藿定C和淫羊藿苷平均回收率分别为 99.7% ,10 2 .5% ,RSD分别为 1.5% ,1.1%。结论 :本方法快速 ,重现性和稳定性好 。

HPLC法同时测定淫羊藿中朝藿定A、B、C与淫羊藿苷的含量

建立了同时测定淫羊藿中朝藿定A、B、C与淫羊藿苷含量的高效液相色谱方法.淫羊藿样品经超声波提取,以50%（ψ）乙醇溶液为溶剂,在温度50℃、料液比1∶60条件下超声波提取30 min,共提取2次.色谱条件：ZORBAX SB-C8色谱柱（5 μm,4.6×250 mm）;流动相A为乙腈,B为1%乙酸溶液;梯度洗脱;紫外检测波长为270 nm.上述4种类黄酮的标准曲线在6.6～33.0 mg/L（朝藿定A、淫羊藿苷）或6.6～55.0mg/L（朝藿定B、C）范围内呈良好的线性关系（r＞0.99）;加标回收率在97%～102%之间;相对标准偏差小于2%（n=5）.测得不同产地心叶淫羊藿叶片中4种类黄酮的质量分数差异较大;朝藿定A广泛分布于淫羊藿属中.本方法在淫羊藿药材质量控制中具有一定的参考价值.

淫羊藿总黄酮提取物的HPLC指纹图谱建立及其中8种成分的含量测定

目的:建立淫羊藿总黄酮提取物的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并建立同时测定其中8种成分含量的方法。方法:采用HPLC法。色谱柱为ZORBAX Eclispse SB-C_(18),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为270nm,进样量为5μL。以淫羊藿苷峰为参照峰,绘制5批样品的HPLC指纹图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004 A版)》进行相似度评价,确定共有峰。结果:5批样品的HPLC图谱中有22个共有峰,相似度均大于0.99,并指认淫羊藿属苷A、朝藿定A1、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ、宝藿苷Ⅰ等8个共有峰。上述8种成分进样量线性范围分别为0.019 5～0.292 5μg(r=0.999 9)、0.028 2～0.423 0μg(r=0.999 6)、0.050 5～0.757 5μg(r=0.999 9)、0.066 9～1.003 5μg(r=0.999 9)、0.089 6～1.344 0μg(r=0.999 9)、0.16～2.40μg(r=0.999 9)、0.026 8～0.402 0μg(r=0.999 8)、0.027 24～0.408 60μg(r=0.999 8);定量限分别为390.00、564.00、506.00、535.20、448.00、426.68、643.20、544.80 ng/mL,检测限分别为97.50、141.00、126.25、133.80、112.00、106.67、160.80、136.20 ng/mL;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于3%;加样回收率分别为97.64%～103.79%(RSD=2.00%,n=6)、96.41%～99.10%(RSD=1.12%,n=6)、96.56%～103.56%(RSD=2.67%,n=6)、96.10%～99.57%(RSD=1.20%,n=6)、99.34%～104.18%(RSD=1.70%,n=6)、100.35%～105.37%(RSD=1.93%,n=6)、98.76%～102.83%(RSD=1.60%,n=6)、96.30%～101.10%(RSD=1.80%,n=6)。结论:所建HPLC指纹图谱可为淫羊藿总黄酮提取物的质量控制提供参考;所建含量测定方法简便、准确、重复性好,可用于同时测定淫羊藿总黄酮提取物中8种成分的含量。

不同产地、不同成熟期淫羊藿叶中淫羊藿苷和朝藿定C含量变化

目的:研究不同产地、不同成熟期淫羊藿叶中淫羊藿苷和朝藿定C的含量变化。方法:采用Elite SinoChromODS-AP色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0～8 min,27%A;8～30min,27%～29%A),流速为1mL.min-1,检测波长为270nm。结果:不同产地粗毛淫羊藿的淫羊藿苷、朝藿定C的含量变化较大,依次分别为0.1%～0.44%、0.76%～2.59%;不同成熟期淫羊藿的淫羊藿苷和朝藿定C在嫩叶中的含量均高于老叶数倍。结论:试验结果表明:产地对粗毛淫羊藿中淫羊藿苷和朝藿定C含量影响较大;不同成熟期淫羊藿叶中淫羊藿苷和朝藿定C的含量变化可达2～11倍。

