Isolation of a novel antifungal peptide from the bark of Eucommia ulmoides Oliv

A novel Eucommia antifungal peptide, named EAFP3, was isolated from the bark of Eucommia ul- moides by NaC1 extract, gel filtration and reverse phase high performance liquid chromatography. The molecular mass of EAFP3 is 4157.3 Da, and its partial amino acid sequence is -. LYQQLIAGITLNK.-. EAFP3 exerts an inhibitory activity against Candida albicans in vitro and the drug concentration required for 50% growth inhibition （IC50） is 31.25μg/mL.

超声提取法对杜仲不同“发汗”品经不同加工炮制后总黄酮成分的影响研究

目的:比较杜仲生品及不同发汗品经四种不同炮制方法对杜仲总黄酮成分的影响,为杜仲加工炮制提供依据。方法:将杜仲生品及不同发汗品经姜制、酒制、盐制、蜜制四种炮制后制备各样品,用芦丁作对照品,采用紫外分光光度法,于510 nm波长处,分别测定不同发汗品经四种炮制后超声提取物中的总黄酮含量。结果:杜仲生品及不同发汗品不同炮制方法对杜仲总黄酮的含量有影响,烘至半干后“发汗”品(E5)酒制品总黄酮含量最高。结论:若以杜仲总黄酮为主的药理作用进行临床应用时,建议杜仲采取烘至半干“发汗”后采用酒制处理的加工炮制方法。

杜仲皮中木脂素类化学成分及其对高糖诱导的肾小球系膜细胞保护作用研究

研究杜仲皮中的木脂素类化学成分,并评价其对高糖诱导的人肾小球系膜细胞的保护作用。将杜仲树皮粉碎后,纯化水提取,采用HPD-100大孔吸附树脂、硅胶、Sephadex LH-20、半制备高效液相色谱等方法进行分离,根据理化性质和波谱学方法鉴定化合物结构,从杜仲皮水提物中分离鉴定了6个木脂素类化合物,包括caruilignan D(1)、(-)-表松脂素(2)、(+)-松脂素4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、(-)-松脂素4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、(+)-中脂素4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)和(+)-中脂素4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6),化合物1为首次从杜仲中分离得到。在高糖诱导异常增殖的肾小球系膜细胞模型中,采用MTT法检测木脂素类化合物干预后的细胞活力。化合物5能剂量依赖性地抑制细胞增殖,对高糖诱导的肾小球系膜细胞具有保护活性。

重构本草——杜仲

通过古籍文献调研、中药现代研究进展及其研究成果的梳理,结合中医临床及中药学等学科领域内的专家学者的认识及应用经验,经讨论认为杜仲:功效主要为补肝肾、强筋骨、安胎。症靶为腰痛、胎动不安。标靶为高血压。现代药理发现杜仲及其有效成分具有降血压、预防骨质疏松、拮抗子宫收缩、抗炎、保护神经等作用。本品无毒,但阴虚火旺者慎用。临床使用剂量为3~60 g,内服时当根据不同疾病,或同一疾病的不同阶段进行辨证使用,并积极探索杜仲用量与症靶、标靶的量效关系构建。

杜仲含药血清诱导骨髓间充质干细胞定向分化的实验研究

目的研究补肾中药杜仲含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及定向分化的影响。方法将第4代MSCs以5×106接种于9块96孔板,3组,每组8孔;2块6孔板,每板3孔,2 d后换液,加入诱导液。分为空白组、地塞米松组、杜仲组。空白组加入含10%胎牛血清(FBS)的L-DMEM培养基继续培养,地塞米松组在基础培养基加入诱导剂(含β甘油磷酸钠10mmol/L,地塞米松0.1μmol/L,维生素C 50 mg/L),杜仲组为含10%杜仲含药血清的L-DMEM培养基。分别自加诱导液第1天起,采用MTT法测量96孔板细胞数,每天1块板;在第10天取出1块6孔板做ALP染色;第20天做6孔板茜素红染色。结果杜仲含药血清组OD值呈现出明显的上升趋势,而空白组和地塞米松组无明显上升趋势;第10天杜仲组及地塞米松组ALP染色阳性,第13天起可见白色钙结节,第20天茜素红染色阳性。结论杜仲含药血清能促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,并刺激细胞增殖。

