两种大气压等离子体处理大肠杆菌的实验研究

为验证等离子体对大肠杆菌的杀灭效果并探讨其灭菌机理,进行了大气压下同轴介质阻挡放电射流装置和APMTP+JET型微波等离子体源两种等离子体发生装置激发等离子体的灭菌实验,并由活菌计数分别得出大肠杆菌存活曲线,通过扫描电镜对比灭菌实验前后大肠杆菌的状态,以对大气压等离子体灭菌机理进行初步分析。实验证明,该微波等离子体灭菌效果远好于同轴介质阻挡放电等离子体射流;两种装置对大肠杆菌的杀灭过程呈不同变化趋势;推测灭菌作用的主导因素为活性基团和高能粒子,其中静电电荷积累有一定作用。对于APMTP+JET装置微波等离子体,热效应不可忽略,其他因素则协同灭菌。

PHMG/MMT复合抗菌剂改性聚丙烯

采用离子交换法将聚六亚甲基胍盐酸盐(PHMG)交换到无机蒙脱土(MMT)中制得PHMG/MMT复合抗菌剂,将其用于改性聚丙烯(PP)。利用X射线衍射仪、扫描电子显微镜、热重分析仪及差示扫描量示仪研究了PHMG/MMT的结构和性能。结果表明:PHMG已经插入MMT的层间,PHMG/MMT复合抗菌剂具有良好的热稳定性,可以满足PP的加工条件。PHMG/MMT改性后的PP对大肠杆菌和金黄葡萄球菌的杀菌率均可达99.9%,说明PHMG/MMT复合抗菌剂具有很好的杀菌作用。

重组大肠杆菌外膜蛋白OmpT对小鼠免疫保护作用的研究

为评价大肠杆菌(E.coli)外膜蛋白酶T(OmpT)的免疫原性及对小鼠的免疫效率,本研究将原核重组表达纯化的OmpT蛋白(rOmpT)免疫小鼠,并以灭活的E.coli 308-2全菌疫苗株作为对照组,通过检测其抗体效价、体外调理吞噬作用和细胞因子表达水平以及攻毒试验进行保护效率评价。结果表明rOmpT免疫组在二免后14 d其抗体水平可以达到峰值(1∶64 000),并且其抗血清具有显著促进巨噬细胞对E.coli的吞噬作用;同时,重组蛋白与全菌免疫组均能够显著提高小鼠体内IL-4和IFN-γ的表达。而且重组蛋白免疫组对4个进化种系(Phylogenetic group)的E.coli攻毒的免疫保护率均为60%左右,比全菌免疫组高约10%。研究结果显示rOmpT比全菌灭活E.coli能够诱导小鼠产生更有效免疫保护作用,表明rOmpT可以作为E.coli亚单位疫苗候选蛋白。

966株尿路感染病原菌的分布

目的分析尿路感染的病原菌分布及耐药性特点，为临床选用抗菌药物提供依据。方法采用VITEK-32细菌鉴定仪鉴定菌种，对尿路感染患者的1978份尿液标本中分离的966株泌尿系感染病原菌进行鉴定及药物敏感试验。结果在分离的966株病原菌中，革兰阴性菌675株（占69．9％），主要为大肠埃希菌；革兰阳性菌183株（占18．9％），主要为粪肠球菌；真菌108株（占11．2％），主要为白色念珠菌。分离数在前5位的病原菌依次为大肠埃希菌（占49．0％）、粪肠球菌（占9．6％）、肺炎克雷伯菌（占7．ooA）、白色念珠菌（占6．8％）、奇异变形杆菌（占3．9％）。大肠埃希菌产超广谱争内酰胺酶（ESBLs）检出率为47．3％，肺炎克雷伯菌产ESBLs检出率为33．8％。甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的检出率为44．8％，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的检出率为50％。结论引起尿路感染病原菌的分布广泛，大肠埃希菌为尿路感染的主要病原菌。有些菌株产生多重耐药性，大肠埃希菌产ESBLs检出率较高。应尽量根据药物敏感试验选用抗菌药物，减少耐药菌株的产生和医院感染的爆发流行。

寡核苷酸阵列芯片快速鉴定大肠杆菌O_(157):H_7初步研究

目的设计、制作一种微型化寡核苷酸阵列芯片,评价快速鉴定肠出血性大肠杆菌O157:H7的效果。方法多重PCR扩增大肠杆菌O157:H7七个特异性基因位点(rfbEf、licH7i、ntimin、Shiga-like toxins I and II、hemolysin A和uidA),通过PCR反应掺入SpectrumOrangTM-dUTP获取荧光标记的靶序列,与制备的芯片寡核苷酸探针杂交。结果寡核苷酸阵列芯片检测结果与试验预期相符,获取的杂交图分辨效果明显优于多重PCR琼脂糖凝胶电泳。结论基于玻片的寡核苷酸阵列芯片制作简便,鉴定病原菌检测细菌毒力因子快速、灵敏、特异,有良好的应用前景。

