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内源性禽白血病病毒ev/J gp85基因的表达 被引量:1
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作者 梁雄燕 杨玉莹 +1 位作者 张莹 钟蓓 《长江大学学报(自科版)(中旬)》 CAS 2009年第1期54-58,共5页
从已构建的质粒pGEM-MTCgp85中酶切回收ev/J gp85基因,通过构建杆状病毒转移载体pFast-Bac1-ev/Jgp85和重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-ev/Jgp85,将ev/Jgp85基因转入Bac-to-Bac高效真核表达系统的Sf9昆虫细胞进行真核表达。间接免疫荧光试... 从已构建的质粒pGEM-MTCgp85中酶切回收ev/J gp85基因,通过构建杆状病毒转移载体pFast-Bac1-ev/Jgp85和重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-ev/Jgp85,将ev/Jgp85基因转入Bac-to-Bac高效真核表达系统的Sf9昆虫细胞进行真核表达。间接免疫荧光试验显示,构建的重组杆状病毒感染的Sf9细胞出现与野生型杆状病毒感染的Sf9细胞阴性对照明显不同的亮绿荧光;Western blot分析DAB显色,重组病毒感染的Sf9细胞蛋白显示出约35ku的阳性条带。结果表明,内源性ev/Jgp85基因在Sf9细胞中得到良好的表达,并且其编码产物完全可以被外源性ALV-J的特异性单抗JE9识别。 展开更多
关键词 内源性禽反转录病毒 ev/j GP85基因 表达
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内源性禽白血病病毒ev/J基因克隆与分析
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作者 杨玉莹 梁雄燕 +3 位作者 秦爱建 顾玉芳 张莹 钟蓓 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第10期3-7,共5页
用位于内源性禽白血病病毒ev/J 5′和3′长末端序列(LTR)上的引物,对我国的灵山麻鸡、江汉鸡、肉鸡和SPF鸡正常基因组中内源性ev/J进行扩增,结果扩增出长约为4 kb、2.2 kb和2 kb 3种大小的片段。测序分析表明,这些片段分属于Ⅱ型和Ⅳ型e... 用位于内源性禽白血病病毒ev/J 5′和3′长末端序列(LTR)上的引物,对我国的灵山麻鸡、江汉鸡、肉鸡和SPF鸡正常基因组中内源性ev/J进行扩增,结果扩增出长约为4 kb、2.2 kb和2 kb 3种大小的片段。测序分析表明,这些片段分属于Ⅱ型和Ⅳ型ev/J以及另一类具有更大缺失的ev/J基因。ev/J在这几个品系鸡中分布并不完全相同,肉鸡和SPF鸡均具有Ⅱ型和Ⅳ型ev/J,江汉鸡只含Ⅱ型ev/J,而灵山麻鸡则含有另一类具有更大缺失的ev/J基因。此次获得的Ⅳ型ev/J序列不仅相互之间高度同源,而且其env基因与外源性ALV-J原型株HPRS-103env基因以及我国外源性ALV-J主要分离株env基因也高度同源,表明内源性ev/J在宿主正常基因组中高度保守。 展开更多
关键词 内源性禽白血病病毒ev/j 基因克隆 序列分析
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Expression of Endogenous Retrovirus ev/J gp85 Gene and Analysis of Its Immunoreactivity in Comparison with Exogenous Viral Protein
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作者 Yu-ying YANG Ai-jian QIN +1 位作者 Xiong-yan LIANG Shu-mei TONG 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2008年第5期369-377,共9页
The envelope gene gp85 of ev/J, a new family of endogenous avian retroviral sequences identified recently, has the most extensive nucleotide sequence identity ever described with ALV-J avian leukosis virus. This repor... The envelope gene gp85 of ev/J, a new family of endogenous avian retroviral sequences identified recently, has the most extensive nucleotide sequence identity ever described with ALV-J avian leukosis virus. This report described expression of ev/J envelope gene gp85 derived from commercial meat-type chicken using the Invitrogen Bac-to-Bac baculovirus expression system. The antigenicity and immunoreactivity of the recombinant endogenous gp85 gene product (SU) were analyzed by indirect immunofluorescence, Western blot, indirect and blocking Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA) using JE9 monoclonal antibody (MAb) against the envelope protein of ALV-J (ADOL-4817), positive mouse antiserum against the ev/J gp85 SU and sera from chicken naturally infected with ALV-J. The results showed that the ev/J gp85 SU can bind specifically to JE9 MAb and antiserum from chicken naturally infected with ALV-J, and the binding reactivity between exogenous ALV-J gp85 SU and natural positive chicken serum against exogenous ALV-J can be blocked by positive mouse serum against the ev/J gp85 SU. It is concluded that recombinant endogenous gp85 gene product (SU) has close immunological relatedness to the envelope protein of exogenous ALV-J (ADOL-4817 and IMC10200 strain). 展开更多
