高效液相色谱法同时测定制吴茱萸及其提取物中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯含量

目的:建立高效液相色谱法同时测定制吴茱萸及其提取物中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯含量的方法。方法:采用高效液相色谱法,Kromasail C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈-水-四氢呋喃-乙酸(51∶48∶1∶0.1),流速:1 mL.min-1;检测波长:225 nm:柱温:32℃。结果:吴茱萸碱回归方程:Y吴茱萸碱=10 300 000X-14 700,r=0.999 9,线性范围0.015～0.3μg;吴茱萸次碱回归方程:Y吴茱萸次碱=5 380 000X-6 610,r=0.999 9,线性范围0.012～0.24μg;吴茱萸内酯回归方程:Y吴茱萸内酯=227 000X-5 110,r=0.999 6,线性范围0.059～1.18μg。吴茱萸碱平均回收率为99.6%,RSD 0.65%;吴茱萸次碱平均回收率为99.1%,RSD1.2%;吴茱萸内酯平均回收率为97.5%,RSD1.4%。结论:方法简便,结果准确。

HPLC法同时测定吴茱萸中吴茱萸苦素和柠檬苦素的含量(英文)

目的 :建立吴茱萸中两种柠檬苦素类物质吴茱萸苦素和柠檬苦素含量的同时测定方法。方法 :采用反相高效液相色谱法 ,使用C18柱 ,乙腈 水 (36∶6 4 ,v/v)作为流动相 ,以 1 0ml/min流速洗脱 ,在 2 0 4nm波长下检测。结果 :吴茱萸中吴茱萸苦素和柠檬苦素分别在 4 0 4～ 4 0 4 μg·ml-1(r =0 9998,n =6 )和 3 96～ 39 6 μg·ml-1(r =0 9999,n =6 )范围内线性关系良好 ,加样回收率分别为 99 2 % (RSD 1 4 % )和 98 8% (RSD 1 2 % )。结论 :该方法准确 ,灵敏 。

吴茱萸多糖和吴茱萸内酯抗胃溃疡作用的研究

目的:研究吴茱萸多糖和吴茱萸内酯对实验性胃溃疡的作用。方法:采用冷水应激和幽门结扎法制造大鼠胃溃疡模型。实验动物分为12组,分别为空白组,模型组,吴茱萸水煎液组,吴茱萸多糖高、中、低剂量组,吴茱萸内酯高、中、低剂量组,(多糖+内酯)高、中、低剂量组,连续给药14天,第14天造模后处死大鼠并观察胃溃疡指数。结果:冷水应激实验中,水煎液组,多糖高、中、低剂量组,内酯高、中剂量组,(多糖+内酯)高、中、低剂量组的溃疡指数与模型组比较有显著性差异(P<0.05);幽门结扎实验中,水煎液组,多糖高剂量组,内酯高、中、低剂量组,(多糖+内酯)高、中、低剂量组的溃疡指数与模型组比较有显著性差异(P<0.05);吴茱萸多糖和吴茱萸内酯能显著降低溃疡指数。结论:吴茱萸多糖和吴茱萸内酯对胃溃疡有治疗作用。

吴茱萸化学成分研究

目的 研究吴茱萸的活性成分。方法 用硅胶色谱技术和重结晶等方法分离化学成分,用IR、NMR和MS 等波谱方法确定其结构。结果 获得4个化合物,分别鉴定为吴茱萸碱(Ⅰ)、吴茱萸次碱(Ⅱ)、吴茱萸内酯 (Ⅲ)和羟基吴茱萸碱(Ⅳ)。结论

反相HPLC法同时测定复方黄连素片中的8种成分

目的建立反相HPLC法同时测定复方黄连素片（盐酸小檗碱、木香、吴茱萸、白芍）中芍药内酯苷、芍药苷、盐酸小檗碱、吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、木香烃内酯和去氢木香内酯的方法。方法复方黄连素片提取物的定量分析采用月旭XB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈（A）-0.03 mol/L磷酸二氢钾水溶液（B）,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;柱温25℃;检测波长220 nm。结果芍药内酯苷、芍药苷、盐酸小檗碱、吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、木香烃内酯和去氢木香内酯分别在0.054~0.804μg、0.080~1.21μg、0.132~1.99μg、0.034~0.504μg、0.035~0.519μg、0.031~0.468μg、0.048~0.714μg、0.053~0.792μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,加样回收率（n=6）分别为100.2%、99.2%、99.5%、99.2%、98.8%、100.5%、98.6%、99.0%,RSD分别为1.7%、1.5%、1.2%、1.9%、2.0%、1.9%、1.8%、1.0%。结论在80%甲醇溶液和超声30 min的提取条件下,该方法适用于复方黄连素片中这8个成分的测定。