杜仲总黄酮对成骨细胞增殖及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的了解杜仲总黄酮对新生大鼠颅骨体外培养成骨细胞的增殖及合成胶原蛋白的影响。方法杜仲总黄酮以质量浓度10,100,200和400μg·mL-1分别加入从2 d的SD大鼠颅骨分离培养的成骨细胞中,用MTT法评价对成骨细胞增殖的影响;采用激光共聚焦扫描显微镜检测Ⅰ型骨胶原蛋白的表达情况。结果与对照组比较,质量浓度10200μg·mL-1的杜仲总黄酮能明显促进成骨细胞的增殖（P〈0.05）,但并不能显著地促进成骨细胞合成Ⅰ型胶原蛋白。

细辛、杜仲及其合剂对亚急性衰老小鼠睾丸及血清睾酮影响的实验研究

目的研究细辛、杜仲及其合剂对亚急性衰老小鼠睾丸、精子及血清睾酮的影响。方法选昆明系雄性小鼠,用D-半乳糖制备衰老模型。应用光镜、电镜技术检测细辛、杜仲及其合剂治疗前后衰老小鼠睾丸及精子的形态学改变;放射免疫技术检测血清睾酮的变化。结果衰老小鼠睾丸重量减轻,生精细胞缺如,精子密度及活动率下降,血清睾酮含量明显降低(模型组与青年组比较:P<0.01);用药后,睾丸重量增加,生精小管增粗,生精细胞增多,生精过程活跃,精子密度及活动率明显提高,血清睾酮含量增加(P<0.05)。合剂组的作用优于杜仲组和细辛组(P<0.05)。结论细辛,杜仲及其合剂可改善衰老小鼠的生精功能,明显抑制衰老小鼠血清睾酮含量的下降,具有一定延缓衰老的作用。

杜仲不同部位总黄酮含量及抗氧化活性研究

目的:比较杜仲皮、叶、雄花及籽中总黄酮含量与抗氧化活性。方法:采用紫外分光光度法测定各部位总黄酮含量;以半数清除/还原浓度(IC_(50))值为评价指标,对各部位样品进行清除2,2′-联氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS^+)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基试验以及对铜离子(Cu^(2+))的还原能力试验,并以维生素C为阳性对照。结果:杜仲不同部位总黄酮含量由高到低为叶>雄花>皮>籽,其中除杜仲皮与籽总黄酮含量比较差异无统计学意义外(P>0.05),其余各部位间比较差异均有统计学意义(P<0.05);各样品对ATBS^+、DPPH自由基清除作用由强到弱为叶>雄花>籽>皮,其中除杜仲叶与雄花比较各指标差异无统计学意义外(P>0.05),其余各部位间比较差异均有统计学意义(P<0.05);各样品对Cu^(2+)还原能力由强到弱为叶>雄花>皮>籽,其中叶、雄花与皮、籽比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:杜仲叶与雄花部位总黄酮含量较高、抗氧化活性较强,可进行相应的开发利用以弥补传统药用部位杜仲皮资源的不足。

不同变异类型杜仲皮中几种主要活性成分含量的比较

采用反相高效液相色谱法测定了不同变异类型杜仲皮中几种关键活性成分的含量,结果表明:4种变异类型杜仲皮中5种不同活性成分的含量及组成比有较大差异,其中京尼平苷酸(GPA)、京尼平苷(GP)、松脂素二糖苷(PDG)、绿原酸(CA)含量以及5种成分的总含量以光皮型和浅纵裂型杜仲皮较高,而龟裂型和深纵裂型活性成分总体含量较低。若遴选优质杜仲药用资源,可首先考虑从优良光皮型和浅纵裂型杜仲群体中开展选育工作。