胆汁三烯结合蛋白在大肠杆菌中的表达、复性与纯化

目的:合成胆汁三烯结合蛋白(BBP)基因并在大肠杆菌中表达,获得重组BBP纯化制品。方法:根据天然BBP的基因序列和大肠杆菌偏好密码子设计并合成BBP基因的引物,PCR扩增优化的BBP基因序列,克隆至载体pEasy-T3;测序正确后,将该序列克隆至表达载体pET-32a上,构建表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,在IPTG诱导下表达融合蛋白;采用Ni柱纯化融合蛋白。结果:PCR扩增获得了优化后的BBP基因序列,构建了表达载体pET-32a-BBP;SDS-PAGE分析表明表达的融合蛋白相对分子质量为20×103,以包涵体形式存在,占全菌蛋白的40%以上;变性、复性后经Ni2+柱纯化,获得纯度达98%以上的重组蛋白。结论:优化并合成了BBP全基因序列,获得了高纯度重组融合蛋白,为进一步鉴定其生物活性及筛选小分子的研究奠定了基础。

重组人成纤维细胞生长因子-8a在大肠杆菌中的可溶性表达

通过低温诱导,成功实现了重组人成纤维细胞生长因子-8a蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达.进一步研究了温度、IPTG浓度、诱导时长、诱导时期(OD600)、培养基类型这5个因素对重组人成纤维细胞生长因子-8a蛋白可溶性表达的影响,确定了可溶性表达最优化条件.优化表达条件后实现可溶性表达率大于30%.

黏附素F18菌毛研究进展

综述F18菌毛的一般特性、表达和提取、相关血清型和毒力因子、亚单位及基因调控等。

氯球接枝季铵季鏻基杀菌剂的合成与性能

以氯球、二乙烯三胺、1,3-二溴丙烷、三苯基膦为原料,合成了一种新型氯球接枝季铵季鏻基固体杀菌剂。采用正交实验设计,以大肠杆菌杀菌率为指标,筛选出效果最佳杀菌剂产物。采用红外光谱对其结构进行确定,并考察了其对异养菌的杀菌性能。结果表明:当投药量为80mg/L时,反应接触时间为60min,pH值为6时,大肠杆菌的杀菌率可达95.5%。

水环境中大肠杆菌PCR快速检测体系的研究

应用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术,建立能在12h内快速检测大肠杆菌的体系。把环境水样过滤浓缩后,将截留在膜上的细菌直接或8h增菌后提取DNA模板,以大肠杆菌Uid A基因设计引物,经过PCR扩增、凝胶电泳检测,水环境样品在不增菌条件下和增菌条件下检出限分别为1.52×104个/L,1个/L。与滤膜法比较,PCR法时间缩短、灵敏度和准确度提高,适宜于水环境中大肠杆菌的快速检测。

产ESBLs大肠埃希菌I类整合子与耐药性关系分析

目的了解I类整合子在产ESBLs和非产ESBLs大肠埃希菌中分布流行状况,分析I类整合子在细菌多重耐药中的作用。方法根据NCCLS推荐的琼脂稀释法进行药敏试验,用双纸片协同试验检测产ESBLs菌,PCR扩增Ⅰ类整合酶基因。结果大肠埃希菌ESBLs和I类整合子的检出率分别为57.4%和45.4%,I类整合子在产ESBLs菌的分布明显高于非产ESBLs菌。结论I类整合子的存在与细菌产生ESBLs相关,影响着临床分离株多重耐药率的高低。

小剂量糖皮质激素对大鼠肺内源性急性肺损伤的保护作用

目的观察小剂量氢化可的松对大肠埃希菌导致的大鼠肺内源性急性肺损伤（ALI）的保护作用。方法大肠埃希菌气管注射制作大鼠肺内源性ALI模型，设氢化可的松干预组（HC组）、模型对照组（C组）及正常对照组（N组）。给药后12、24、36h予机械通气，监测血压、血气、胸肺动态顺应性（Cdyn），计算肺指数，测支气管肺泡灌洗液（BALF）总蛋白含量及IL-8、IL-10、TNF-α浓度。结果HC组各时间点血压均明显高于C组（P〈0．05）。HC组病死率为21％，与C组（23％）相比差异无显著性（P〉0．05）。HC组12h肺指数为（0．333±0．082）％，明显低于C组[（0．432±0．137）％]。HC组24,36hBALF总蛋白含量为（874．55±426．97）mg／L、（735．95±244．33）mg／L，明显低于C组[（1468．52±433．38）mg/L、（1350．95±681．66）me/L]；HC组BALF中IL8浓度[（69．66±13．07）ng／L、（61．49±15．27）ng／L]明显低于C组[（91．37±24．59）ng／L、（98．97±17．77）ng／L]；HC组36hBALF中IL-10浓度为（173．92±38．28）ng／L，明显高于C组[（136．46±34．00）ng／L]；HC组12、24、36hBALF中TNF-α浓度[（343．13±50．19）ng／L、（277．92±84．51）ng／L、（305．87±61．59）ng／L]均明显低于C组[（467．51±76．09）ng／L、（360．12±34．69）ng／L、（375．26±25．79）ng／L]。结论单次小剂量糖皮质激素治疗大肠埃希菌导致的大鼠肺内源性ALI能维持血压稳定。可短时间减轻肺水肿，抑制促炎因子的释放。

