超强静磁场对染料脱色菌Escheriehia coli的acpD基因的影响

将大肠杆菌E.coli ATCC8739置于12.0 T超强静磁场(ultra-strong static magnetic field,SMF)中进行处理,获得了磁场处理0.5、1、2、4和8 h的菌株E.coli-SMFn(n=0.5、1、2、4、8)。在37℃、pH 7、静置的条件下,菌株对偶氮染料AR14(I.C.Acid Red 14)的脱色结果指出,当反应进行到4、6和8 h时,E.coli-SMF8的脱色效率分别为18%、55%和96%,远高于E.coli ATCC8739的3%、19%和50%,表明SMF作用显著地增强了菌株的脱色效率。基因组DNA提取、PCR扩增、分子克隆以及基因测序的实验结果进一步表明,全部6例E.coli ATCC8739菌株的偶氮还原酶基因(acpD)序列均与GenBank中报道的完全一致;而E.coli-SMF8菌株的acpD-SMF8核酸序列中缺失了第99位的胞嘧啶。该缺失突变不仅使acpD-SMF8的核酸序列与acpD的存在显著不同,同时得到了具新活性中心的偶氮还原酶AzoR-SMF8。这个新的活性中心具有更强的黄素(FMN)结合能力,因此使该酶与偶氮染料的亲和力大大增加,促进了脱色效率的提高。

第三代头孢菌素的用量与大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌耐药相关性分析

目的:探讨三代头孢菌素的用量与大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌耐药率的相关性。方法:采用回顾性调查方法,对2001-2004年大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的耐药率、三代头孢菌素的用药频度(DDDs)分别进行统计,用直线回归对耐药率与DDDs进行相关性分析。结果:大肠埃希菌对三代头孢菌素的总体耐药率明显高于肺炎克雷伯菌,大肠埃希菌对头孢曲松、头孢哌酮的耐药率呈逐年增高趋势。耐药率和DDDs相关性分析显示,头孢曲松的用药频度与大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的耐药率呈正相关(r=0．78),头孢他啶的用药频度逐年上升。结论:大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的耐药率的上升趋势与三代头孢菌素用量增加有关。

磷脂酰丝氨酸合成酶基因pss的克隆与表达

磷脂酰丝氨酸合成酶能催化转酯反应,是定向合成特定磷脂类物质特别是磷脂酰丝氨酸的工具酶,但出发菌株产量低,很大程度上限制了酶法合成磷脂酰丝氨酸的工业化应用。利用表达载体pET-22b,实现了大肠杆菌磷脂酰丝氨酸合成酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的同源高效表达。利用镍亲和柱对表达产物进行纯化,并用HPLC法对纯化后的重组酶的活力进行检测。结果表明,目的蛋白可在短时间内进行大量表达,蛋白含量是出发菌株的100倍,同时经6h的转酯反应转化率达到33%,重组磷脂酰丝氨酸合成酶活力达到69U/mg蛋白。

菌悬液浓度对体外药敏实验结果的影响

为探讨受试菌菌悬液浓度对体外药敏实验结果的影响,该文采用微量稀释法测定阿莫西林/克拉维酸(4:1)、庆大霉素、多西环素和恩诺沙星等4种药物对鸡大肠杆菌和鸡金黄色葡萄球菌在不同菌悬液浓度(103CFU/mL、104CFU/mL、105CFU/mL、106CFU/mL、107CFU/mL)的最小抑菌浓度(MIC)值。结果表明:恩诺沙星对两类细菌的MIC值不受接种的菌悬液浓度影响;多西环素对大肠杆菌的MIC值受菌悬液浓度影响较小,但其对金黄色葡萄球菌的MIC值随菌悬液浓度升高而升高;阿莫西林/克拉维酸(2:1)和阿米卡星对两类菌株的MIC值均随菌悬液浓度增大而增大,增大的幅度因药物和受试菌不同而异。

左氧氟沙星单用及联合用药对细菌突变选择窗影响的研究

目的测定左氧氟沙星单用及分别与头孢唑林、头孢哌酮联用对金黄色葡萄球菌ATCC29213和大肠埃希氏菌ATCC25922的MIC99和防突变浓度(MPC),探讨左氧氟沙星单药及联合用药对细菌突变选择窗(MSW)的影响,寻找减少耐药突变菌株产生的新途径。方法采用肉汤法富集1010CFU/ml金黄色葡萄球菌ATCC29213和大肠埃希氏菌ATCC25922,采用肉汤稀释法、琼脂平板稀释法体外测定左氧氟沙星单用及与头孢唑林联用对金黄色葡萄球菌标准株ATCC29213的MIC、MIC99、MPC,计算MPC/MIC99;测定左氧氟沙星单用及与头孢哌酮联用对大肠埃希氏菌标准株ATCC25922的MIC、MIC99、MPC,计算MPC/MIC99。结果左氧氟沙星单用对ATCC29213、ATCC25922的MPC分别为1.2μg/ml、0.125μg/ml,MPC/MIC99分别为13.27、9.54;左氧氟沙星与头孢唑林联用对ATCC29213的MPC为0.5/1.0μg/ml,MPC/MIC99为9.31;左氧氟沙星与头孢哌酮联用对ATCC25922的MPC为0.0375/0.146μg/ml,MPC/MIC99为7.98。结论左氧氟沙星与头孢唑林、头孢哌酮联合用药后能分别降低对ATCC29213、ATCC25922的MPC,同时缩小细菌突变选择窗,减少细菌对左氧氟沙星的耐药性产生。

