柴胡四物汤对围绝经期综合征模型大鼠血清E_(2)水平、子宫形态及ERα表达的影响

目的:通过观察柴胡四物汤对围绝经期综合征模型大鼠血清E_(2)水平、子宫形态及子宫、下丘脑ERα表达的影响,初步探讨柴胡四物汤治疗围绝经期综合征的作用机制。方法:将75只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、西药组、柴胡四物汤高、中、低剂量组,采用双侧卵巢切除法造模,选取符合条件的60只大鼠纳入实验,每组10只。从术后第14天开始,连续给药28 d。给药结束后,观察各组大鼠子宫指数及形态学的改变;采用ELISA法检测血清E_(2)水平;采用RT-PCR法及Western Blot法检测子宫、下丘脑ERα的表达水平。结果:与假手术组比较,模型组血清E_(2)水平明显下降(P<0.01),子宫湿重、子宫指数显著下降(P<0.01),子宫体积明显缩小,宫腔变窄,腺体数量较少,内膜及肌层萎缩,子宫ERαmRNA及蛋白的表达水平明显下降(P<0.01),下丘脑ERαmRNA及蛋白的表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,西药组、柴胡四物汤高、中剂量组血清E_(2)水平明显升高(P<0.01),西药组、柴胡四物汤高、中、低剂量组的子宫指数明显上升(P<0.01),子宫腺体数量增加,内膜及肌层的萎缩程度有所缓解,西药组、柴胡四物汤高、中剂量组子宫ERαmRNA表达水平增加(P<0.01),西药组、柴胡四物汤高剂量组子宫ERα蛋白表达水平增加(P<0.01),西药组、柴胡四物汤高、中、低剂量组下丘脑ERαmRNA及蛋白的表达水平降低(P<0.01)。结论:柴胡四物汤可改善围绝经期的各类症状,其作用机制可能与升高围绝经期综合征模型大鼠血清E_(2)水平,改善子宫指数及萎缩程度,提高子宫ERα的表达并同时下调下丘脑ERα的表达有关。

蛋壳形成过程中部分生殖激素及其受体基因变化规律的研究

为了解蛋鸡产蛋过程中相关激素和受体基因的变化规律,试验采用放射免疫技术(RIA)和荧光定量PCR技术对蛋壳形成过程中血清孕酮(P4)、雌二醇(E2)2种激素含量的动态变化和孕酮受体(PR)、雌激素受体(ERα)在输卵管子宫部的表达进行测定。结果表明:蛋进入子宫前1小时孕酮含量最高,与其他时间点相比差异极显著(P<0.01),蛋进入子宫部后孕酮含量逐渐下降,直到产蛋后1小时孕酮含量开始上升;雌二醇含量在蛋进入输卵管子宫部15小时最高,蛋排出时最低,产蛋后1小时开始升高;蛋壳形成过程中PGRmRNA的变化趋势是下降-上升-下降,蛋进入输卵管子宫部15小时PGR表达量较蛋排出时有极显著提高(P<0.01),之后PGR表达量开始下降;在蛋壳形成过程中ERα表达量呈先上升后下降的趋势,在蛋进入输卵管子宫部45分钟时ERα表达量最高,与蛋排出时、产蛋后1小时相比差异极显著(P<0.01)。

经前平颗粒对经前期综合征肝气逆证模型大鼠下丘脑雌二醇α和孕酮受体表达的影响

目的:研究经前平颗粒对经前期综合征肝气逆证模型大鼠下丘脑中雌二醇α受体和孕酮受体表达的影响。方法:以情志刺激多因素法复制经前期综合征肝气逆证大鼠模型,经前平颗粒预防给药(10 g.kg-1,灌胃给药,连续5 d),采用免疫荧光细胞化学技术结合流式细胞仪检测大鼠下丘脑中雌二醇α受体和孕酮受体的蛋白表达量。结果:模型组大鼠下丘脑中雌二醇α受体和孕酮受体蛋白表达量与正常组相比显著降低(P<0.01),经前平颗粒组下丘脑中雌二醇α受体和孕酮受体蛋白表达量较模型组显著升高,接近于正常水平。结论:经前平颗粒可以上调下丘脑雌二醇α受体和孕酮受体蛋白表达水平,这可能是其治疗经前期综合征肝气逆证的作用机制之一。