吴茱萸中4种单体成分致肾细胞毒性的初步研究

目的探讨吴茱萸中成分吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯和辛弗林在体外对人胚肾细胞(HEK-293)的影响。方法采用MTT法检测吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯和辛弗林对肾细胞活力的影响;给药后检测肾细胞培养上清液中的功能性指标乳酸脱氢酶(LDH)含量;采用倒置相差显微镜对给药后的细胞形态进行观察。结果 MTT法显示,8.3～33.2 g.mL-1的吴茱萸碱、5～40 g.mL-1的吴茱萸次碱和50～200 g.mL-1的吴茱萸内酯对HEK-293细胞活力有明显的抑制作用(P<0.01 or 0.05),辛弗林对肾细胞活力无明显影响。4.15～33.2 g.mL-1的吴茱萸碱、5～20 g.mL-1的吴茱萸次碱和50～200 g.mL-1的吴茱萸内酯能显著升高肾细胞上清液中的LDH(P<0.01),给予辛弗林后LDH无变化。给予4.15～33.2 g.mL-1的吴茱萸碱和100～200 g.mL-1的吴茱萸内酯后,肾细胞均不同程度的皱缩、减少、甚至死亡,吴茱萸次碱和辛弗林对肾细胞形态无明显影响。结论吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯对肾细胞均有毒性作用,而辛弗林对肾细胞无毒性作用。

蜜楝花及果实中吴茱萸碱、吴茱萸次碱及内酯含量积累变化研究

分析测定了不同生长时期蜜楝花及果实中吴茱萸生物碱及吴茱萸内酯含量及其积累变化。色谱条件为:色谱柱为Inertsil ODS-3C_(18)柱(4.6×150 mm,5μm),以乙腈-四氢呋喃-水(41∶1∶58)为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长225 nm,柱温30℃。蜜楝中吴茱萸内酯在49.65~248.25μg/mL范围内呈良好的线性关系,Y=1955.4X-5577.3(R^2=0.9996),平均加样回收率102.70%,RSD为3.00%(n=6);吴茱萸碱在8.88~88.80μg/mL范围内呈良好的线性关系,Y=89913X+73191(R^2=0.9990),平均加样回收率103.99%,RSD为2.18%(n=6),吴茱萸次碱在8.25~49.49μg/mL范围内呈良好的线性关系,Y=56127X-51856(R^2=0.9990),平均加样回收率103.50%,RSD为1.48%(n=6)。随着发育阶段的推移,蜜楝花、果实中吴茱萸碱、吴茱萸次碱及吴茱萸内酯的含量逐渐增加,在近成熟的果实中三种成分含量最高。研究结果表明,蜜楝果实中生物碱和吴茱萸内酯的含量丰富,可作为提取制备吴茱萸生物碱及吴茱萸内酯成分的一种植物资源,具有很好的开发利用价值。

高效液相色谱法波长切换法同时测定吴茱萸中3组分含量

目的建立同时测定吴茱萸中吴茱萸内酯、吴茱碱和吴茱萸次碱含量的高效液相色谱(HPLC)波长切换法。方法色谱柱为C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(35∶65),流速为2.0 m L/min,柱温为30℃,波长切换(0~15 min,205 nm;15.01~28 min,225 nm)。结果吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱进样量分别在0.186~3.72μg,0.040 24~0.804 8μg,0.040 08~0.801 6μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 7,0.999 9,0.999 9),平均回收率分别为96.30%,97.66%,97.46%,RSD分别为1.43%,1.32%,1.80%(n=6)。结论该法简便,快速准确,灵敏度高,重复性好,可用于吴茱萸药材的质量控制。

