解脲脲原体ermB基因与转座子遗传标记int-Tn的相关性

【目的】探讨解脲脲原体(Uu)临床株ermB耐药基因与接合转座子遗传标记int-Tn基因之间的关系。【方法】采用微量肉汤稀释法体外测定76株Uu对红霉素的最低抑菌浓度(MIC),设计引物扩增ermB和int-Tn基因。【结果】Uu对红霉素MIC范围为≤0.125～≥128μg/mL,MIC50为32μg/mL,MIC90≥128μg/mL,耐药率为78.95%。共21株Uu菌株检测到ermB基因,其中19株的MIC≥8μg/mL,2株的MIC=4μg/mL。21株Uu携带int-Tn基因,ermB基因与int-Tn基因之间有显著相关性。【结论】ermB基因可能是介导Uu对红霉素耐药的一种重要的基因,ermB与转座子遗传标记int-Tn基因密切相关。

长春地区猪链球菌对大环内酯和林克酰胺类耐药的分子机制研究

目的 分析长春地区猪链球菌耐大环内酯类和林克酰胺类的分子机制。方法 采用微量稀释法和双纸片扩散法分别测定相关抗生素的耐药谱和红霉素耐药型 ,并以猪链球菌的染色体DNA为模板 ,PCR扩增ermB基因和mefA/E基因 ,然后将其克隆到pMD18-T载体中 ,用双脱氧链末端终止法测定DNA序列后进行序列分析。结果 2 2株猪链球菌的临床分离菌株均扩增出ermB基因 ,而未扩增出mefA/E基因 ;对四环素、环丙沙星和大环内酯和克林霉素有高的耐药率和耐药水平 ;红霉素的耐药型以CR型为主。同源性分析显示 ,ermB基因的差异为 36 %～ 10 0 % ,与GenBank中的肺炎链球菌、粪肠球菌等的erm基因有 98%～ 10 0 %的同源性。结论 长春地区猪链球菌对MLSB 的耐药是红霉素甲基化转移酶所介导的 ,以CR型为主的耐药 ,编码该类耐药的是ermB基因 ,并与人源及动物源性的耐药基因可能存在着广泛的交换。

肺炎链球菌对大环内酯类抗菌药物耐药机制的研究

目的调查烟台地区肺炎链球菌对抗菌药物的敏感性,研究烟台地区肺炎链球菌对大环内酯类抗菌药物耐药机制。方法收集社区和临床分离的肺炎链球菌,根据美国临床实验室标准化研究所/美国临床实验室标准化委员会(CLSI/NCCLS)的推荐,用K-B法、Etest法检测肺炎链球菌对青霉素等11种抗菌药物的耐药性及对大环内酯类抗菌药物的耐药表型;用聚合酶链反应(PCR)扩增耐药基因ermB和mefE基因。结果42株肺炎链球菌中25株对青霉素低度耐药(65.0%),无对青霉素高度耐药株;肺炎链球菌对大环内酯类和克林霉素表现出极高的耐药率,对红霉素和克林霉素耐药率为98.0%和93.0%;42株肺炎链球菌中40株检测到ermB基因、1株检测到mefE基因,其中9株菌同时检测到ermB和mefE基因。结论烟台地区对青霉素不敏感肺炎链球菌检出率高;对红霉素和克林霉素近乎全部耐药,ermB基因介导的靶位改变是烟台地区肺炎链球菌对大环内酯类抗菌药物的主要耐药机制。

肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药情况及耐药基因研究

目的调查上海地区肺炎链球菌对红霉素的敏感度,研究肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药机制。方法对中山医院57株临床分离肺炎链球菌进行红霉素药敏试验;应用聚合酶链反应(PCR)技术对上海4所医院中分离的53株红霉素耐药肺炎链球菌检测耐药基因(ermB,mefA,mefE)。结果57株肺炎链球菌中12株(21.0%)敏感,3株(5.3%)中介,42株(73.7%)耐药。53株红霉素耐药肺炎链球菌中,ermB基因、mefE基因、mefA基因分别在51株(96.2%)、22株(41.5%)和1株(1.9%)中检测到。其中21株(39.6%)同时检测到ermB基因和mefE基因,1株(1.9%)同时检测到ermB基因和mefA基因,1株(1.9%)未检测到ermB基因、mefE基因或mefA基因。结论上海地区肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药率较高。ErmB介导的靶位改变是最常见的耐药机制,mef(特别是mefE)介导外排机制引起者也较常见。