葛根素对小鼠长骨雌激素受体α(ERα)表达的影响

目的:研究葛根素对长骨骺板雌激素受体亚型ERα分布及含量的影响,并与内源性雌激素作用相比较,探讨葛根素对骨的作用机制。方法:取16 d胎龄雌性小鼠前肢尺骨,置于BGJb培养基中,葛根素(10-6,10-5和10-4 mol·L-1)和雌二醇(10-6 mol·L-1)作用48 h后固定脱钙,HE染色,光镜下计数骨干破骨细胞数及肥大区软骨细胞数;免疫组织化学染色,光镜下观察阳性细胞定位,图像分析系统下测定免疫反应阳性细胞数和阳性细胞面积。结果:葛根素组及雌二醇组与空白对照组相比软骨均增粗、变长,静止区、增殖区和肥大区细胞数目增多,骨化区破骨细胞数量减少。空白对照组骺板肥大区有ERα免疫反应阳性的软骨细胞,表达较弱,静止区、增殖区几乎没有表达。经葛根素或10-6 mol·L-1的雌二醇作用48 h后,与空白对照组相比,肥大区表达明显增强,静止区、增殖区也均有ERα表达,葛根素作用明显弱于雌二醇。结论:葛根素能够促进软骨内成骨,其作用可能与其上调ERα的表达有关。

系统性红斑狼疮患者中性激素对淋巴细胞功能影响的研究

目的:通过检测SLE患者外周血淋巴细胞ERα的表达及外周血淋巴细胞功能的变化,探讨SLE发生过程中性激素对淋巴细胞功能的影响。方法:收集33例SLE患者和31例正常对照者血样,采用ELISA法检测外周血雌二醇(Estradiol,E2)、睾酮(Testosterone,T)水平,MTT法检测ConA刺激T淋巴细胞增殖反应,RT-PCR法检测外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)、T淋巴细胞和B淋巴细胞雌激素受体α(Estragen receptor,ERα)mRNA的表达。结果:与健康对照者相比较,SLE患者外周血T淋巴细胞增殖的刺激指数(Stimulating index,SI)降低(P<0.01),E2水平升高,T降低,但P>0.05,E2/T比值明显升高(P<0.01),淋巴细胞ERα mRNA的表达均明显升高(P<0.01)。结论:SLE患者性激素水平的改变可通过淋巴细胞ERα,影响淋巴细胞的功能,参与SLE的发生。

雌激素受体α和胰岛素样生长因子1对小鼠前列腺平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨在雌激素对前列腺平滑肌细胞(PSMC)生物学效应中,雌激素受体α(ERα)和胰岛素样生长因子1(IGF1)对细胞增殖的影响。方法:构建pGSadeno-ERα腺病毒载体,体外转染原代培养的小鼠PSMC后,以半定量逆转录PCR和Western印迹分别检测ERαmRNA和蛋白质的表达;成功获取ERα下调细胞后,加入10-8mol/L17β雌二醇,6h后Western印迹检测细胞IGF1的表达;以噻唑蓝比色分析法(MTT法)评价转染后雌激素或外源性IGF1对PSMC的增殖活性。结果:加入17β雌二醇后,正常对照组PSMC增殖明显,IGF1基因表达水平明显增高(P<0.05);而在ERα下调细胞组中,PSMC增殖、IGF1基因表达水平均无明显变化(P>0.05)。外源性IGF1作用于ERα下调的PSMC后,未能激活细胞增殖(P>0.05)。结论:雌激素在对PSMC的生物学效应中,通过ERα的介导刺激产生IGF1,并且IGF1在ERα的共同参与下促进细胞的增殖。

