Quantification of six bioactive compounds in Zhenqi Fuzheng preparation by high-performance liquid chromatography coupled with diode array detector and evaporative light scattering detector

A simple and accurate high-performance liquid chromatography（HPLC）coupled with diode array detector（DAD）and evaporative light scattering detector（ELSD）was established for the determination of six bioactive compounds in Zhenqi Fuzheng preparation（ZFP）.The monitoring wavelengths were 254,275 and 328 nm.Under the optimum conditions,good separation was achieved,and the assay was fully validated in respect of precision,repeatability and accuracy.The proposed method was successfully applied to quantify the six ingredients in 31 batches of ZFP samples and evaluate the variation by hierarchical cluster analysis（HCA）,which demonstrated significant variations on the content of these compounds in the samples from different manufacturers with different preparation procedures.The developed HPLC method can be used as a valid analytical method to evaluate the intrinsic quality of this preparation.

HPLC-ELSD同时测定腺梗豨莶草中6个二萜成分的含量

为了研究腺梗豨莶草中6个二萜成分(对映海松烯型二萜:奇任醇、Hythiemoside B和豨莶精醇;对映贝壳杉烷型二萜:对映-17,18-二羟基-贝壳杉烷-19-羧酸、对映-16β,17-二羟基-贝壳杉烷-19-羧酸和对映-16α氢-贝壳杉烷-17,19-二羧酸)的含量,本试验建立了高效液相色谱法-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)同时测定二萜类化合物含量。样品粉碎过筛加甲醇和乙酸乙酯回流提取,蒸发减压除去溶剂,甲醇溶解,0.45μm滤膜滤过,取续滤液进行测定。色谱条件:色谱柱为Waters Symmetry Shield^(TM)RP18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.3%甲酸水溶液-乙腈(v/v),梯度洗脱,流速为1.0 mL/min。蒸发光散射检测器漂移管温度为103℃,雾化气流速为3.0 L/min。应用该方法测定腺梗豨莶草样品不同部位中6个二萜类化合物的含量,同时比较叶、枝、茎中对映海松烯型二萜、对映贝壳杉型二萜和总二萜含量的差异。结果显示,6个二萜成分在其线性范围内线性关系良好(r≥0.9992);日内和日间精密度相对标准偏差(RSD)均小于3.5%;回收率介于96.5%~101.5%,RSD均小于2.3%;腺梗豨莶草不同部位(叶、枝、茎)的二萜类化合物含量差异较大。结果表明,本试验所建立的HPLC-ELSD方法简便、准确、重复性好,为腺梗豨莶草药材全面的质量评价和临床应用中最佳药用部位的选择提供了参考。

高效液相-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)测定红参中的精氨酸单糖苷(AF)及精氨酸双糖苷(AFG)含量

目的建立一种同时测定人参加工品中精氨酸单糖苷(AF)和精氨酸双糖苷(AFG)含量的方法。[方法]用PrevailTMC18column(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱进行检测。流动相A:色谱乙腈,流动相B:5.0mmol/L七氟丁酸的0.7%三氟醋酸溶液。色谱条件为[0%A(0 min);0%A(5 min);15%A(8 min);35%A(25 min)];流速0.8 mL/min;漂移管温度为115℃;气体流量3.2 L/min。[结果]AF和AFG的检测限分别为0.015和0.010 mg/mL;线性关系相关系数分别为,AF:0.9997,AFG:0.9999,表明线性关系良好。AF和AFG检测的精密度,重复性,稳定性以及回收率的相对标准偏差分别为0.43%&0.37%,0.43%&0.55%,0.43%&0.49%,0.45%&0.15%。AF和AFG检测的回收率分别为99.5%&100%,表明方法稳定。经检测,高丽红参,中国红参和生晒参中AF含量分别为0.74%,0.91%和1.14%,AFG含量分别为6.69%,5.12%和0.85%。[结论]这种方法成功用于高丽红参,中国红参及生晒参中AF及AFG的检测;且红参中AF和AFG含量明显高于生晒参。该方法测定结果可靠,缩短了测定时间,较少杂质干扰。但因为本研究考察氨基酸种类较少,当衍生物种类较多时,仍需进一步考察其分离度。