不同采收期对吴茱萸品质的影响

目的考察吴茱萸不同采收期的主要成分的差异,为吴茱萸药材合理利用提供参考。方法应用HPLC方法测定吴茱萸果实中吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量,以此为指标考察不同采收期药材主要成分的变化规律。结果吴茱萸品种随成熟期不同,生物碱含量呈先升高、再保持稳定、最后随药材的老熟而呈降低的趋势。结论湖南浏阳地区吴茱萸的最佳采收期是8月底,湖南浏阳地区石虎的最佳采收期是9月初,广西柳城地区疏毛吴茱萸的最佳采收期是8月中下旬,广西桂林地区疏毛吴茱萸的最佳采收期是8月中旬。

HPLC方法测定华佗再造丸中阿魏酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸内碱的研究

目的 建立HPLC法测定华佗再造丸中阿魏酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱及吴茱萸次碱的含量.方法 采用Waters SunFire C18（4.6mm×250mm,5μm）色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸进行梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,阿魏酸检测波长为323nm,吴茱萸内酯、吴茱萸碱检测波长为225nm,吴茱萸次碱检测波长为343nm,柱温30℃.结果 表明阿魏酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱分别在3.91～39.10μg·mL-1（r=1.0000）、10.70～64.20μg·mL-1（r=0.9998）、7.60～76.00μg·mL-1（r=0.9999）、3.65～36.50μg·mL-1（r=0.9999）范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率（n=6）分别为96.6%（RSD=1.0%）、98.1%（RSD=2.2%）、100.3%（RSD=0.8%）、95.3%（RSD=1.2%）.结论 本文方法简便准确,可用于华佗再造丸中阿魏酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱及吴茱萸次碱的含量测定.

HPLC同时测定吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯的含量

目的:建立高效液相色谱法同时测定吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯含量的方法。方法:采用高效液相色谱法,Hypersil ODS2 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-水梯度洗脱,0～30 min,甲醇-水(32∶68),30 min以后,甲醇-水(63:37);流速:0.8 ml/min;检测波长:225 nm;柱温:32℃。结果:吴茱萸碱的回归方程:Y=4252.1X+16.231,R2=1,线性范围0.20～4.0μg;吴茱萸次碱回归方程:Y=988.18X-18.269,R2=1,线性范围0.20～4.0μg;吴茱萸内酯回归方程:Y=131.09X-9.113,R2=0.9992,线性范围0.363～7.26μg。吴茱萸碱平均回收率为97.8%,RSD1.11%;吴茱萸次碱平均回收率为97.3%,RSD1.17%;吴茱萸碱平均回收率为97.8%,RSD2.10%。结论:该方法稳定,重现性好,操作简单。

一测多评法测定吴茱萸中吴茱萸内酯、吴茱萸碱及吴茱萸次碱的含量

目的:建立吴茱萸一测多评的含量测定方法,考察不同类型化合物之间采用相对校正因子进行一测多评含量测定的准确性和可行性。方法:以吴茱萸为研究对象,建立吴茱萸次碱与吴茱萸内酯、吴茱萸碱的相对校正因子,并用该校正因子进行吴茱萸内酯、吴茱萸碱的含量计算,实现一测多评;同时采用外标法测定药材中吴茱萸内酯、吴茱萸碱及吴茱萸次碱的含量,并比较计算值与实测值的差异。结果:11批吴茱萸药材中2种成分含量的计算值与实测值间无显著差异(RSD<5%)。结论:以外标法测定吴茱萸次碱,利用相对校正因子实现对吴茱萸内酯和吴茱萸碱测定是准确的、可行的,一测多评法可以用于特定的不同类型成分间的测定。

