牦牛EPOR基因编码区序列的克隆及分析

以处于不同海拔高度的3个牦牛品种即巴州牦牛、大通牦牛、九龙牦牛为研究对象,对各牦牛品种的促红细胞生成素受体(EPOR)基因编码区进行PCR扩增和克隆测序。在对测序结果进行拼接得到牦牛EPOR基因编码区全序列基础上,利用生物信息学软件对其序列进行生物信息学及比较基因组学分析。结果表明:牦牛的EPOR基因编码区全长1527bp,编码508个氨基酸;EPOR信号肽由25个氨基酸组成,胞外域由225个氨基酸组成,跨膜区由22个氨基酸组成,胞浆域由236个氨基酸组成;EPOR基因编码区在牦牛品种间及其与普通牛间均存在一定的差异,这些差异是否与牦牛的适应性有关,值得进一步研究。

敲低EphB1基因对过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞氧化损伤的影响

目的:探讨敲低EphB1基因对过氧化氢(H 2O 2)诱导的大鼠心肌H9c2细胞氧化损伤的影响,为EphB1基因治疗心血管疾病提供依据。方法:体外培养大鼠心肌H9c2细胞,分为空白组(不做任何处理)、H 2O 2组(H 2O 2细胞损伤)、阴性对照组(转染siRNA control)和转染si-EphB1组(转染si-EphB1后H 2O 2细胞损伤)。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组H9c2细胞中EphB1基因表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测各组H9c2细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,DCFH-DA探针法检测各组细胞内活性氧(ROS)水平,分光光度计法检测各组细胞中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果:与空白组比较,H 2O 2组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平明显升高(P<0.05),阴性对照组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平无明显变化(P>0.05);与H 2O 2组比较,转染si-EphB1组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。与空白组比较,H 2O 2组细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),ROS和MDA水平升高(P<0.05),SOD水平降低(P<0.05),而阴性对照组细胞存活率、凋亡率、ROS、MDA和SOD水平差异无统计学意义(P>0.05);与H 2O 2组比较,转染si-EphB1组细胞存活率升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),ROS和MDA水平降低(P<0.05),SOD水平升高(P<0.05)。结论:敲低EphB1基因能够抑制H 2O 2诱导的大鼠心肌细胞氧化损伤,起到心肌保护作用,其机制与提高心肌细胞存活率、抑制细胞凋亡、改善抗氧化酶活性和提高细胞内氧化应激产物清除能力有关。

藏猪促红细胞生成素(EPOR)基因的表达与低氧适应分析

为了解促红细胞生成素受体(EPOR)对动物低氧适应的重要作用,试验选取饲养在西藏林芝(海拔约3 000 m)的高原藏猪、高原大约克猪和饲养在北京(海拔约100 m)的大约克猪(低地大约克猪),在6月龄进行屠宰,采集心脏、肝脏和肺脏器官组织,使用荧光定量PCR技术测定EPOR基因的表达量。结果表明:猪EPOR基因在肺脏器官组织中表达量比较高,在心脏和肝脏器官组织中表达量较低。高原藏猪EPOR基因的表达量在3个器官组织中均高于高原大约克猪和低地大约克猪,但在肺脏器官组织中高原藏猪与高原大约克猪相比差异不显著(P>0.05)。大约克猪从低地移居到高原地区,器官组织中EPOR基因表达量均显著增加(P<0.05)。EPOR基因是受低氧调控的基因,低地大约克猪移居到高原之后该基因表达量增加;高原藏猪EPOR基因表达量高于大约克猪,可能对其高原适应性具有重要作用。

一种新的大鼠红细胞生成素受体基因的剪切形式

目的 检测大鼠骨髓细胞中新的红细胞生成素受体（ＥｐｏＲ） 基因的可变剪切形式。方法 对正常Ｗｉｓｔａｒ 大鼠骨髓单个核细胞的总ＲＮＡ 进行逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ） ，并测定扩增片段的序列。结果 用一对引物（５′引物为６３７ ～６５７ｂｐ，３′引物为８８２～９０３ ｂｐ） 可扩增出两条片段，一条长约为２６７ ｂｐ，另一条为较长的片段。其中２６７ ｂｐ 的片段为正常的ＥｐｏＲ扩增片段。测序结果显示，较长的扩增片段长度为３４６ ｂｐ，同样为大鼠ＥｐｏＲ 核苷酸序列，但在７３６ 和７３７ 碱基之间插入了长度为７９ ｂｐ的片段。经序列检索发现，７９ｂｐ 的插入序列为滞留的第Ⅴ内含子，但在插入序列的第１６ 位碱基由Ｃ突变为Ｔ，第４９ 位和第５０ 位碱基之间插入了Ｇ 碱基。上述移码突变导致基因的阅读框架发生变化，在第７ 外显子出现终止密码子。结论 在正常的Ｗｉｓｔａｒ 大鼠中发现了新的、胞外近膜区、跨膜区和截短的胞内区编码序列发生变化的ＥｐｏＲｍＲＮＡ 可变剪切形式。这一可变剪切形式的生物学意义有待于进一步研究。

肝细胞导向的促红细胞生成素基因转移在肾性贫血基因治疗的初步研究

目的探索用受体介导方法对肾性贫血基因治疗的可行性及疗效。方法构建一种克隆了促红细胞生成素（ＥＰＯ）基因的ＥＢＶ复制子载体ｐＥＰＯ，该载体与半乳糖基化组蛋白结合形成可溶性的核酸蛋白复合物，以静脉注射的方式将复合物导入通过喂饲腺嘌呤造成肾性贫血大鼠，恢复正常饮食２周后，采血样检测血红蛋白的含量和红细胞数，并与对照组进行比较。结果注射ｐＥＰＯ复合物组的红细胞数和血红蛋白含量都有明显升高，实验组和对照组的红细胞数分别为每毫升４９２个和４０７个；血红蛋白含量分别１１．４ｇ／ｍｌ和９．１ｇ／ｍｌ。两组比较，Ｐ＜０．０１。提示ＥＰＯ基因已被导入动物体内并表达出目的蛋白，但肾衰症状并不改善。结论以上结果证明通过受体介导的基因转移技术可将ＥＰＯ基因导入实验动物体内并进行表达。