7型庚型肝炎病毒非结构蛋白NS3在大肠埃希菌中的表达、纯化及其反应原性鉴定

目的研究在大肠埃希菌（Escherichia coli，Ecoli）表达系统中表达和纯化7型庚型肝炎病毒（GBvirus C genotype 7，GBV．CG7）非结构蛋白NS3的149个氨基酸（NS3—149），并对其进行反应原性鉴定。方法将NS3．149基因克隆人原核表达载体pET-28a，并转化人BL21，利用异丙基．B．D．硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导其表达。用Ni。’柱对融合蛋白NS3．149进行纯化，最后经Western印迹检测其抗原特异性和反应原性。结果①成功构建了pET-28a-NS3-149重组质粒，该重组质粒转化入BL21后．融合蛋白NS3-149表达的最佳条件为在32℃条件下，A600nm等于0．8时，用1mmol／L的IPTG诱导6h后，融合蛋白表达量达到最高。经过SDS—PAGE分析，融合蛋白以包涵体的形式表达，其大小约27kD，与预期大小基本一致；②用感染GBV．C7型的人阳性血清经Western印迹鉴定，融合蛋白NS3-149具有较好的反应原性．另外，其与GBV-C容易发生共同感染的HIV或HCV阳性血清无非特异性交叉反应，说明了融合蛋白NS3-149具有较好的特异性。结论本实验在大肠埃希菌中表达并纯化并获得具有良好反应原性的GBV-C7型融合蛋白NS3-149，为进一步对GBV-C进行抗体检测的流行病学调查研究奠定了重要的前期工作基础。

广东长沙湾牡蛎养殖区水质卫生状况分析

目的了解广东省长沙湾牡蛎养殖区水质卫生状况，并探讨海水中粪大肠菌群（FCB）与主要理化指标间的关系。方法2013年11月至2014年10月在广东长沙湾牡蛎养殖区选取5个养殖点，并逐月采集养殖海水，参照GB17378．4—2007《海洋监测规范第4部分：海水分析》测定水体水温、pH、盐度、浊度及溶解氧5个理化指标；采用GB17378．7-2007《海洋监测规范第7部分：近海污染生态调查和生物监测》中的多管发酵法检测水中的FCB。结果2013年11月至2014年10月间在长沙湾牡蛎养殖水域共调查5个采样点，各点分别采集养殖水12份，共检测60份水样。长沙湾牡蛎养殖区海水中FCB检测范围为10-1．26×10^6MPN／L，总体均值3．8×10^3MPN／L；水中FCB检出59份，检出率为98．3％（59／60）；超标36份，总超标率为60．0％（36／60）。径口、亚洲、长洲、辰洲、新村养殖点海水中FCB超标率分别为25．0％、25．0％、66．7％、83．3％、100．0％。不同养殖点间FCB超标率差异有统计学意义（P〈0．01）。调查期间养殖点海水中FCB均值总体表现为秋冬季低（198～10002MPN／L）、春夏季高（501～113783MPN／L）的特征，但不同月份各养殖点水中FCB超标率差异无统计学意义（P〉0．05）。调查期间养殖区水温为13．1—32．5℃；pH为6．8～9．2；盐度为0．1‰～24．9‰；浊度为7．0～140．0NTU；溶解氧含量范围为2．9—12．5mg／L。不同月份养殖水水温、pH、盐度、浊度间的差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。养殖水中FCB与浊度（r=0．425）呈正相关关系；与盐度、溶解氧呈负相关关系（r=-0．266、-0．505）。结论长沙湾牡蛎养殖区海水中FCB超标率较高，建议加强沿岸污水排放的管理；盐度、浊度、溶解氧对长沙湾牡蛎养殖海水中FCB数量具有一定影响。

千金子制霜前后提取物对大鼠肠道菌群的影响

目的研究千金子制霜前后提取物对正常大鼠肠道菌群的影响,为进一步阐明千金子制霜减毒机制提供参考。方法大鼠ig高、中、低剂量的千金子生品和霜品提取物,采用平板菌落计数法考察千金子制霜前后大鼠粪便中4类代表性肠道菌群双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌、肠球菌的数量变化。结果平板菌落计数实验结果表明,ig千金子生品与霜品提取物后大鼠出现菌群失调现象,且千金子霜品较生品引起的菌群紊乱程度低,在低剂量给药时可使条件致病菌肠球菌和大肠杆菌的数量减少。结论千金子制霜前后提取物均会影响肠道菌群的生物多样性,影响肠道菌群平衡,且千金子制霜后对4类肠道菌群的作用减弱,引起肠道菌群紊乱程度减小,这与千金子霜品泻下作用缓和的研究结果相一致,表明从肠道微生态角度考察千金子制霜前后对肠道菌群的干预作用,可揭示制霜与肠道菌群数量变化可能存在相关性。