重组人胰岛素样生长因子-1大肠杆菌高密度发酵研究

目的建立重组人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)在大肠杆菌高密度发酵中表达的工艺。方法以工程菌DH5α/pET32a(IGF-1)为对象,通过分批发酵培养优化溶解氧浓度、pH及温度等发酵条件,在此基础上以甘油为限制性基质进行分批补料发酵,考察不同补料方式对发酵的影响。结果适合重组hIGF-1在工程菌高密度发酵中表达的条件:在菌株活化与初始培养后,诱导时控制发酵系统溶解氧浓度为20%,温度为30℃,pH为7.2并以恒定pH反馈补料,发酵12h菌体密度OD600达44.53,得菌体干质量17.49g/L,平均生产强度为1.458g.L-1.h-1,其中重组hIGF-1的相对表达量为32.5%。结论研究为工业化生产hIGF-1奠定了基础。

毛酸浆果醇提物抑菌机理的初步研究

通过观察大肠埃希菌标准菌株、金黄色葡萄球菌标准菌株生长曲线和菌体超微结构的变化,探讨毛酸浆果醇提物的可能抑菌机理。以金黄色葡萄球菌标准菌株和大肠杆菌标准菌株作为指示菌,在分别绘制细菌生长曲线的基础上,于不同时间点观察加药后细菌生长曲线的变化,并以透射电镜观察细菌菌体超微结构的改变。在毛酸浆果醇提物最低抑菌浓度作用下,大肠埃希菌标准菌株生长曲线的各时间点菌体浓度OD值始终保持在0.5以下。透射电镜下可见:大肠埃希菌标准菌株生长0h时,细菌出现明显的分裂相;4h后,大肠埃希菌菌体内部出现许多空泡,分裂相明显减少;8h后,出现较多死亡菌体。毛酸浆果醇提物能有效地抑制大肠埃希菌的生长,使大肠埃希菌的菌体结构出现质壁分离、空泡样变和死亡现象。

ClO_2消毒粉剂杀菌效果及毒性试验研究

目的研究三元一体包装ClO2消毒粉剂杀菌效果和毒性。方法采用悬液定量杀菌试验、能量试验和动物毒性试验进行了观察。结果以含25 mg/LClO2消毒液对悬液内大肠杆菌作用5 min,平均杀灭率为99.96%;12.5 mg/LClO2消毒液对金黄色葡萄球菌作用5 min,平均杀灭率为99.92%;50 mg/LClO2消毒液对枯草杆菌黑色变种芽孢作用10min,平均杀灭率为99.93%;含25%以上小牛血清对其杀灭大肠杆菌效果有轻度影响。以200mg/LClO2消毒液作用5 min,完全破坏悬液内HBsAg的抗原性。将三元一体包装ClO2消毒粉剂于54℃存放120 d,ClO2的下降率为8.2%。小鼠急性经口LD50值大于5000 mg/kg,以100 mg/LClO2消毒液对家兔皮肤刺激试验指数为0.63,属于轻度刺激性。结论三元一体包装ClO2消毒粉剂性能稳定,对细菌繁殖体和细菌芽孢具有良好的杀菌效果,属无毒、低刺激性消毒剂。

硫酸粘杆菌素体外抑菌效果的研究

将硫酸粘杆菌素按照在畜禽实际用量（2～20 mg/kg）选择3个浓度（5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg）分别配制溶液,按照常规方法制备成药敏片,分别置于接有大肠杆菌、沙门氏菌的普通琼脂板上,同时用标准药敏片庆大霉素、新霉素、强力霉素、盐酸环丙沙星、氧氟沙星、头孢曲松作对照,观察它们对大肠杆菌、沙门氏菌的抑菌效果.结果表明：①3个浓度的硫酸粘杆菌素对大肠杆菌和沙门氏菌均高度敏感,并随药物浓度的增加抑菌圈也相应增大.②硫酸粘杆菌素对大肠杆菌、沙门氏菌的抑菌效果显著优于庆大霉素、新霉素、强力霉素、盐酸环丙沙星、氧氟沙星、头孢曲松等抗生素（P＜0.05）.