RP-HPLC法测定巫山淫羊藿中4种成分的含量

目的:用 HPLC 梯度洗脱法测定巫山淫羊藿中4种主要成分的含量,考察了淫羊藿属苷 A、双藿苷 A、朝藿定 C 和淫羊藿苷在巫山淫羊藿不同部位中的分布。方法:采用 RP-HPLC 法测定,以 BECKMAN COULTER_(TM)-C_(18)(10μm,4.6 mm×250mm)为色谱柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱(0 min,乙腈-水比例为20:80;5 min,比例为30:70;10 min,比例为50:50),流速为1 mL·min^(-1),检测波长270 nm。结果:淫羊藿属苷 A 在0.188μg～1.880μg,淫羊藿苷在0.214μg～2.140μg,双藿苷 A在0.240μg～2.400μg,朝藿定 C 在0.282μg～2.820μg范围内呈良好线性关系;重复性实验的 RSD 分别为1.2%,1.3%,1.2%,1.2%。巫山淫芋藿不同部位双藿苷 A 和朝藿定 C 的含量较大,同一植株的不同部位中朝藿定 C 的分布为根>叶>茎。双藿苷 A 的分布为根>茎>叶,淫羊藿属苷 A 和淫羊藿苷含量较少。结论:巫山淫羊藿根中的化学成分以朝藿定 C 为最高,双藿苷 A 为次,而巫山淫羊藿叶中也以朝藿定 C 含量为最高。

LC/ESI/MS方法测定卷烟及烟气中的淫羊藿苷、淫羊藿定C

采用液相色谱/电喷雾/质谱(LC/ESI/MS)法测定卷烟烟丝及其主流烟气中淫羊藿苷和淫羊藿定c的质量分数并计算其转移率。用高效液相色谱—质谱法,采用电喷雾(ESI)离子源,负离子模式,选择特定碎片离子m/z(淫羊藿苷:513.26;淫羊藿定C:659.31)进行检测。结果:所采用方法专属性强、重现性好,适用于卷烟及其烟气中淫羊藿苷和淫羊藿定C的质量分数测定。淫羊藿苷和淫羊藿定C在样品烟丝中质量分数分别为292.83,557.47 ng/g,在主流烟气中质量分数分别为10.30,39.69 ng/g,转移率分别为3.52%,7.12%。LC/ESI/MS方法可用于检测烟丝和卷烟主流烟气中淫羊藿苷和淫羊藿定C,卷烟烟丝中淫羊藿苷和淫羊藿定C可以转移到了主流烟气中,这可能是降低卷烟危害的物质基础。

超声辅助响应面法优化巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷共同提取工艺研究

目的应用响应面法优化巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷的超声辅助提取工艺。方法在单因素试验基础上,采用Box-Behnken试验设计和响应面分析法考察乙醇体积分数、超声提取时间、液固比对巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷含量的影响。结果最佳超声辅助提取工艺为乙醇体积分数73%、超声提取时间22 min、料液比为1∶32,巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷得率分别为(15.90±0.12)%和(0.75±0.05)%。结论本研究所建立的提取工艺能够提高巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷的提取率,与模型预测值相符。

HPLC测定仙灵骨葆胶囊中淫羊藿苷和淫羊藿定C含量

目的:建立仙灵骨葆胶囊(淫羊藿、丹参、补骨脂、地黄等)中淫羊藿苷和淫羊藿定C的含量测定方法。方法:采用RP-HPLC法测定含量。色谱柱为Spherisorb C18(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速为1.0mL/min,检测波长为270nm,柱温为25℃。结果:淫羊藿定C在0.22～2.20μg内其含量与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为103.2%,RSD为3.1%。淫羊藿苷在0.04～0.40μg内其含量与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为97.8%,RSD为3.2%。结论:本方法分析时间短且重现性和稳定性较好,可作为仙灵骨葆胶囊的质量控制方法。