关键词 Avian endogenous retrovirus ev/j Envelope gene gp85 EXPRESSION IMMUNOREACTIVITY
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湖北省鸡群内源性禽白血病病毒分子特征研究 被引量:3
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作者 温凌子 杨玉莹 +3 位作者 梁雄燕 顾玉芳 多婷 易艳芳 《长江大学学报(自科版)(中旬)》 CAS 2013年第2期49-52,8,共4页
为了解内源性禽白血病病毒在我国鸡群中的存在状况,利用特异性引物对湖北省鸡群—江汉鸡和灵山麻鸡的鸡胚中内源性禽白血病病毒进行了PCR检测。结果显示,所有的鸡胚中均检测出内源性禽白血病病毒EAV、ev、ev/J和ART-CH基因序列。进化树... 为了解内源性禽白血病病毒在我国鸡群中的存在状况,利用特异性引物对湖北省鸡群—江汉鸡和灵山麻鸡的鸡胚中内源性禽白血病病毒进行了PCR检测。结果显示,所有的鸡胚中均检测出内源性禽白血病病毒EAV、ev、ev/J和ART-CH基因序列。进化树分析发现,相对于内源性病毒原型株E51,江汉鸡的EAV基因组更加接近于原型株EAV-0;江汉鸡和灵山麻鸡的ART-CH核苷酸序列之间相似度很高,但与已知的ART-CH5和ART-CH14核苷酸序列存在较大差异;尽管江汉鸡和灵山麻鸡的ev和ev/J核苷酸与其他已知的ev和ev/J的相关序列差异较小,但其在系统进化树上仍属于不同的分支。该结果说明江汉鸡和灵山麻鸡的内源性病毒基因的进化路径与其他已知的内源性病毒基因的进化路径不同。 展开更多
关键词 内源性禽白血病病毒 ev基因座 ev/j ART-CH
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表达日本乙型脑炎病毒E蛋白重组伪狂犬病病毒SA215(E)的构建 被引量:5
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作者 徐静 郭万柱 卫龙兴 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期182-186,共5页
将日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)CQRC-1株的E基因通过RT-PCR产生,克隆到pMD18-T simple载体中,再亚克隆到转移载体pPI-2.EGFP中,命名为PPE。PPE质粒和伪狂犬病毒(PRV)SA215株DNA通过磷酸钙共转染方法转染到Vero细... 将日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)CQRC-1株的E基因通过RT-PCR产生,克隆到pMD18-T simple载体中,再亚克隆到转移载体pPI-2.EGFP中,命名为PPE。PPE质粒和伪狂犬病毒(PRV)SA215株DNA通过磷酸钙共转染方法转染到Vero细胞上。通过有限稀释法、噬斑纯化、PCR检测、Southern杂交、West杂交,获得了表达JEV E蛋白的重组伪狂犬病病毒,命名为SA215(E)。结果表明,SA215(E)在生长曲线、噬斑形态及大小、在Vero细胞上的病变与PRV SA215一致。安全性试验表明,SA215(E)对小鼠和兔具有较高的安全性,SA215(E)具有很强的免疫原性。接种兔能预防致死剂量的PRV Fa肌肉内攻毒;接种小鼠能预防致死剂量的JEV CQRC-1株腹膜内攻毒。表明该重组病毒是养猪业控制伪狂犬病和乙脑最适合的候选疫苗株之一。 展开更多
关键词 重组病毒 乙脑病毒E蛋白 疫苗
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洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡禽内源性反转录病毒基因检测与分析
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作者 李拓凡 梁雄燕 +2 位作者 叶丽珣 万亮 杨玉莹 《湖北农业科学》 2016年第7期1762-1765,共4页
为了解禽内源性反转录病毒(AERs)在湖北地方鸡种洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡基因组中的存在状况,利用禽内源性反转录病毒EAV、ev loci和ev/J特异性引物对两种鸡的基因组进行PCR检测。结果表明,洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡中均检测出EAV、ev loci和e... 为了解禽内源性反转录病毒(AERs)在湖北地方鸡种洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡基因组中的存在状况,利用禽内源性反转录病毒EAV、ev loci和ev/J特异性引物对两种鸡的基因组进行PCR检测。结果表明,洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡中均检测出EAV、ev loci和ev/J三种禽内源性反转录病毒基因序列;核酸序列同源性分析显示,洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡基因组中的EAV、ev loci和ev/J之间的同源性分别为98.8%,99.6%和99.6%;进化树分析显示,两种鸡内的三种禽内源性反转录病毒均分别位于进化树的同一分支,表明洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡内源性反转录病毒具有共同的祖先并且进化路径相似。洪山鸡和麻城绿壳蛋鸡的ev/J与ALV-J原型株HPRS-103同源性高于98%,且进化树处于同一分支。而与ALV-J国内分离株SD9901、YZ9901毒株的同源性较低,并且进化树位于不同分支,表明这两种鸡的ev/J可能与ALVJ原型株HPRS-103亲缘关系更近,而与国内的外源性ALV-J分离毒株SD9901、YZ9901亲缘关系较远。 展开更多
关键词 禽内源性反转录病毒 ev LOCI ev/j
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