卵巢癌中E2通过ERα降低顺铂敏感性的研究

目的:探讨顺铂治疗的卵巢癌中铂抵抗与雌激素受体(ERα)及17β-雌二醇(E2)之间的关系。方法:以卵巢癌细胞系Caov-3和Ovcar-3作为研究模型,分别给予不同药物处理,并设计ERα-siRNA对ERα进行下调,研究在不同处理方式下卵巢癌细胞的增殖及凋亡水平,同时分析顺铂对ERα磷酸化、蛋白激酶B(Akt)和细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)的调节。结果:在卵巢癌细胞中,E2通过ERα促进细胞增殖,并降低卵巢癌细胞对顺铂的敏感性;ER拮抗剂ICI 182780(ICI)可以增强卵巢癌细胞对顺铂的敏感性;顺铂通过激活ERK诱导ERα的磷酸化,其磷酸化位点为丝氨酸118;下调ERα后,E2对顺铂细胞毒性的拮抗作用降低,且经E2处理后,卵巢癌细胞的抗凋亡蛋白Bcl-2表达上调,细胞的凋亡降低。结论:卵巢癌中,ERα在顺铂抵抗中扮演重要角色,E2通过诱导ERα激活并降低凋亡,进而降低顺铂的细胞毒性。因此在铂抗性卵巢癌的治疗中,ERα可能是一个潜在的治疗靶标。

雌激素通过α受体亚型途径促进内皮祖细胞增殖和迁移的研究

目的观察1 7β雌二醇(雌二醇)及其选择性雌激素α受体激动剂(PPT)、β受体激动剂(DPN)对内皮祖细胞(EPC)增殖和迁移能力的影响。方法将培养的EPC分别加入不同浓度雌二醇、PPT、DPN(分别为1×10^(-10)、1×10^(-9)、1×10^(-8)、1×10^(-7)mol/L)进行培养后,分为雌二醇组、PPT组、DPN组和对照组。采用异硫氰酸荧光素标记荆豆凝集素I、DiI标记乙酰化低密度脂蛋白双染及CD1 33免疫荧光鉴定。并进行细胞增殖能力分析、EPC计数和流式细胞技术检测EPC细胞周期,Transwell技术检测EPC迁移能力的影响。结果与对照组比较,雌二醇组、PPT组吸光度值、细胞周期细胞比例、EPC迁移数目明显升高(P<0.05);与DPN组比较,雌二醇组和PPT组吸光度值、细胞周期细胞比例、EPC迁移数目明显升高(P<0.05);与DPN组(2.21±0.99)×10~5个EPC比较,雌二醇组(2.83±0.29)×10~5个和PPT组(2.56±0.11)×10~6个明显增多(P<0.05)。结论雌二醇主要通过α受体亚型途径刺激EPC的增殖和迁移。

