去整合素Echistatin对糖尿病兔后发性白内障模型中晶状体上皮细胞间质转分化及胶原合成的影响

目的观察去整合素Echistatin对糖尿病兔晶状体摘出术后后囊膜混浊(posterior capsular opacification,PCO)的影响,探讨Echistatin对晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)间质转分化及胶原合成的抑制作用。方法应用四氧嘧啶耳缘静脉注射建立糖尿病兔模型,随机分组并行晶状体摘出术,术毕前房分别注入0.2 mL高压灭菌蒸馏水(对照组),7.5 mg·L-1Echistatin(7.5 mg·L-1组)、10.0 mg·L-1Echistatin(10.0 mg·L-1组),每组又分为10 d和6周2个时间点(n=4)。裂隙灯显微镜观察各组糖尿病兔术后10 d和6周PCO分级情况,同时摘取术眼应用RT-PCR法检测晶状体后囊膜上α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和Ⅳ型胶原mRNA表达情况。结果术后10 d,各组间α-SMA mRNA和IV型胶原mRNA表达差异均无统计学意义(均为P>0.05)。术后6周,Echistatin干预组PCO分级均明显低于对照组(P=0.024);7.5 mg·L-1Echistation组α-SMA mRNA表达为3.97±0.76,对照组为9.06±3.40,10.0 mg·L-1组为6.80±3.15,7.5 mg·L-1组明显低于其余两组(P=0.002、0.024);Ⅳ型胶原mRNA表达对照组为30.88±20.13,7.5 mg·L-1组为8.62±6.99,10.0 mg·L-1组为5.76±6.73,Echistatin干预组Ⅳ型胶原mRNA表达均低于对照组(P=0.005、0.002)。结论去整合素Echistatin对糖尿病兔晶状体摘出术后PCO的发生和发展有一定的抑制作用,可能与其抑制晶状体后囊膜上α-SMA和Ⅳ型胶原的mRNA表达有关。

Gli1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞间质转分化和胶原合成的影响

目的探讨锌指转录因子1(Gli1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞间质转分化和胶原合成的影响。方法培养肾小管上皮细胞NRK-52E,分为Control、TGF-β1(TGF-β1诱导)、sh-NC+TGF-β1(转染阴性对照shRNA,TGF-β1处理)和sh-Gli1+TGF-β1(转染Gli1 shRNA,TGF-β1处理)组共4组,应用qRT-PCR和Western blot分别检测细胞中Gli1表达水平,ELISA检测细胞培养液上清中纤维连接蛋白(FN)和Ⅰ型胶原酶(ColⅠ)水平,Western blot检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ras相关C3肉毒素底物1(Rac1)蛋白表达水平。结果TGF-β1组肾小管上皮细胞中Gli1 mRNA和蛋白表达量均高于Control组;肾小管上皮细胞中Gli1 mRNA和蛋白表达量,TGF-β1和sh-NC+TGF-β1组均高于sh-Gli1+TGF-β1组;FN和ColⅠ水平,Control组均低于TGF-β1、sh-NC+TGF-β1和sh-Gli1+TGF-β1组,TGF-β1和sh-NC+TGF-β1组均高于sh-Gli1+TGF-β1组;α-SMA和Rac1蛋白表达,Control组均低于TGF-β1、sh-NC+TGF-β1和sh-Gli1+TGF-β1组,TGF-β1和sh-NC+TGF-β1组均高于sh-Gli1+TGF-β1组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论下调Gli1减弱TGF-β1条件下肾小管上皮细胞间质转分化和胶原合成水平。

内皮唾液酸蛋白在人增生性瘢痕中的表达及其对成纤维细胞表型的调控

目的探讨内皮唾液酸蛋白即CD248在人增生性瘢痕(HS)中的表达及其对人HS成纤维细胞(HSF)表型的调控作用。方法采用实验研究方法。2023年3—5月,空军军医大学第一附属医院烧伤与皮肤外科收治3例HS患儿,其中女2例、男1例,年龄1岁10个月~2岁。取前述患儿术中切除的HS组织及行全厚皮移植术后剩余的全厚皮片即正常皮肤组织,进行后续实验。取前述2种组织,行苏木精-伊红染色后观察组织结构,行Masson染色后观察组织中胶原分布情况,行免疫组织化学染色后观测组织中CD248表达情况。取HS组织,采用组织块培养法提取原代HSF,取第3~5代HSF进行后续实验。将HSF按随机数字表法分为免疫球蛋白G78(IgG78)处理组与IgG对照组,分别用终物质的量浓度为200 nmol/L的人源性CD248单克隆抗体IgG78与人源性IgG对照抗体处理24 h,采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞中Ⅰ型胶原蛋白和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达,采用蛋白质印迹法检测细胞中Ⅰ型胶原蛋白和α-SMA的蛋白表达,采用免疫荧光法检测细胞中Ⅰ型胶原蛋白和α-SMA的定位和蛋白表达情况。各实验样本数均为3。对数据行配对样本t检验和独立样本t检验。结果相较于正常皮肤组织,HS组织中表皮与真皮层均明显增厚,真皮层中胶原大量蓄积且排布紊乱。HS组织中CD248表达量明显高于正常皮肤组织(t=5.29,P<0.05)。处理24 h,IgG78处理组HSF中Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA的mRNA表达量分别为0.39±0.05、0.56±0.09,分别明显低于IgG对照组的1.00±0.07、1.00±0.08(t值分别为11.87、6.49,P值均<0.05);IgG78处理组HSF中Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA的蛋白表达量分别为0.617±0.011、0.67±0.14,分别明显低于IgG对照组的1.259±0.052、1.23±0.16(t值分别为20.92、4.52,P值均<0.05)。处理24 h,免疫荧光染色显示,Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA主要定位在2组HSF的细胞质中,IgG78处理组HSF中Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA的蛋白表达均较IgG对照组明显减少。结论CD248在人HS中表达显著增高,靶向阻断CD248能够显著抑制人HSF的胶原合成与向肌Fb的转分化。