杜仲皮蛋白对霉菌的抑制作用

用纸片琼脂扩散法,研究了杜仲皮蛋白和多菌灵对木霉、青霉、根霉的抑制作用。结果表明,杜仲皮蛋白对这三种霉菌均有明显抑制作用,最小抑菌浓度分别为912.5、912.5和456.3μg/ml。多菌灵对木霉、青霉、根霉的最小抑菌浓度均为456.3μg/ml。

杜仲皮蛋白对植物病原真菌的抑制作用

用纸片琼脂扩散法研究了杜仲皮蛋白对植物病原真菌的抑制作用。抗真菌活性分析表明,杜仲皮蛋白对测试的小麦赤霉病(Gibberella zeae)、玉米大斑病(Exserohilum turcicum)、马铃薯晚疫病(Phytophthora infestans)、辣椒枯萎病(Capsicum wilt)、水稻纹枯病(Rhizoctonia solani)、黄花菜链格孢病(Alternaria spp.)等植物病原真菌有抑制作用。杜仲皮蛋白对小麦赤霉病抑菌圈直径最大为2.03cm,对辣椒枯萎病抑菌圈直径为1.47cm。杜仲皮蛋白粗提物对小麦赤霉病和辣椒枯萎病的最小抑菌质量浓度(MIC)为228.1mg/L,对玉米大斑病和马铃薯晚疫病的MIC为435.6mg/L,对水稻纹枯病和黄花菜链格孢病的MIC为912.5mg/L。

不同变异类型杜仲皮及再生皮中木脂素类成分含量比较

为分析比较不同类型杜仲皮和再生皮中木脂素类活性成分的差异性,利用高效液相色谱法分别测定了深纵裂型、浅纵裂型、龟裂型、光皮型杜仲皮及再生皮中9种木脂素类活性成分的含量。结果表明:木脂素类主要药用活性成分松脂素二糖苷、丁香素二糖苷及9种活性成分总含量均以光皮型杜仲皮中最高;不同类型杜仲皮中木脂素类活性成分组成比都以松脂素二糖苷最高,以丁香素最低。研究表明光皮型、浅纵裂型杜仲皮和再生皮中9种木脂素类成分的含量相对较高,杜仲再生皮中木脂素类成分与杜仲原生皮相比没有明显差异。

复方杜仲健骨颗粒治疗膝关节骨性关节炎Ⅲ期临床试验总结

目的 :评价复方杜仲健骨颗粒治疗膝关节骨性关节炎 (肝肾不足、筋脉瘀滞证 )的临床疗效、不良反应和毒副作用。方法 :采用随机对照方法 ,复方杜仲健骨颗粒试验组 30 0例与壮骨关节丸对照组 10 0例对比研究。结果 :①试验组治疗单项症状前后比较有非常显著性差异 ,治疗单项症状均有效。②试验组中医证候积分治疗前后比较均有非常显著性差异 ,试验组与对照组组间积分下降值比较有非常显著性差异 ,试验组疗效明显优于对照组。③两组患者起效时间比较有非常显著性差异 ,试验组起效明显优于对照组。④试验组临床总有效率为 92 % ,显效以上率为 4 7% ,与对照组相比 ,具有非常显著性差异 ,试验组总疗效明显优于对照组。⑤在治疗过程中 ,无明显不良反应 ,对心、肝、肾、血象等均无不良影响。说明复方杜仲健骨颗粒确有滋补肝肾、养血荣筋、通络止痛的功效。结论 :复方杜仲健骨颗粒在目前的口服剂量、疗程范围内 ,用药安全 ,无毒副作用 ,是一种治疗膝关节骨性关节炎安全有效的药物。