无精子症患者雌二醇与雌激素受体α、β间的相关性及其对精子的影响

目的探讨无精子症患者雌二醇(E_2)与雌激素受体(ER)α、ERβ间的相关性及其对精子的影响。方法选择45例无精子症患者,检测其外周血中的促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、E_2、ERα、ERβ水平;行睾丸穿刺,观察取得的生精小管中有无精子,检测上清液中的E_2、ERα、ERβ水平。根据睾丸穿刺结果和FSH水平,将患者分为有精子低FSH组(睾丸穿刺有精子,FSH<8U/L)、无精子低FSH组(睾丸穿刺无精子,FSH<8U/L)、无精子高FSH组(睾丸穿刺无精子,FSH>8 U/L),每组15例。比较3组患者外周血FSH、LH水平,以及外周血与睾丸组织中的E_2、ERα、ERβ水平,分析FSH、LH、E_2、ERα、ERβ间的直线相关关系。结果 3组间患者外周血中的E_2、ERα、ERβ和睾丸组织中的E_2水平的差异均有统计学意义(P值均<0.05);有精子低FSH组、无精子低FSH组、无精子高FSH组患者外周血中ERα、ERβ水平和睾丸组织中的E_2水平均逐渐升高(P值均<0.05),外周血中的E_2水平逐渐降低(P值均<0.05)。3组间睾丸体积和睾丸组织中的ERα、ERβ水平的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。外周血中的FSH水平与外周血中的E_2水平呈负相关(r=-0.522,P=0.026),与外周血中的ERα水平(r=0.766,P=0.001)、外周血中的ERβ水平(r=0.723,P=0.001)和睾丸组织中的E_2水平(r=0.597,P=0.019)呈正相关;外周血中的LH水平与睾丸组织中的E_2水平(r=0.610,P=0.016)呈正相关;外周血中的E_2水平与外周血中的ERα水平(r=-0.777,P=0.001)、外周血中的ERβ水平(r=-0.709,P=0.003)和睾丸组织中的E_2水平(r=-0.537,P=0.018)呈负相关;睾丸组织中的E_2水平与睾丸组织中的ERα水平(r=0.681,P=0.004)、睾丸组织中的ERβ水平(r=0.802,P=0.000)呈正相关。结论睾丸体积正常的无精子症患者,随着睾丸生精功能的降低,外周血中的E_2水平降低,而外周血中的ERα和ERβ水平升高,正/负反馈作用于促性腺激素FSH。随着FSH水平的升高,正反馈调节睾丸组织中的E_2水平升高,可能对生精过程的发生有一定的影响。

雌激素及雌激素α受体XbaⅠ和PvuⅡ基因多态性与宫颈癌关系的研究

目的：探讨内源性雌激素及雌激素α受体（ERα）XbaⅠ和PvuⅡ基因多态性与宫颈癌发生的关系，以及两者在宫颈癌发生中的交互效应。方法：采用频数匹配的病例对照研究方法，选择在山西省肿瘤医院经病理学确诊的102例宫颈癌新发患者为病例组，以同期在同一医院确诊、相同数量的子宫肌瘤患者为对照组，采集其月经周期第8～10天空腹静脉血，应用ELISA法测定血清雌二醇（E2）水平，利用PCR-RFLP技术检测ERα XbaⅠ和PvuⅡ基因多态性。结果：病例组E2水平（47．57±14．27）ρg／mL，显著高于对照组（26．10±12．34）ρg／mL，差异有统计学意义，t=6．85，P〈0．001。XbaⅠXX／Xx基因型频率病例组（42．2％）低于对照组（56．9％），差异有统计学意义，χ^2=4.41, P=0.052；调整aOR=0．57（95％CI：0．33～0．97），而PvuⅡ基因（PP／Pp）频率在病例组和对照组间差异无统计学意义。交互作用分析显示，XbaⅠXX／Xx基因型频率与E2水平在宫颈癌发生中存在拮抗作用。结论：内源性雌激素水平异常增高可增加宫颈癌发生的危险性，而ERα XbaⅠ XX／Xx基因型可降低罹患宫颈癌的风险，两者之间可能存在拮抗效应。