色氨酸转运系统改造对大肠杆菌产L-色氨酸的影响

近年来,转运系统改造已经成为氨基酸菌株菌种改良的重要手段。本研究以工业生产菌Escherichia coli MT-01/p Trp-01为出发菌株,首先利用Red重组技术,在菌株MT-01/p Trp-01基因组上敲除了色氨酸吸收基因mtr,发酵结果表明,敲除敲除突变菌的L-色氨酸产量达到35.87 g/L,与出发菌株E.coli MT-01/p Trp-01相比提高了32%;在此基础上,进一步考察了三种不同启动子(Pr,Ptac,Pser A)控制下L-色氨酸分泌基因ydd G的差异表达对菌体生长及菌株产L-色氨酸的影响。结果表明,当采用组成型启动子tac时,ydd G基因的过表达菌株L-色氨酸的产量为41.01 g/L,比mtr敲除菌株E.coli MT-11/p Trp-01的产量提高了14.3%,当采用温度诱导型启动子Pr调控ydd G基因表达时,L-色氨酸的产量与mtr敲除菌株E.coli MT-11/p Trp-01的产量相比提高了9.3%,L-色氨酸的产量达到了39.22 g/L;而采用基因ser A的天然启动子调控ydd G表达时,菌体的生长受到了明显抑制,L-色氨酸产量仅有27.1 g/L的色氨酸。综上,大肠杆菌基因mtr的敲除和基因ydd G的过表达均可以有效提高工程菌株生产色氨酸的能力。

福州市城市生活饮用水水源地水质状况及大肠杆菌生长影响因素的研究

为了解福州市城市生活饮用水水源水质状况,于2004年～2007年分别对福州市主要的6个水源地的水质状况每月进行一次取样,进行化学指标及毒理学指标的检测分析。监测结果表明,福州市主要供水的原厝、义序、鳌峰洲、马尾、城门、塘坂水源水质合格率较高,毒理学指标和化学指标全部达标。城门、义序、鳌峰洲水厂的部分指标数值较高,主要项目为大肠杆菌。水体中细菌数量的变化与有机磷含量有一定的相关关系。本文进一步就洗衣粉中的磷对大肠杆菌的生长影响进行了研究,结果表明洗衣粉中的磷对大肠杆菌有明显的促生长效果。

致病性大肠杆菌肠炎36例分析

977例急性腹泻患儿中致病性大肠杆菌检出率为3.68%,其血清分型以 OB和 OB为主,发病季节多见于夏秋季,2步以下发病率最高占80.6%,临床症状以轻度至中度腹泻为主,无明显全身症状,症状的表现与血清型无明显关系。

雏鸽源发性大肠杆菌的分离鉴定及血清分型

对发病死亡雏鸽进行解检,通过细菌培养分离、生化特性、致病性试验及血清学鉴定,从中分离出3株大肠杆菌,表明致病菌是大肠杆菌。使用大肠杆菌O型抗原鉴定,鉴定出2株2个血清型,分别为o44、o86,表明了在同一个场同时存在多种大肠杆菌血清型。为本地区今后对大肠杆菌病的预防和控制提供了有意义的参考价值。

尿感方对尿道致病性大肠杆菌感染膀胱上皮细胞感染早期分泌IL-6、IL-8的影响

目的:观察尿感方对尿道致病性大肠杆菌(UPEC)感染人膀胱上皮细胞(BECs)感染早期分泌白介素(IL)-6、IL-8的影响。方法:通过UPEC感染HTB-9细胞模型,采用酶联免疫吸附法,观察尿感方(原药、大鼠含药尿液、健康人含药尿液)对感染早期膀胱上皮细胞分泌IL-6、IL-8的影响。结果:UPEC感染BECs 1h后,与模型组比较,尿感方原药组受感染BECs分泌的IL-6、IL-8均显著增多(P<0.01,P<0.05);与模型组和大鼠空白尿液组比较,尿感方大鼠含药尿液组受感染BECs分泌的IL-6、IL-8均显著增多(P<0.01);与模型组和健康人空白尿液组比较,尿感方健康人含药尿液组受感染BECs分泌的IL-6、IL-8均显著增多(P<0.01)。结论:尿感方能促进UPEC感染早期的BECs分泌IL-6和IL-8。