RP-HPLC-ELSD法测定逍遥颗粒中柴胡皂苷c、a、d的含量

目的:采用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测(RP-HPLC-ELSD)法同时测定逍遥颗粒中柴胡皂苷c、a、d三种成分的含量。方法:采用安捷伦(Agilent)SB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈(A)-水(B)。梯度洗脱程序为0~18min,30%A;18~26min,35%~45%A;26~35min,45%~55%A。流速为1.0ml/min,柱温为30℃,气体流速为2.5L/min,蒸发温度为60℃,进样量为10μl。结果:柴胡皂苷c、a、d分别在0.950~19.000μg、1.088~21.760μg、1.520~30.400μg的范围内线性关系良好。柴胡皂苷c平均回收率为99.49%,RSD为0.35%(n=9);柴胡皂苷a平均回收率为99.99%,RSD为0.66%(n=9);柴胡皂苷d平均回收率为99.12%,RSD为0.47%(n=9)。结论:该方法准确、灵敏、重复性好,可作为逍遥颗粒中柴胡皂苷c、a、d的含量测定方法。

HPLC-ELSD法测定梅子提取物中糖和糖醇的含量

建立了一种高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)同时测定梅子提取物中果糖、葡萄糖、山梨醇、蔗糖、麦芽糖水合物、麦芽三糖、麦芽四糖的方法。分离采用Grace Prevail Carbohydrate ES色谱柱,柱温为30℃;流动相为乙腈-水,流速为1.00 mL/min;检测使用蒸发光散射检测器,漂移管温度为60℃,氮气流速为2.50 L/min。结果表明,果糖、山梨醇、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖水合物、麦芽三糖、麦芽四糖分别在34.69~2 220.00、16.22~1 038.00、38.66~2 474.00、24.53~1 570.00、22.91~1 466.00、6.09~390.00、14.69~940.00μg/mL范围内线性关系良好,精密度良好,重复性的相对标准偏差(RSD)为1.00%~4.09%,各目标物的回收率为85.5%~110.1%,精密度为0.3%~4.6%(n=6)。本方法在30 min内实现了糖和糖醇的分离,灵敏度和重复性检测较好,有效避免了溶剂及温度的影响,测量结果较准确且操作方便,可用于批量检测梅子提取物中糖和糖醇的含量。

超临界流体-蒸发光散射法测定常见油脂类药用辅料皂化后的脂肪酸组成及其在油脂鉴别中的应用

脂肪酸是油脂类药用辅料的重要组成成分,可直接反映油脂类药用辅料及制剂的质量和安全性。本研究利用超临界流体色谱-蒸发光散射检测器,建立了同时测定肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、二十二烷酸和木蜡酸6种脂肪酸的分析方法。为避免脂肪酸与酯相互转化而造成的脂肪酸种类与含量测定偏差,本方法采取先皂化后测定的方式,并系统优化了实验条件,实现了6种脂肪酸的定量分析。在优化的实验条件下,6种脂肪酸可在12 min内实现高效分离,并且在各自的质量浓度范围内线性关系良好,检出限和定量限分别为5~10 mg/L和10~25 mg/L,加标回收率为80.93%~111.66%。本文所建立方法灵敏,高效,重复性和稳定性好,满足油脂类药用辅料中脂肪酸的分析要求,并成功应用于5种常见油脂类药用辅料(玉米油、大豆油、椰子油、橄榄油、花生油)中6种脂肪酸的含量测定;同时结合主成分分析方法,实现了对不同油脂类药用辅料的准确判别,为油脂类药用辅料的快速鉴别和掺伪分析提供了有价值的参考。

Separation and Detection of Ceramides by HPLC Followed by Evaporative Light-Scattering Detection and Thin Layer Chromatography

Ceramides are important signaling molecules involved in a variety of cellular processes, including cell growth, differentiation, and apoptosis. Currently, different methods are used for ceramide analysis, some of which are insensitive or cumbersome. This paper described methods utilizing thin layer chromatography (TLC) and high-performance liquid chromatography (HPLC) followed by evaporative light scattering detection (ELSD) to detect ceramide directly in cell extracts without derivatization, which was proved to be efficient and reproducible. Five kinds of ceramides were used as standards. Both TLC and normal-phase HPLC/ELSD results indicate that yeast contains several kinds of ceramides.

