P-cadherin、PCNA和c-erbB-2基因表达与乳腺癌转移的关系

目的 探讨胎盘钙黏素 (P -cd)、增殖细胞核抗原 (PCNA )和c erbB 2基因表达与乳腺癌转移的关系。方法 采用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR )半定量的方法 ,测定 17例乳腺癌组织中P -cd基因的mRNA表达 ,采用免疫组化SP法测定PCNA和c erbB 2基因的蛋白表达。结果 无淋巴结转移组的P -cd校正值 ( 0 .9367± 0 .5 2 90 )明显高于有淋巴结转移组 ( 0 .35 88± 0 .12 85 ) ,有显著性差异 (t =3.0 2 8,P <0 .0 5 )。PCNA阳性表达率为 70 .6% ( 12 /17) ,其中无淋巴结转移组为 5 0 .0 % ( 4/8)、有淋巴结转移组为 88.9% ( 8/9) ;c erbB 2阳性表达率为 5 2 .9% ( 9/17) ,其中无淋巴结转移组为 2 5 .0 % ( 2 /8)、有淋巴结转移组为 77.8%( 7/9) ,两者无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 P

LDL-R基因多态性与丙型肝炎易感性的相关性分析

目的探讨低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因rs688 C/T、rs5925 C/T单核苷酸多态性(SNP)与丙型肝炎易感性之间的相关性。方法采用聚合酶链式反应(PCR)结合高分辨率熔解曲线(HRM-PCR)的方法,对179例丙型肝炎病毒(HCV)感染者和178名体检健康者或无病毒性肝炎史的其他疾病患者基因rs688和rs5929两个位点的单核苷酸多态性进行检测。结果在HCV感染组和未感染HCV对照组之间,LDL-R SNP中rs688和rs5925分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论 rs688和rs5925这两个多态性位点可能与丙型肝炎感染无相关性。

人杀菌/渗透增强蛋白N端功能片段基因突变文库的构建和鉴定

目的为提高杀菌/渗透性增强蛋白N端功能片段BPI_(23)对内毒素(lipopolysaccharides,LPS)的亲和性,通过易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和DNA改组技术,对其编码序列BPI_(600)进行突变,在大肠杆菌XL10-Gold中构建BPI_(600)基因突变体库。方法通过控制Mg2+和Mn2+的浓度进行易错PCR,获得BPI_(600)随机突变基因片段,经测序和基因比对,确定BPI_(600)的随机突变率。再对易错PCR产物进行DNA改组,将改组产物克隆至pYD1载体中,转化大肠杆菌XL10-Gold,从Amp抗性(LuriaBertani,LB)固体培养平板上任选10个单菌落,增菌后提取质粒,得到pYD1-shuffled BPI_(600)重组质粒,将质粒进行HindⅢ/XhoⅠ酶切鉴定,取5个阳性质粒进行DNA测序,通过基因和氨基酸比对鉴定突变情况。结果测序和基因比对显示,BPI_(600)经易错PCR所获突变文库的随机突变率达2.3%;改组后重组质粒的酶切结果表明,在随机选择的10个菌落所提质粒中,有6个含BPI_(600),表明构建了重组质粒pYD1-shuffled BPI_(600);在5个阳性质粒中,有4个重组质粒的BPI_(23)编码序列分别发生了6、9、11和14个碱基突变;1个不仅有10个碱基突变,还存在1个碱基的缺失。氨基酸比对表明,有2个质粒(分别有6和14个碱基突变)具有正确的读码框,能够翻译完整的蛋白质,各有4或14个氨基酸突变。3个质粒因含终止密码子而不能表达完整目的蛋白。结论成功构建pYD1-shuffled BPI_(600)重组质粒,获得库容量为2×105的突变文库,为高内毒素亲和力突变体的筛选奠定了基础。