吴茱萸成分在大鼠肝微粒体对盐酸小檗碱代谢的影响

目的研究大鼠肝微粒体温孵系统中盐酸小檗碱代谢动力学以及吴茱萸中多种化学成分对其代谢的影响。方法采用体外肝微粒体温孵法研究盐酸小檗碱代谢的酶动力学,分别考察了温孵时间、微粒体质量浓度以及底物浓度对盐酸小檗碱代谢速率的影响,并探讨吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯对其代谢的影响。结果盐酸小檗碱在大鼠肝微粒体温孵系统中发生较强的代谢,其在大鼠肝微粒体中37℃温孵0～60 m in呈时间依赖的线性消除;当肝微粒体蛋白浓度在0.5～2.0 mg.mL-1,温孵时间为60 m in时,盐酸小檗碱代谢速率表现出微粒体蛋白浓度依赖性增快;当底物盐酸小檗碱浓度大于10.0μg.mL-1时,盐酸小檗碱的代谢速率不再随底物浓度的增加而增加,表现出明显的饱和特性。其表观酶促动力学参数,米氏常数Km为(2.41±0.617)mg.mL-1,最大反应速度Vm ax为(6.88±1.89)μg.g-1.m in-1。吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯均能显著抑制盐酸小檗碱的代谢,3个组分对盐酸小檗碱的代谢抑制常数Ki分别为(140.85±16.48),(15.34±3.04)和(25.98±6.47)μmol.L-1,其中吴茱萸次碱和吴茱萸内酯的代谢抑制作用明显强于吴茱萸碱(P<0.001)。结论盐酸小檗碱在大鼠肝微粒体内被迅速代谢;吴茱萸中化学成分吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯对盐酸小檗碱的代谢有抑制作用,此结果有可能对小檗碱体内药动学产生影响。

多指标优化吴茱萸的提取纯化工艺

目的:优选吴茱萸的提取纯化工艺。方法:以吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱转移率的综合评分为指标,采用正交试验考察溶媒倍数、溶剂浓度、提取次数和提取时间对吴茱萸醇提工艺的影响;以吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱的质量分数为指标,通过单因素试验考察吴茱萸提取液逐步水沉纯化工艺。结果:最佳提取工艺为加16倍量70%乙醇回流提取3次,每次3 h;最佳逐步水沉纯化工艺为回收乙醇,离心,取沉淀加20倍量90%乙醇超声提取15 min,离心,取上清液,加1/4倍量水进行二次水沉。结论:优选的提取、纯化工艺可确保吴茱萸中有效成分最大限度保留。

HPLC-ESI-MS同时分析萸黄连饮片及其制剂中的活性成分

目的以萸黄连为分析对象,建立萸黄连饮片及其制剂中的多成分分析方法,阐述其"反制"炮制前后的物质基础差异,探讨萸黄连"反制"炮制的科学内涵。方法首次采用高效液相-电喷雾-三重四极杆质谱(HPLC-ESI-MS)同时测定3批萸黄连饮片,以及其制剂3批香连丸、3批香连片中绿原酸、药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱、吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱8个主要活性成分的量。结果在萸黄连饮片及其制剂中均能同时检测到黄连饮片和吴茱萸饮片中的多种成分,实验结果证明萸黄连饮片中加入了吴茱萸饮片中的多种成分。结论方法学考察结果表明此方法符合测定要求,结果准确,对阐述萸黄连的物质基础和炮制机制以及萸黄连饮片及其制剂的质量控制研究具有一定的理论意义和实用价值。

HPLC波长切换技术同时测定复方黄连素片中6个成分的含量

目的：建立HPLC法同时测定复方黄连素片中芍药苷、吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、木香烃内酯、去氢木香内酯的含量。方法：采用Kromasil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈（A）-0.033 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液（B）为流动相，梯度洗脱（0～15 min，9%A;15～55 min，9%A→35%A），柱温和流速分别为35℃和1 mL·min^-1，波长切换（0～25 min，在230 nm波长下检测芍药苷;26～50 min，在215 nm波长下检测吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、木香烃内酯和去氢木香内酯）。结果：芍药苷、吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、木香烃内酯和去氢木香内酯进样量分别在0.1285～1.285、0.2008～2.008、0.1139～1.139、0.1151～1.151、0.1186～1.186和0.1034～1.034 μg范围内与色谱峰峰面积呈良好线性响应;平均回收率（n=6）分别为99.4%、98.6%、98.7%、98.9%、98.9%和98.6%，RSD分别为0.46%、0.64%、0.60%、1.1%、0.61%和0.38%。结论：该方法多种成分同时测定，操作简便、准确，重复性好，可用于复方黄连素片的质量控制。

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中的吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯及其生物利用度的研究