黔产淫羊藿中淫羊藿苷和淫羊藿定C的含量测定

目的建立同时测定淫羊藿中淫羊藿苷和淫羊藿定C含量的方法 ,为淫羊藿质量控制提供依据。方法采用RP-HPLC法测定含量。色谱柱为Spherisorb C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL.min^-1,检测波长为270 nm,柱温为25℃。结果淫羊藿定C质量浓度在12.0-300.0 mg.L^-1内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为101.05%,RSD为3.01%;淫羊藿苷质量浓度在0.4-10.0 mg.L^-1内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为100.51%,RSD为2.53%。结论本方法分析时间短且重现性和稳定性较好,可作为控制淫羊藿质量的检测方法 。

HPLC法同时测定淫羊藿总黄酮胶囊中5种黄酮类成分

目的:建立同时测定淫羊藿总黄酮胶囊中朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、淫羊藿苷、宝霍苷I等5种成分含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法:所采用的色谱条件为:色谱柱:Eclipse Plus C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水,梯度洗脱;体积流量:1.0 m L·min-1;检测波长:270 nm;柱温:25℃。结果:朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、淫羊藿苷、宝霍苷I分别在3.10-62.00、5.70-114.00、9.14-182.80、15.20-304.00、1.56-31.20μg·m L-1范围内呈良好的线性关系,相关系数r均大于0.999 3;平均加样回收率分别为101.06%(RSD=1.05%,n=6)、100.78%(RSD=1.08%,n=6)、99.17%(RSD=1.14%,n=6)、100.23%(RSD=0.68%,n=6)、99.09%(RSD=1.30%,n=6),该方法的精密度、重复性和稳定性良好。结论:该方法简便、准确,为淫羊藿总黄酮胶囊多成分含量测定提供一定的参考价值。

高效液相色谱法同时测定壮骨方煮散中朝藿定C和淫羊藿苷含量

目的建立同时测定壮骨方煮散中抗骨质疏松有效成分朝藿定C和淫羊藿苷含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Plastisil C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以乙腈-水（27∶73）为流动相,流速为1.0 m L/min,检测波长为270 nm,柱温为30℃。结果朝藿定C进样量在0.050-2.016μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 9）,淫羊藿苷进样量在0.032-1.280μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 9）;朝藿定C和淫羊藿苷平均加样回收率分别为98.94%和100.99%,RSD分别为1.69%和1.07%（n=6）。结论该方法简便,重复性和稳定性良好,适用于壮骨方煮散中朝藿定C和淫羊藿苷的质量控制。

大孔树脂-梯度高速逆流色谱分离巫山淫羊藿中双藿苷A和朝藿定C

目的研究大孔树脂结合梯度高速逆流色谱法从巫山淫羊藿粗提物中制备双藿苷A和朝藿定C的分离纯化方法。方法采用大孔树脂法预处理得到巫山淫羊藿粗提物,以二氯乙烷-甲醇-水(4∶4.5∶2,V/V)体系的上相做固定相,下相做流动相,用梯度高速逆流色谱法分离纯化其主要成分双藿苷A和朝藿定C,检测波长为270 nm。结果从1.5 g巫山淫羊藿提取物中分离得到双藿苷A(458 mg)和朝藿定C(321 mg),经HPLC法分析,其纯度分别为95.2%和93.8%。结论该法简单有效,可提高淫羊藿黄酮的分离效率。