动物源性链球菌红霉素耐药基因的分布

To investigate the mechanisms of erythromycin-resisant streptococcus isolated from animals,the minimal inhibitory concentrations(MICs) of pencillin, erythromycin and clindamycin against streptococcus were detected by agar two-fold dilution, the resistance phenotypes of erythromycin-resistant streptococcus were determined by the double disk test, and the presence of mefA, ermB genes were determined by PCR amplification. The results showed that the rate of resistance to penicillin, erythromycin and clindamycin of 111 strains studied were 54.95%,68.47%and 64.86%,respectively. In 76 erythromycin resistant strains, 62 isolates (81.58%) were assigned to the cMLS_B phenotype, 5 isolates (6.6%) were M phenotype and 9 isolates (11.84%) were inducibly resistant, expressing the iMLS_B phenotype by the double disk test. The mefA gene was present in all of the strains showing the M-resistance phenotype. Some isolates expressing a cMLS_B phenotype and iMLSB phenotype were confirmed genotypically by the presence of the ermB gene, but 6 isolates were n’t detected the ermB and mefA gene. Genes coding for both resistance mechanisms were found in one strain. No amplification was detected in all the erythromycin susceptible streptococcus isolates. Erythromycin resistant Streptococcus isolated from animals mediated by ermB was predominant in China. The PCR amplification can be a useful method to rapidly screen the erythromycin resistant strains.

皖北地区MRSA耐药基因研究

目的了解皖北地区临床分离的耐甲氧西林金葡菌(MRSA)所携带5类药物的7种耐药基因状况,并探讨其耐药特性。方法应用PCR方法检测64株MRSA中mecA、gyrA、qacA/B/C、qacA、ermA/B/C、ermB、tetM耐药基因。结果 64株MRSA中,mecA基因携带率为100%,tetM、gyrA、qacA/B/C、qacA、ermA/B/C、ermB基因携带率分别为95.3%、81.3%、34.4%、15.6%、39.1%、28.1%;基因组合以mecA+tetM+gyrA模式最多,为26.5%。MRSA对万古霉素无耐药,对氯霉素、磷霉素、利福平的耐药性较低,对多种药物表现出较高的耐药性。结论皖北地区MRSA中,mecA、tetM、gyrA基因携带率较高,而qacA/B/C、qacA、ermA/B/C、ermB基因携带率相对较低。

儿童肺炎链球菌红霉素、四环素相关耐药基因的研究

目的：了解儿童肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,SP）临床分离株红霉素、四环素耐药基因的流行状况及和耐药表型的关系。方法：对2005年1月-12月从温州附属育英儿童医院住院儿童分离到的47株肺炎链球菌进行了红霉素、四环素药敏试验,并用PCR法检测与红霉素耐药相关的红霉素核糖体甲基化酶基因（ermB）、主动外排转运基因（mefA）,与四环素耐药相关的tetM基因。结果：47株肺炎链球菌红霉素敏感3株、耐药44株;四环素敏感5株、耐药42株。3株红霉素敏感的肺炎链球菌均未检出ermB基因和mefA基因;44株红霉素耐药肺炎链球菌ermB基因和mefA基因的PCR检出率分别为81.8%和29.5%。共有39株肺炎链球菌检出ermB基因或/和mefA基因,其中单独携带ermB基因的耐药表型为29株,占74.4%;单独携带mefA基因的耐药表型2株,占5.1%;同时携带ermB基因和mefA基因的耐药表型8株,占20.5%。47株肺炎链球菌tetM基因的检出率为87.2%,其中四环素耐药组的检出率是95.2%,敏感组为25%。结论：ermB基因和mefA基因同时表达或单独表达均可导致红霉素耐药,ermB基因表达是儿童肺炎链球菌对红霉素耐药的主要原因,mefA基因表达是造成对红霉素耐药的次要原因。tetM基因是造成儿童肺炎链球菌四环素耐药的主要原因。红霉素和四环素已不是治疗肺炎链球菌的有效药物。肺炎链球菌四环素耐药尚存在其他的耐药机制。