卵泡未破裂黄素化患者子宫内膜中雌、孕激素受体及整合素αVβ3的表达及其意义

目的研究卵泡未破裂黄素化（LUF）患者子宫内膜中雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）及整合素αVβ3的表达，探讨其对子宫内膜容受性的影响。方法选择2007年5～11月在武汉大学人民医院生殖医学中心拟行冻融胚胎移植的17例发生LUF的不孕患者为LUF组，选择同期排卵周期正常的13例不孕患者作为对照组。于两组患者黄体生成素（LH）峰出现后第7～11天刮取子宫前、后壁获取子宫内膜组织，免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）连接法检测子宫内膜中ER、PR及整合素αVβ3的表达；同时采用化学发光法测定两组患者血清雌二醇、孕酮水平；分析LUF组患者子宫内膜中整合素αVβ3表达水平与血清雌二醇、孕酮水平的关系。结果（1）LUF组及对照组患者血清雌二醇水平分别为（656±299）和（727±275）pmol／L，两组间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；孕酮水平分别为（23±8）和（35±10）nmol／L，两组间比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）LUF组患者子宫内膜中ER及PR的表达水平分别为（183．9±2．4）、（168±3）分，均高于对照组[分别为（109．4±6．3）、（106±4）分]，整合素αVβ3的表达水平为（115±11）分，低于对照组[（191±9）分]，两组间分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。（3）LUF组患者子宫内膜中整合素αVβ3的表达水平与血清孕酮水平呈正相关关系（r=0．77，P〈0．01），而与血清雌二醇水平无关（r=0．01，P〉0．05）。结论LUF患者子宫内膜中ER及PR的表达升高，整合素αVβ3的表达降低，可能导致子宫内膜容受性受损，从而影响胚胎的着床。

雌二醇对EOMA细胞增殖、ERα、ERβ及VEGF表达的影响

目的探讨17β-雌二醇(E2)对鼠源性血管瘤血管内皮细胞(EOMA细胞)生长,雌激素α、β受体亚型(ERα、β)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法用1、10、100nmol/L浓度的E2分别作用于EOMA细胞,同时设对照组(不加E2)。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同时间点其对EOMA细胞生长的影响;Western blot检测EOMA细胞的ERα、β表达强度;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中VEGF的分泌水平。结果 1nmol/L E2组在36h时高于对照组(P<0.05);10nmol/L E2组、100nmol/L E2组各个时间点OD值均明显高于对照组(P<0.05),36h时OD值最高(P<0.01)。E2作用下10nmol/L E2组ERα和ERβ水平及100.0nmol/L E2组ERα水平较对照组均明显增高(P<0.05)。24、48h时,各浓度E2组与对照组的VEGF水平比较均差异有统计学意义(P<0.05),48h时100nmol/L E2组和10nmol/L E2组VEGF水平均高于1nmol/L E2组(P<0.05)。结论 E2可促进EOMA细胞增殖,可能主要通过ERα、VEGF表达水平上调来实现。

内分泌及化疗对ER^+乳腺癌CD44^+CD24^(-/low)细胞亚群的实验与临床研究

目的:探讨内分泌治疗及化疗对雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性的乳腺癌CD44+CD24-/low细胞亚群的影响。方法:用3个浓度的雌二醇(estradiol,E2)和E2+他莫西芬(tamoxifen,TAM)处理乳腺癌MCF-7细胞,用工作浓度的化疗药物(多西他赛、紫杉醇、表柔比星和5-氟尿嘧啶)处理MCF-7细胞,FCM法检测各组细胞中CD44+CD24-/low的细胞比例,并检测ER+的转移性乳腺癌(metastatic breast cancer,MBC)患者化疗前、后外周静脉血中CD45-CD44+CD24-/low的细胞比例。结果:不同浓度E2培养MCF-7细胞10和20d后,CD44+CD24-/low细胞比例均高于对照组,E2+TAM组低于相应浓度E2组。各化疗药物作用MCF-7细胞24h后,CD44+CD24-/low细胞比例均上升;而继续培养至20d后,CD44+CD24-/low细胞比例降低。部分缓解和疾病稳定的MBC患者,化疗后外周血CD45-CD44+CD24-/low细胞比例降低;而疾病进展者化疗后外周血CD45-CD44+CD24-/low细胞比例上升。结论:E2促进MCF-7细胞中CD44+CD24-/low细胞亚群的生长,TAM可抑制MCF-7细胞中CD44+CD24-/low细胞亚群的生长;MCF-7细胞中CD44+CD24-/low细胞亚群对多西他赛、紫杉醇、表柔比星和5-氟尿嘧啶均有抵抗能力;化疗有效患者外周血中CD45-CD44+CD24-/low细胞比例降低。