应用水螅再生试验初探杜仲等中药的致畸作用

目的:探索三种安胎中药—杜仲、黄芩、苎麻根的发育毒性。方法:利用成体水螅与胃区体水螅形态学变化、中效中毒浓度与中效再生抑制浓度的比值(T50/I50)及Wilby评价标准,初步研究杜仲、黄芩、苎麻根的致畸作用。结果:致畸效用评价实验中,杜仲、黄芩、苎麻根的T50/I50比值分别为0.9、3.2、1.9,并呈剂量—反应关系;抗秋水仙碱抑制细胞分化实验中,杜仲还具有拮抗秋水仙碱对胃区体水螅分化再生的抑制作用,并呈较好的剂量—反应关系。结论:杜仲显示致畸作用阴性,有促进水螅分化及拮抗秋水仙碱抑制分化的作用;黄芩为致畸作用明显物质;苎麻根则显示致畸作用阳性。

杜仲内树皮化学组成及抽提成分的研究(英文)

研究了杜仲内树皮及其抽提物的一般物、矿物质、脂肪酸与单糖的化学组成。结果表明，碳水化合物（92．97％）、钙（5．1769mg／g）、α-亚麻酸（27．4％）及葡萄糖（130．51mg／g）分别是杜仲内树皮的一般物、矿物质、脂肪酸与单糖的主要组成成分。采用Sephadex LH-20柱色谱及薄层色谱等方法，从其70％丙酮提取物水溶性部分分到5种化合物，经波谱分析及理化性质化舍物分别鉴定为：紫云英苷（1）、异槲皮苷（2）、槲皮素-3-O-木糖葡萄糖苷（3）、异绿原酸A（4）、异绿原酸C（5）。化合物3—5为首次从该植物中分得。

地黄杜仲汤联合羟基脲对老年慢性粒细胞白血病患者的临床疗效及对预后的影响

目的:探讨地黄杜仲汤联合羟基脲对老年慢性粒细胞白血病患者的临床疗效以及对预后产生的影响。方法:选取2012年3月至2015年7月在沈阳军区总医院接受治疗的老年慢性粒细胞白血病患者70例作为本次研究对象,采用随机数表法将他们分为治疗组和对照组各35例,对照组患者给予地黄杜仲汤治疗,治疗组患者给予地黄杜仲汤联合羟基脲治疗,比较2组患者治疗后的临床疗效、生存率以及不良反应发生情况。结果:治疗后,治疗组患者的总缓解率为94.28%高于对照组68.57%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗组患者治疗后的≥6年生存率为80.00%,对照组为34.28%,治疗组高于对照组,2组比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗组患者治疗后出现恶心呕吐、白细胞低、肾功能异常以及肝功能异常等不良反应的发生率明显低于对照组患者,2组患者进行比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:地黄杜仲汤联合羟基脲治疗老年慢性粒细胞白血病临床效果显著,降低不良反应,延长患者的生存期。

杜仲水提液对嗜酸乳杆菌生长及发酵产物的影响

制备5种不同质量浓度的杜仲水提液添加到MRS培养基中对嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CICC6005进行培养,旨在探究不同质量浓度的杜仲水提液对L.acidophilus CICC6005增殖情况及对发酵过程中胞外和胞内蛋白含量变化的影响,并对其蛋白组分进行分析。发酵所得胞外和胞内蛋白分别用三氯乙酸-丙酮沉淀法和试剂盒法获得,采用Sephadex G-100凝胶层析分离技术对胞外和胞内蛋白分离纯化,用二喹啉甲酸法和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分别测得各组分蛋白的含量及分子质量。结果显示:当培养基中添加的杜仲水提液质量浓度为0.125 0 g/m L时,对菌体增殖有明显的促进作用,菌体生物量最大(4.38×108 CFU/m L),同时在此质量浓度时菌体胞外和胞内蛋白含量也达到最大值;胞外和胞内蛋白经过Sephadex G-100凝胶层析分离后均得到2个明显的蛋白峰,胞外蛋白两组分分子质量分别为67、31 ku,胞内蛋白两组分分子质量分别为57、17 ku。综上,添加适宜质量浓度的杜仲水提液对L.acidophilus CICC6005的增殖起到了一定的促进作用,并对其发酵产物组成产生了一定的影响。