儿童A族链球菌emm分型变迁与大环内酯类耐药的关系

目的通过对1993-1994年和2005-2008年456株儿童A族β溶血性链球菌（GAS）分离株抗生素敏感性、耐药基因及转座子Tn916的emm分型检测,探讨GAS对抗菌药物敏感性的变化与转座子Tn916的关系。方法采用琼脂稀释法检测临床分离株对8种抗生素敏感性;PCR检测大环内酯类耐药基因ermB、ermTR、mefA,四环素耐药基因tetM和Tn916家族转座子基因int、xis;PCR扩增及测序对菌株进行emm分型;对每种emm型的代表菌株进行PFGE分型。结果与1993-1994年比较,2005-2008年GAS菌株,红霉素、克林霉素、泰利霉素的耐药率增加（79.7%vs 94.0%,75.4%vs 96.9%,20.37%vs 87.93%）;大环内酯类抗生素耐药菌株int、xis、tetM和ermB基因的携带率增加（P〈0.05）;emm1型和emm12型菌株ermB基因携带率增加（65.20%vs 86.23%,7.7%vs 91.8%）。结论我国儿童GAS大环内酯耐药性在16年间增加,可能与emm型变化及大环内酯类抗生素耐药机制的变化有关,分离菌株的Tn916族变化可能与耐药性增加相关。

肺炎链球菌耐药性检测及其对大环内酯类抗生素耐药机制的研究

目的了解浙江地区肺炎链球菌临床菌株对临床常用抗生素耐药性以及肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药机制。方法从浙江省不同地区病人临床标本中分离并鉴定肺炎链球菌138株。采用K-B纸片法和E-test检测上述肺炎链球菌临床菌株对9种抗生素的敏感性。采用PCR检测上述菌株中与大环内酯类抗生素耐药性密切相关的ermB和mefE基因携带情况。分析ermB和mefE基因携带、分布状况与红霉素耐药性关系。结果138株肺炎链球菌临床菌株中,对红霉素耐药率高达93.5%（129/138）,对头孢噻肟、头孢呋辛、阿莫西林和左氧氟沙星的耐药率较低（2.9%-4.3%）。上述菌株er-mB基因检测阳性率（91.3%,126/138）明显高于mefE基因（33.3%,46/138）（P〈0.05）,其中27.5%菌株（38/138）同时携带。不携带ermB和mefE基因菌株均对红霉素敏感,仅携带mefE基因菌株对红霉素耐药率（62.5%）明显低于同时携带两种基因菌株耐药率（100%）及仅携带ermB基因菌株耐药率（97.7%）（P〈0.05）。结论红霉素已不适合作为治疗肺炎链球菌感染性疾病的药物。ermB基因是肺炎链球菌临床菌株携带的红霉素耐药相关优势基因。ermB基因可使肺炎链球菌产生较mefE基因更强的红霉素耐药性。

肺炎链球菌红霉素相关耐药基因与耐药表型的关系

目的:了解肺炎链球菌(Streptococcuspneum oniae,SP)临床分离株红霉素耐药基因的流行状况及和耐药表型的关系。方法:对住院儿童分离到的43株肺炎链球菌进行红霉素药敏试验,并用PCR法检测与红霉素耐药相关的红霉素核糖体甲基化酶基因(ermB)、主动外排转运基因(mefA)。结果:43株肺炎链球菌红霉素药敏试验40株耐药(占93%),3株敏感。红霉素ermB基因总检出率为76.7%(33/43),mefA基因总检出率为23.3%(10/43)。3株红霉素敏感的肺炎链球菌均未检出ermB基因和mefA基因;40株红霉素耐药肺炎链球菌ermB基因和mefA基因的PCR检出率分别为82.5%(33/40)和25%(10/40)。共有35株肺炎链球菌检出ermB基因或/和mefA基因,其中单独携带ermB基因的耐药表型为25株(占71.4%);单独携带mefA基因的耐药表型2株(占5.7%);同时携带ermB基因和mefA基因的耐药表型8株(占22.9)%。结论:ermB基因和mefA基因同时表达或单独表达均可导致红霉素耐药,ermB基因表达是儿童肺炎链球菌对红霉素耐药的主要原因,mefA基因表达是造成对红霉素耐药的次要原因。红霉素已不是治疗肺炎链球菌的有效药物。