晚期妊娠宫内感染253例临床分析

目的探讨晚期妊娠宫内感染的病因、主要致病菌、对母儿的影响及防治措施。方法对上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院2006年1月1日至2011年12月31日诊断为晚期妊娠宫内感染的253例患者资料进行回顾性分析。根据分娩孕周分成早产组(82例)及足月组(171例),比较两组病例的临床结果及母儿预后等。结果 6年来宫内感染的病例数占同期分娩总数的0.41%,其中早产宫内感染占早产总数的2.36%。早产组胎膜早破率、产褥感染率、新生儿感染率及围产儿病死率均高于足月组(P<0.05)。宫内感染主要致病菌群依次为B族链球菌(20.6%)、大肠埃希菌(19.4%)、粪肠球菌(18.9%)。宫内感染病例剖宫产率76.7%、产褥感染率14.2%、新生儿感染率20.9%、围产儿病死率3.2%。结论宫内感染尤其是早产宫内感染对母儿预后造成严重威胁。应加强孕期保健及期待治疗、产程过程中的管理,积极预防与及时诊治宫内感染以改善母儿预后。

尿感方抗尿道致病性大肠杆菌侵袭膀胱上皮细胞的作用研究

目的观察尿感方抗尿道致病性大肠杆菌(uropathogenic Escheriehia coli,UPEC)侵袭膀胱上皮细胞的作用,并探讨其作用机制。方法通过UPEC感染人膀胱癌细胞5637(human bladder cancer cell 5637,HTB-9)侵袭模型,观察尿感方含药尿液保护膀胱上皮细胞抗UPEC侵袭的作用;同时采用分子生物学技术,观察其对Toll样受体4(TLR4)/环磷酸腺苷(c AMP)信号传导通路的主要环节:TLR4、腺苷酸环化酶3(AC3)、环磷酸腺苷(c AMP)、蛋白激酶A(PKA)和Rac-1的影响。结果与大鼠空白尿液高剂量组(体积分数10%空白尿液)比较,尿感方大鼠含药尿液高剂量组(体积分数10%含药尿液)的细菌入侵率降低;与模型组比较,大鼠空白尿液组的细菌入侵率无显著性差异。与大鼠空白尿液高剂量组比较,尿感方大鼠含药尿液高剂量组增加了TLR4、AC3蛋白的表达及胞内c AMP的水平,促进了PKA活化,抑制了Rac-1的活性。结论尿感方具有一定的抗UPEC侵袭膀胱上皮细胞的作用,其作用机制与影响TLR4/c AMP信号传导通路的环节有关。

ICU内超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的检测及耐药性分析

目的了解重症监护病房（ICU）超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的检出率及耐药情况，为临床抗感染治疗提供依据。方法对我院ICU2008年1月至2010年12月住院患者分离出的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌，采用NCCLs推荐的纸片扩散表型确证试验进行ESBLs细菌的检测，药敏试验采用琼脂扩散（K—B）法。结果90株肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中检出产ESBLs菌49株，总检出率为54．4％（49／90）；其中肺炎克雷伯菌产ESBLs检出率为52．5％（31／59）；大肠埃希菌产ESBLs检出率为58．1％（18／31）；以呼吸道标本的检出率最高，占75．5％（37／49）。产ESBLs菌对青霉素类和头孢菌素类抗菌药物均高度耐药，对氨基糖苷类、喹诺酮类等呈多重耐药，对哌拉西林／他唑巴坦、头孢哌酮／舒巴坦、头孢西丁、阿米卡星的耐药率均较低；对亚胺培南全部敏感。产ESBLs菌株对抗菌药物的耐药率明显高于非产ESBLs菌株。结论ICU内产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希检出率较高，对大多数抗菌药物耐药且呈多重耐药性，亚胺培南是治疗产ESBLs菌感染的首选药物。及时检测ICU内产ESBLs菌及其耐药情况对指导临床用药至关重要。

肠出血性大肠杆菌O-104:H4型感染

出血性大肠杆菌(EHEC)O-104:H4能产生一种类志贺样毒素,此毒素可以直接导致肾脏和内皮细胞的损伤,而且可以黏附在肠上皮细胞导致血性腹泻,严重者可并发溶血性尿毒症。EHEC O-104:H4的传播途径主要通过被污染的食物、水源及接触传播。"芽苗菜"为本次德国暴发的急性肠道传染病疫情源头。当前最主要的任务是需要对EHEC O-104:H4感染设计和筛选出特效的抗生素并进行前瞻性研究。现已研制的EHEC O-157:H7 ghost口服疫苗,可为O-104:H4型大肠杆菌疫苗研制提供借鉴。

两种常见耐药菌抗菌药物耐药情况的社会经济负担研究

目的以碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌和头孢噻肟耐药大肠埃希菌为例，开展细菌耐药性的社会经济负担研究。方法引入伤残调整寿命年、健康效用值等指标，进行细菌耐药情况的社会经济学分析。结果经测算，2015年全国抗菌药物临床应用监测网187所成员单位住院患者因肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌耐药造成的经济负担分别高达26049．89万元、35232．58万元；患者因疾病所致的伤残引起的健康寿命损失年分别为4658．02年、6634．97年。结论本研究尝试引人伤残调整寿命年、健康效用值等指标，提供了一种从疾病经济负担角度科学测算耐药性经济影响的思路。