杜仲对去势大鼠骨细胞及骨髓间充质干细胞BMP-2表达的调节作用

目的:观察中药杜仲在干预去势大鼠骨质疏松过程中对骨细胞BMP-2表达的调节作用,以及杜仲水提取物和醇提取物对大鼠骨髓间充质细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)BMP-2表达的影响。方法:80只4月龄雌性SD大鼠随机分成4组,假手术组、模型组、阿尔法骨化醇(法能)组和杜仲实验组。除假手术组打开腹腔,暴露卵巢后即缝合外,其他3组均摘除双侧卵巢。大鼠手术10天后,阿尔法骨化醇组和杜仲实验组分别用阿法骨化醇软胶囊和盐杜仲灌胃,另外2组正常饲养。3个月后,解剖取股骨,4%多聚甲醛固定,三天后浸入4%EDTA溶液中脱钙,4周后进行冰冻切片,免疫组化测定BMP-2表达。取盐杜仲粉末2g,分别加水/甲醇至15ml,室温震荡1小时,静置过夜后,经15000rpm离心10min,弃沉淀。水浸上清不经处理即得水提取物;甲醇浸上清经真空浓缩,再加水至15ml溶解剩余物后,得醇提取物。水/醇提取物均经0.22μm膜过滤,-20℃保存。取2月龄SD大鼠骨髓细胞,置含20%小牛血清的DMEM/F12培养基中,37℃,5%CO2培养,传代3次后进行杜仲水/醇提取物诱导,诱导物分为10-2、10-3、10-4、和10-54个稀释度并分为4个重复组。诱导6天后,免疫组化测定BMP-2表达。结果:杜仲实验组大鼠骨切片中的BMP-2的表达量明显高于模型组,杜仲水/醇提取物对大鼠MSCs的BMP-2表达具有显著刺激作用,醇提取物的作用大于水提取物,并且10-5稀释度的作用大于其他稀释度。结论:在体和离体实验均证实杜仲有干预去势大鼠骨质疏松的作用与调节BMP-2表达相关。

不同产地杜仲树皮含胶特性的变异规律

为了弄清杜仲树皮含胶特性的地理变异规律 ,为杜仲高产胶产业化基地的选择提供科学依据 ,选择我国主要杜仲产地和主要引种区共 16个产地作为研究对象。采用选择典型样株和随机取样的方法 ;含胶率的测定采用杜仲胶综合提取法 ;利用SAS软件进行统计分析。结果表明 ,不同产地 10a生杜仲胸径、树皮厚度和树皮含胶率均存在极显著差异。北方产区杜仲胸径和树皮厚度普遍高于南方产区 ;在纬度相似的地区 ,东部产区高于西部产区。杜仲皮的含胶率大体上随着纬度的增加而呈逐步减小趋势 ,南方产区杜仲皮的含胶率一般比北方产区高。海拔越高、年降雨量越大、年均气温越高、无霜期越长 ,越有利于杜仲皮内杜仲胶的形成和积累 ,树皮含胶率越高。

杜仲原生皮与再生皮中松脂醇二葡萄糖苷的含量比较

目的:为了评价杜仲再生皮质量,测定了杜仲三次再生皮中降压有效成分松脂醇二葡萄糖苷(P inores-inol d iglucoside,PDG)含量。方法:采用HPLC法,色谱柱为国产YWG C18柱(46×250 mm,10μm),以甲醇-水(30∶75)为流动相,流速1.0 m l/m in,柱温为室温,检测波长为277 nm,进样量为10μl。结果:第一次剥皮后的再生皮中PDG含量略高于原生皮;第二次剥皮后的再生皮中PDG含量与剥皮前的一次再生皮相当;第三次剥皮后的再生皮中PDG含量明显低于剥皮前的二次再生皮。结论:为了保证药材质量,杜仲剥皮再生可进行两次,每次间隔时间不少于5年,第三次剥皮后的再生皮中PDG含量有待提高。