β溶血链球菌中诱导型克林霉素耐药的检测和分析

目的了解β溶血链球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,探讨红霉素对克林霉素诱导耐药的表型和基因型。方法按CLSI推荐的K-B法测定并判读β溶血链球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,用D试验检测红霉素诱导β溶血链球菌对克林霉素耐药的表型,并且用PCR方法确定所检测的菌株是否携带的ermB基因和mefA基因。结果49株红霉素耐药的β溶血链球菌结果显示有35株β溶血链球菌只扩增到ermB基因,有9株只扩增到mefA基因,有3株同时扩增到ermB和mefA基因,有2株没有扩增到ermB和或mefA基因;17株红霉素耐药克林霉素敏感菌株中D试验阳性8株细菌都只扩增到ermB,D试验阴性9株细菌中都只扩增到mefA;红霉素敏感的β溶血链球菌没有扩增到ermB或mefA基因。结论β溶血链球菌的耐药表型与基因型高度一致,临床上可用PCR方法和D试验检测,D试验检测更为简单方便,临床应该用D试验检测β溶血链球菌的iMLS型耐药。

肠球菌的耐药基因研究

目的了解肠球菌属的耐药性趋势和耐药基因分布，为临床合理用药提供依据。方法采用VITEK2COMPACT全自动微生物鉴定系统对2008年1月至2012年5月间临床送检标本中分离的319株肠球菌进行鉴定和药敏试验，采用PCR方法对ermB、mef、gyrA耐药基因进行研究。结果319株肠球菌中以屎肠球菌最多205株（64．26％），其次为粪肠球菌63株（19．75％），其他种类肠球菌51株（15．99％）。肠球菌常用抗生素药敏结果显示屎肠球菌和粪肠球菌耐药率最低的是万古霉素（1．0％．1．6％），其次是利茶唑胺和替考拉宁（3．9％，3．2％），耐药率最高的是红霉素（94．6％，79．4％）。肠球菌中ermB基因阳性率为73．4％（234／319），gyrA基因阳性率为67．1％（214／319），reef基因均为阴性。结论肠球菌获得gyrA基因和ermB基因是肠球菌对氟喹诺酮类药物和红霉素类药物耐药的主要原因。

肺炎链球菌对大环内酯类耐药性分析

目的探索郯城县区肺炎链球菌分离株对大环内酯类耐药性及其治疗情况。方法收集郯城县社区和临床分离的肺炎链球菌,根据CLSI标准,用K-B法、Etest法检测肺炎链球菌对红霉素和克林霉素的耐药性及对红霉素的耐药表型。结果 493株肺炎链球菌中红霉素不敏感菌株489株,对克林霉素不敏感菌株482株,其中ermB基因介导的红霉素耐药菌株482株,占98.6%,mefE基因介导的红霉素耐药菌株7株,占1.4%。结论郯城县区对红霉素和克林霉素近乎全部耐药,ermB基因介导的靶位改变是郯城县区肺炎链球菌对大环内酯类抗菌药物的主要耐药机制。

解脲脲原体对红霉素体外耐药性与ermB基因相关性研究

目的探讨解脲脲原体（Uu）临床株对红霉素体外耐药性与ermB耐药基因之间的关系。方法采用微量肉汤稀释法体外测定143株临床分离的池对红霉素的最低抑菌浓度（MIC），以MIC≥8μg／ml为耐药判读标准；设计引物扩增ermB基因，并以多条带抗原基因为靶位设计引物对批进行生物学分群。结果跳对红霉素MIC范围为≤0．125μg/ml至≥128μg／ml，MIC50为16μg／ml，MIC90≥128μg／ml，耐药率为64．38％。ermB基因总的阳性率为27．97％，主要分布在MIC≥8μg/ml的菌株。两生物群之间不存在红霉素耐药性及ermB基因阳性率的差异。结论ermB基因可能是介导沈对红霉素耐药的基因，两生物群在对红霉素耐药性机制的差异需进一步研究。