Wnt／LRP5／β-catenin信号通骨质疏松发病中的作用路在绝经后

目的探讨Wnt／LRP5／β-catenin信号通路在绝经后骨质疏松发病中的作用。方法选取50只6月龄雌性Wistar大鼠，随机分为对照组（n=24）和去卵巢组（n=26），去卵巢组大鼠行双侧卵巢切除术，对照组打开大鼠腹腔后不作任何处理即缝合。去卵巢后0、4和8周分别测定两组大鼠血雌二醇水平和骨密度，4和8周用逆转录-PCR技术检测骨组织中低密度脂蛋白受体相关蛋白5（LRP5）、β连环蛋白（p-catenin）及骨形成关键基因——runt相关基因2（Runx2）mRNA的表达。结果去卵巢组大鼠术后4和8周，出现雌二醇水平明显下降，术后4周时为（92±15）pmol／L，对照组为（117±29）pmol／L；术后8周时为（95±22）pmol／L，对照组为（114±15）pmol／L；两组分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。术后4周时去卵巢组骨密度为（0．076±0．016）g／cm^2，对照组为（0．098±0．016）g／cm^2；术后8周时去卵巢组为（0．052±0．013）g／cm^2，对照组为（0．095±0．028）g／cm^2；两组分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。去卵巢组大鼠术后4周骨组织中LRP5、β-catenin和Runx2mRNA表达水平明显减少，分别为0．97±0．04、0．58±0．05、0．86±0．03，对照组为1．02±0．06、1．04±0．05、1．07±0．21，两组各指标分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论Wnt／LRP5／β-catenin信号通路抑制可能是绝经后骨质疏松重要发病机制之一。

雌二醇通过雌激素受体α介导调控Cyclin D1在小鼠前列腺平滑肌细胞中的表达

目的观察雌激素受体OL（ERα）在17β-雌二醇（E2）促进小鼠前列腺平滑肌细胞（PSMC）增殖中的作用，探讨E2对PSMC的作用机制。方法构建pGSadeno—ERα腺病毒载体，体外转染原代培养的小鼠前列腺平滑肌细胞（PSMC），将实验细胞分组：实验组；ERα基因下调组，细胞转染ERα干扰序列腺病毒；阴性对照组，细胞转染无义序列腺病毒；正常对照组，正常的小鼠PSMC。各组分别加入1×10^-8mol／L E2，72h后流式细胞仪检测细胞增殖，Western blot检测细胞内Cyclin D1基因表达。结果E2作用细胞72h后，实验组细胞G0／G1期的比率（71．76±1．78）％显著高于阴性对照组（51．73±1．86）％和正常对照组（47．90±0．79）％，差异有统计学意义（P〈0．05）；相对应的PI值：实验组（28．24±1．78）显著低于阴性对照组（47．27±1．86）和正常对照组（52．10±0．79）比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；实验组细胞内CyclinD1基因表达水平显著低于对照组。结论雌激素在对前列腺平滑肌细胞的生物学效应中，通过雌激素受体α 的介导调控了细胞周期素CyclinD1的表达，从而促进细胞的增殖。

植物雌激素非基因组效应研究的现状与将来

植物雌激素具有类雌激素效应,其药理作用体现在防治骨质疏松、心血管疾病和肿瘤等方面,但具体机制尚不明确。近年来,雌激素受体α介导的快速非基因组效应已被确定在雌激素相关疾病发病机制中起着重要作用。植物雌激素通过非基因组效应发挥药理作用的机制研究也越来越受到关注。本文总结了雌激素受体α介导的非基因组效应的研究进展,分析了快速非基因组效应介导某些植物雌激素药理作用的可能,并展望了植物雌激素在雌激素受体α介导的非基因组效应研究领域中的发展前景。