高效液相色谱-蒸发光散射检测法同时测定口腔护理产品中10种季铵盐类杀菌剂

建立了同时测定口腔护理产品中10种季铵盐类杀菌剂的高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)检测方法。在采用无水硫酸钠脱水后的膏体样品和粉末样品中加入乙醇,常温超声提取;液体样品用乙醇稀释。采用Acclaim Surfactant色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)进行分离,以50 mmol/L乙酸铵缓冲溶液(pH=5.5)和乙腈为流动相进行梯度洗脱,外标法定量。结果表明,10种目标化合物在25 min内完成色谱分离,检出限(信噪比(S/N)=3)和定量限(S/N=10)分别为1.42~3.31 mg/L和4.25~9.94 mg/L。十八烷基二甲基苄基氯化铵和二十二烷基三甲基氯化铵在10~200 mg/L范围内线性关系良好,其余目标物在5~100 mg/L范围内线性关系良好,10种季铵盐类杀菌剂的相关系数(R^(2))均不小于0.9992。以阴性样品牙膏(膏体)、漱口水(液体)和洁牙粉(粉末)为样品基质,在不同添加水平下,10种季铵盐类杀菌剂的平均回收率为87.9%~103.1%,相对标准偏差(RSD,n=6)均不大于5.5%。本方法在液相色谱分离时采用表面活性剂色谱柱,目标化合物均获得较好保留,同时采用蒸发光散射检测器,部分无紫外吸收的目标化合物也能得到较高响应。通过添加适量无水硫酸钠去除膏体样品中的水分,有利于样品前处理和保护色谱柱。本方法精密度好,准确度高,适用于各种口腔护理产品中季铵盐类杀菌剂的测定,为口腔护理产品的质量安全监控提供了参考。采用本方法对109个常用口腔护理产品进行测定,十六烷基二甲基苄基氯化铵和十八烷基二甲基苄基氯化铵的检出率较高,1个牙膏样品中十八烷基二甲基苄基氯化铵的含量超出法规要求,测定值为1511 mg/kg。

不同炮制方法对巴戟天中耐斯糖和甲基异茜草素-1-甲醚含量的影响

目的挖掘古籍中的经典炮制方法,考察不同炮制方法对巴戟天中耐斯糖和甲基异茜草素-1-甲醚的质量分数的影响。方法采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)和高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD)分别测定5种炮制方法巴戟天中耐斯糖和甲基异茜草素-1-甲醚的质量分数。结果不同炮制方法巴戟天中耐斯糖、甲基异茜草素-1-甲醚的质量分数明显不同:耐斯糖,米炒巴戟天>蒸制巴戟天>甘草制巴戟天>盐制巴戟天>古法巴戟天;甲基异茜草素-1-甲醚,盐制巴戟天>甘草制巴戟天>蒸制巴戟天>米炒巴戟天>古法巴戟天。结论不同炮制方法对巴戟天中耐斯糖以及甲基异茜草素-1-甲醚的质量分数影响较大,其中米炒巴戟天的耐斯糖质量分数较高,盐制巴戟天的甲基异茜草素-1-甲醚质量分数较高。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定戊二胺的成分含量

利用反向液相色谱串联蒸发光检测器开发建立了一种新的检测戊二胺分析方法。蒸发光检测器通用性好,克服了戊二胺无紫外及可见光吸收特性所带来的的缺点。采用依利特C18色谱柱分离,甲醇-水进行洗脱,蒸发光检测器进行检测,以外标法定量。通过此方法,在10 min内可以实现戊二胺及其原料L-赖氨酸的分离与含量测定。此两种物质的分离度可达到2以上,戊二胺的线性范围(94.5~1890)μg/mL,L-赖氨酸的线性范围(95~1890)μg/mL,相关系数(r)为0.9992~0.9999,线性关系良好,3个不同浓度水平的加标实验表明,戊二胺的回收率为97.05%~100.16%,RSD值为0.42%~1.46%。此方法操作简单,灵敏度高准确性好,测试效率高,适用于生物合成戊二胺及尼龙56等过程中的分析检测。