目的采用LC—ESI—MS／MS法同时测定大鼠血浆中的吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯，并研究这3种活性物质在大鼠体内的药动学特征。方法取100灿血浆样品，用甲基叔丁基醚-二氯甲烷（3：1）萃取，选择右啡烷为内标。采用BDSHypersil C18色谱柱（100mm×2．1mm，2．4μm），乙腈-2mmol·L^-1乙酸铵（含0．05％甲酸）（60：40）为流动相，采用AB Sciex 4000 Q TRAP型三重四级杆串联质谱，ESI源，多反应监测（MRM）正离子模式。经检测，吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯和内标的检测离子对分别为：m／z 304．3—134．4、m／z 288．1—273．3、m／z 471．3—425．2、m／z 258．0—201．0。结果血浆中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯的线性范围均为0．5～1×10^3 ng·mL^-1（r〉0．9960），提取回收率均〉70％，日内、日间RSD均〈15％。大鼠口服吴茱萸提取物后，血浆中吴茱萸碱、吴茱萸次碱及吴茱萸内酯的Cmax分别为19．02±2．15、19．83±5．83、41．61±7．48ng·L^-1，Tmax分别为1．17±0．29、1．25±0．66、0．63±0．14h，T1／2分别为4．64±2．14、5．72±1．34、4．25±1．72h；绝对生物利用度分别为16．96％±2．80％、12．02％±3．17％、5．43％±1．99％。结论所用方法准确、快速、灵敏，并成功用于临床前的药动学研究。

戊己丸UPLC-MS/MS指纹图谱研究

目的建立戊己丸UPLC-MS/MS指纹图谱分析方法,确定各色谱峰的药材来源,同时对各成分进行定性研究,为其物质基础、质量控制、研究开发和应用提供科学依据。方法采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.05%甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱;柱温40℃,体积流量0.4 mL/min,进样量2μL。利用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版"对其进行相似度评价。结果建立了戊己丸UPLC-MS/MS指纹图谱的共有模式,确定了38个共有峰,并根据对照品和参考文献定性指认了9个共有峰分别为盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、黄连碱、表小檗碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯、芍药苷,推断出4个共有峰分别为木兰花碱、芍药内酯苷、格陵兰黄连碱、1-甲基-2-壬基-4(1H)-喹诺酮。对11批由不同产地和品种药材制备的戊己丸的相似度进行了考察,其相似度在0.90以上。结论建立了戊己丸的UPLC-MS/MS指纹图谱分析方法,该分析方法快速、灵敏、简便,为戊己丸的质量控制提供实验依据。

Simultaneous Analysis of Thirteen Bioactive Components in Evodia rutaecarpa and Its Varieties by HPLC-DAD-MS

Objective To control the quality of Evodia rutaecarpa better.Methods An HPLC-DAD-MS/MS method was established for the rapid and efficient identification of bioactive constituents and for simultaneous quantitative analysis of four bioactive ingredients including evodiamine,rutaecarpine,dehydroevodiamine,and evodin in E.rutaecarpa,which was applied to evaluating eight samples of E.rutaecarpa and its varieties from different areas.Results Thirteen potentially bioactive constituents including one flavonoid glycoside,one limonin,four indoloquinazoline alkaloids,and seven quinolone alkaloids were identified in all samples and the contents of dehydroevodiamine,evodine,evodiamine,and rutaecarpine varied widely from 0.10% to 0.51%,0.49% to 3.12%,0.07% to 1.56%,and 0.10% to 0.69%,respectively.Conclusion This method is found to be convenient,fast,accurate,and it is facilitated to improve the quality control standard of E.rutaecarpa and related products.

HPLC法同时测定黄连上清片的黄芩-黄连-黄柏药对中9个指标性成分的含量

目的:建立同时测定黄连上清片中"黄芩-黄连-黄柏"药对中黄柏碱、黄柏酮、小檗碱、巴马汀、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、吴茱萸内酯和阿魏酸含量的HPLC分析方法。方法:采用Boston Green ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈–0.1%磷酸水溶液(含0.02 mol·L-1磷酸二氢钠),梯度洗脱,柱温35℃,检测波长为210 nm。结果:本实验方法学考察结果表明各色谱峰间分离度均达到定量要求,精密度、回收率、重复性等参数均达到定量分析的要求。12批次样品的含量结果显示9个成分中有7个被检测出,黄柏酮和阿魏酸未检出。和单味中药材成分相比,推断考虑在处方工艺制备过程中存在成分损失。结论:本实验针对黄芩-黄连-黄柏药对,建立了同时测定黄连上清片中10个指标性成分的含量分析方法,简便可靠,可用于黄连上清片的质量控制。