HPLC法测定淫羊藿中木兰花碱、朝藿定C和淫羊藿苷的含量

目的:建立同时测定淫羊藿中木兰花碱、朝藿定C和淫羊藿苷含量的HPLC方法,研究淫羊藿(Epimedium brevicornu Maxim.)因产地不同带来的质量差异。方法:Venusil C18 MP色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-1%KH2PO4梯度洗脱;流速1 mL/min。结果:木兰花碱、朝藿定C和淫羊藿苷分别在4.0~52.0,6.4~206.0,7.0~242.0μg/mL范围内线性关系良好;回收率分别为97.66%、101.10%、96.76%,RSD分别为2.14%、2.20%、1.58%。结论:本方法适用于同时测定淫羊藿中生物碱和黄酮两种不同类型的成分;不同分布地区淫羊藿中朝藿定C、淫羊藿苷均呈现较大的变化,木兰花碱含量变化大,不适于作为质控成分。

中压制备系统联合自动纯化系统制备淫羊藿中的朝藿定A、B、C对照品

目的采用中压制备系统联合自动纯化系统从淫羊藿原药材中分离制备朝藿定A、B、C 3种成分。方法淫羊藿提取物经大孔吸附树脂粗分离获得相应的组分后,利用中压制备系统联合自动纯化系统完成精制纯化。结果从4.5kg淫羊藿原药材(总黄酮含量约5%)中获得朝藿定A 2.4g、朝藿定B 14.8g和朝藿定C 1.7g,纯度均达到98%以上。结论此方法通过三步分离即可实现朝藿定A、B、C 3种成分的完全分离,具有高效快速、产品纯度高的特点,适于淫羊藿中朝藿定A、B、C系列对照品的规模制备。

不同产地不同部位巫山淫羊藿中黄酮的HPLC分析

建立HPLC梯度洗脱法同时测定巫山淫羊藿中3种黄酮:淫羊藿次苷Ⅰ,朝藿定C和淫羊藿苷质量分数的方法。采用HPLC法,色谱柱为phenomenex C18分析柱(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相为(A)水,(B)乙腈;柱温35℃;流速1.0 mL/min;检测波长270 nm;线性梯度洗脱条件:B∶15%(5 min),B∶30%(10 min),B∶50%(30 min)。本方法测定淫羊藿次苷Ⅰ,朝藿定C和淫羊藿苷的线形范围在0.20—1.80μg,r=0.999 3,r=0.999 9和r=0.999 7;平均回收率分别为98.43%,97.58%和97.91%,RSD(n=3)分别为2.16%,1.77%和1.90%。该方法简便、准确、重现性好,可作为同时测定淫羊藿次苷Ⅰ,朝藿定C和淫羊藿苷质量分数的方法。

超滤法测定朝藿定C的血浆蛋白结合率

目的:测定朝藿定C与人血浆的蛋白结合率。方法:采用HPLC结合超滤法对朝藿定C与健康人血浆的蛋白结合率进行测定。结果:当朝藿定C质量浓度为10.65,26.62,106.5μg.mL-1时,朝藿定C与人血浆的蛋白结合率分别为(83.24±0.73)%,(85.85±0.74)%,(86.22±1.21)%。结论:体外朝藿定C与人血浆蛋白有较强的结合。

HPLC梯度洗脱联合波长切换法测定龟鹿补肾胶囊中7种成分的含量

目的建立HPLC法同时测定龟鹿补肾胶囊中的7种成分。方法采用Alltima C18色谱柱;以乙腈-体积分数0.2%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;切换波长检测,检测波长分别为330 nm(麦角甾苷、吉奥诺苷B1)和270 nm(朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷I);流速:0.8 m L·min-1;柱温:30℃。结果 7种成分的质量浓度与峰面积在测定范围内均呈良好的线性关系(r>0.999);平均加样回收率及相应的RSD分别为98.7%(1.6%)、97.9%(1.3%)、99.6%(0.8%)、97.7%(0.5%)、99.3%(1.4%)、96.9%(0.8%)和100.3%(0.6%)。结论本文作者建立的HPLC波长切换法同时测定龟鹿补肾胶囊中麦角甾苷、吉奥诺苷B1、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷和宝藿苷I,为龟鹿补肾胶囊质量的全面评价提供了科学依据。