HPLC-ELSD法测定异帕米星含量

目的 探讨利用HPLC 蒸发光散射检测器 (ELSD)测定异帕米星含量的方法。方法 色谱条件为 :ZorbaxSB C18色谱柱 (15 0mm× 4 6mm ,5 μm ) ,流动相 :0 5 %五氟丙酸水溶液—甲醇 (4 2∶2 2 ,V/V) ,流速 :0 64ml/min ;漂移管温度 110℃ ,载气流速 2 65L/min。利用阿米卡星为对照绘制随行标准曲线 ,根据测定的异帕米星标准品的峰面积值确定含量 ;并与经典的微生物检定法对测定结果的准确性进行验证。结果 该方法的重复性、灵敏度均较理想 ;HPLC 蒸发光散射检测器的测定结果 (69 7% )与微生物检定法的测定结果(70 7% )非常接近。结论 在没有异帕米星对照品的情况下 ,以结构相似含量已知的阿米卡星为对照 。

HPLC-ELSD法同时测定食品中的10种糖和糖醇

建立高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)同时测定食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖、赤藓糖醇、木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、麦芽糖醇的方法。方法采用Grace Previl Carbohydrate ES色谱柱,柱温30℃;乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速1.0mL/min;蒸发光散射检测器,飘移管温度95℃,氮气流量2.5L/min。结果表明:5种糖和5种糖醇均在线性0.2～20mg/mL范围内,线性良好,精密度RSD小于5%,回收率91.53%～105.2%。本方法在30min内完成了10种糖和糖醇的分离,灵敏度高,重现性好,可以用于无糖食品中糖和糖醇含量的测定。

HPLC-ELSD法测定西洋参含片中人参皂苷Rg_1、Re和Rb_1的含量

目的:建立西洋参含片中人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1的HPLC测定方法。方法:色谱柱:Alltech C_(18)柱(4.6mm×150mm,5μm),保护柱:Security Guard C_(18)(4mm×3.0mm),流动相:乙腈-水,梯度洗脱,流速1.0mL·min^(-1)。ELSD:雾化气体流速2.7L·min^(-1),漂移管温度115℃。样品经粉碎后,用70%甲醇水溶液超声提取30min,离心,取上清液过滤进样。结果:梯度洗脱时基线平直,线性范围:0.0100～1.00mg·mL^(-1);人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1的相关系数分别为0.9995,0.9996,0.9986;检出限分别为40,40,25ng(S/N>3)。加样回收率:87.8%～105.2%,RSD在1.2%～4.8%之间。结论:该方法前处理简单,分析准确、快速(一次分析在40min内完成),可作为同时测定多种人参皂苷成分含量的方法。

HPLC-ELSD法同时测定连翘叶中齐墩果酸和熊果酸

目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法(high performance liquid chromatography-evaporative lightscattering detector,HPLC-ELSD)法同时测定连翘叶中齐墩果酸和熊果酸。方法:色谱柱:Waters Symmetry C18(4.6mm×250mm,5μm);柱温25℃,流动相:甲醇-0.4%冰醋酸溶液(93:7,V/V),流速0.4mL/min;蒸发光散射检测器检测条件:漂移管温度80℃,气体压力25psi。结果:齐墩果酸在0.107～2.136μg范围内线性关系良好(r=0.9991),熊果酸在0.179～3.584μg范围内线性关系良好(r=0.9993);齐墩果酸和熊果酸的回收率分别为98.67%和9 8.5 6%。结论:此方法简便、准确,重现性良好,为评价连翘叶的质量提供可靠的分析方法。

HPLC-ELSD法测定生物柴油中的游离甘油

采用液液萃取及高效液相色谱-蒸发光散射检测技术,建立了生物柴油中游离甘油含量的测定方法。待测生物柴油经乙腈-水(75∶25)抽提并离心分离后,取部分下层水相进行分析。优化的色谱条件为:色谱柱Inertsil NH2(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水(75∶25);流速1.0 mL/min;柱温35℃;进样量30μL;ELSD载气压力360 kPa,漂移管温度28℃。结果表明,在优化条件下,生物柴油中游离甘油的含量在3.73～302.0 mg/kg范围内呈良好线性,相关系数r=0.999 8,检出限(S/N≥3)为2.1 mg/kg,其加标回收率为98%～101%,相对标准偏差(RSD)为0.59%～1.8%。方法灵敏、准确且重复性好,可为生物柴油中游离甘油含量的测定提供一种快速高效的方法。