红霉素耐药粪肠球菌ermB基因及水平转移分析

目的研究临床分离的红霉素耐药粪肠球菌中红霉素耐药基因ermB及其水平转移情况。方法采用聚合酶链式反应(PCR)法检测红霉素耐药粪肠球菌耐药基因ermB,采用液体环境传递法研究红霉素耐药基因ermB水平转移情况。结果 20株耐红霉素粪肠球菌中ermB基因17株为阳性,阳性率为85.00%。液体环境传递实验结果表明,3.57%(10/280)菌株携带的ermB基因在粪肠球菌之间液体环境中水平转移;1.39%(4/288)菌株携带的ermB基因在粪肠球菌与葡萄球菌之间液体环境中水平转移;无法统计菌株携带的ermB基因在粪肠球菌与大肠杆菌之间液体环境中水平转移情况。结论耐红霉素粪肠球菌ermB基因携带率较高,且该基因在粪肠球菌间和异种菌株间液体环境下可发生水平转移。

临床分离艰难梭菌毒素携带特征研究

目的对医院细菌室送检粪便标本中分离出的艰难梭菌,进行毒素基因以及耐药基因的初步分析。方法将细菌室收集到的112份粪便标本,经选择性厌氧培养,谷氨酸脱氢酶(GDH)以及API 20A生化条鉴定后,分离出12株艰难梭菌,分别采用PCR的方法检测tcdA和tcdB基因、二元毒素基因,克林霉素抗性基因(ermB)。结果12株艰难梭菌中8株为毒素基因阳性,其中tcdA+tcdB+为5株,占62.5%;tcdA-tcdB+为3株,占37.5%;二元毒素基因均为阴性;耐药基因ermB阳性为4株,占50%。结论艰难梭菌tcdA-tcdB+毒株所占比例增加,临床单独检测A毒素易造成漏检;艰难梭菌耐药现象值得关注。

住院婴儿呼吸道脲原体生物群和耐药性分析

目的观察住院婴儿呼吸道脲原体的生物群构成和耐药情况,为预防和治疗婴儿脲原体感染提供依据。方法于2012年11月—2015年12月1日采集某综合性三甲儿童医院住院婴儿鼻咽部咽拭子(痰液)标本,采用Mycoplasma IST-2(bio Merieux)试剂盒对标本进行培养鉴定及药敏试验,采用PCR方法进行脲原体生物分群、红霉素甲基化酶(ermA、ermB、ermC)和主动外排泵(mef A/E、msr A/B、mre A)可转移耐药基因检测。比较不同生物群脲原体对9种常见抗生素耐药率和红霉素耐药基因检出率差异。结果 78株脲原体培养阳性,其中48株(61.54%)脲原体分离自早产儿。生物1群51株,占65.38%;生物2群27株,占34.62%。不同生物群在患儿性别、是否早产儿、年龄、出生胎龄、出生体重及住院天数等方面差异均无统计学意义(P>0.05)。78株脲原体对环丙沙星和氧氟沙星的耐药率较高,均为80.77%;对四环素的耐药率为1.28%;对多西环素、交沙霉素和原始霉素高度敏感;对大环内酯类抗生素(红霉素、阿奇霉素和克拉霉素)耐药率较低,均<12%。不同生物群对这9种抗生素的耐药率差异均无统计学意义(P>0.05)。仅有甲基化酶耐药基因(ermB)、主动外排泵可转移耐药基因(msr A/B)阳性扩增,检出率分别为39.74%和12.82%。ermB主要存在于生物2群,检出率为55.56%(P<0.05),msr A/B在脲原体两大生物群中分布较均衡(P>0.05)。78株脲原体分别来自新生儿败血症24例,先天感染性肺炎30例,早产儿视网膜病9例,新生儿颅内出血9例,支气管肺发育不良15例。这些疾病在生物1群和2群的分布差异均无统计学意义(P>0.05)。结论婴儿呼吸道分离的脲原体以生物1群为主,在早产儿中检出率更高;对大环内酯类抗生素耐药率较低,可作为治疗婴儿脲原体感染的首选药物;红霉素耐药基因ermB主要分布在生物2群。