HPLC-ELSD测定岩藻聚糖硫酸酯中L(-)岩藻糖

建立HPLC-ELSD检测岩藻聚糖硫酸酯中岩藻糖含量的方法。通过HPLC-ELSD方法检测,色谱条件为:Prevail Carbohydrate ES分析柱(5μm,4.6×250 mm),柱温:30℃,蒸发光散射检测器,漂移管温度:100℃,气流:3 L/min,流动相:80%乙腈-0.5%醋酸胺(90∶10)。结果表明,岩藻糖峰面积对数与浓度对数成良好线性关系,其线形范围为276.3μg/mL^2 210.4μg/mL,r=0.999 8(n=5)。回收率:99.97%,RSD:1.49%(n=9)。该法可准确检测岩藻聚糖硫酸酯中岩藻糖含量,各成分可良好分离,结果重现性好。

HPLC-ELSD法测定麦芽糖中葡萄糖和麦芽三糖等有关物质的含量

目的:建立 HPLC-ELSD 测定麦芽糖中葡萄糖和麦芽三糖等有关物质的方法。方法:采用 SHISEIDO CAPCELL NH_2柱(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱;流动相:乙腈-水(65:35);流速:1.0 mL·min^(-1);检测器:蒸发光散射检测器检测;柱温:室温。结果:麦芽糖和葡萄糖及麦芽三糖等有关物质分离度良好,葡萄糖和麦芽三糖的最低检出限分别为0.047μg和0.042μg。结论:本法简便、准确,专属性好,灵敏度高,可用于麦芽糖中葡萄糖及麦芽三糖等有关物质的检查。

复智散HPLC-UV/ELSD指纹图谱的研究

目的建立中药复智散提取物HPLC-UV/ELSD指纹图谱。方法采用HPLC-UV/ELSD串联检测技术,应用AlltechC18(5μm,4.6mm×250mm)色谱柱;流动相为乙腈(A)-0.1%乙酸水溶液(B),线性梯度时间洗脱程序(A)为:0,12%;25,20%;30,20%;75,30%;105,40%;120,80%;130,12%;流速:1.0ml/min;柱温:30℃;检测波长:335nm;飘移管温度80℃;氮气压力25psi。运用指纹图谱相似度评价软件,对12批复智散提取物指纹图谱进行相似度计算。结果建立中药复智散提取物指纹图谱并鉴定其5种主要成分;对UV与ELSD图谱互补性进行分析;12批复智散提取物指纹图谱相似度良好。结论该指纹图谱能同时反映复智散复方中主要化学组分特征,一次进样,可全面、稳定、有效地进行复方中药复智散的质量监督与评价。

HPLC-ELSD测定鸡蛋中胆固醇的含量

应用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）对不同种类鸡蛋中胆固醇的含量进行测定。采用C18色谱柱为固定相，以甲醇为流动相，流速为1mL·min^-1柱温为25℃；蒸发光散射检测器的氮气流速为2L·min^-1漂移管温度为85℃。结果表明，胆固醇进样量在4．008-40．080μg范围内，其对数与峰面积的对数呈良好的线性关系，相关系数R=0．9991，低、中、高三个浓度回收率为95．4％～99．1％。该方法操作简便、快速，精密度好，结果准确可靠。

HPLC-ELSD法测定去痛片中氨基比林、咖啡因、苯巴比妥和非那西丁的含量

目的:建立 HPLC-ELSD 法测定去痛片中4种成分的含量。方法:采用 Diamonsil^(TM) C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),0.1%三氟醋酸(TFA)溶液和甲醇为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为室温。ELSD 为检测器,漂移管温度为55℃,雾化气体为空气,气压为315 Pa。结果:氨基比林在0.7520～15.04μg范围内线性关系良好(r=0.9987),平均回收率为100.2%,RSD 为0.87%;咖啡因在0.2546～3.819μg范围内线性关系良好(r=0.9969),平均回收率为98.53%,RSD为0.77%;苯巴比妥在0.0757～1.514μg范围内线性关系良好(r=0.9997),平均回收率为101.6%,RSD 为0.67%;非那西丁在0.7500～15.00μg范围内线性关系良好(r=0.9963),平均回收率为101.1%,RSD 为0.47%。结论:本方法较标准方法简便、可靠,适合去痛片的含量控制。