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弓形虫抗体免疫胶体金快速检测试纸条的研制 被引量:28
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作者 王艳华 李克生 +3 位作者 才学鹏 杜慧芳 李学瑞 张德林 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期29-32,共4页
将样品垫(加样区)、包被了弓形虫排泄分泌抗原和胶体金结合物的结合垫、包被了弓形虫排泄分泌抗原和抗弓形虫抗体的硝酸纤维素膜、吸水垫依次首尾互相衔接粘贴在白色塑料板上,组装成检测弓形虫抗体的免疫胶体金快速试纸条。然后用其进... 将样品垫(加样区)、包被了弓形虫排泄分泌抗原和胶体金结合物的结合垫、包被了弓形虫排泄分泌抗原和抗弓形虫抗体的硝酸纤维素膜、吸水垫依次首尾互相衔接粘贴在白色塑料板上,组装成检测弓形虫抗体的免疫胶体金快速试纸条。然后用其进行动物弓形虫病血清抗体检测,并用弓形虫IHA诊断试剂进行对照试验。经对已知弓形虫阴、阳性血清检测,与弓形虫IHA检测结果的符合率为82.5%,金标试纸条较弓形虫IHA诊断试剂能提前2 d检测到抗体。结果表明,检测弓形虫抗体免疫胶体金试剂(金标试纸条)的敏感度高于IHA。 展开更多
关键词 弓形虫 快速检测 排泄分泌抗原 羊抗弓形虫抗体 肢体金试纸条
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弓形虫ESA诱导小鼠产生的CD8^+ T细胞对早期黑色素瘤生长的影响 被引量:7
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作者 焦玉萌 方强 +4 位作者 夏惠 王雪梅 陶志勇 陈兴智 沈继龙 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期95-98,共4页
目的观察弓形虫排泄分泌抗原(TgESA)对B16F10黑色素瘤接种小鼠CD8+T细胞的影响,以及CD8+T细胞对B16F10黑色素瘤的作用。方法取RH株弓形虫速殖子体外培养12 h后,收集培养液,离心取上清,获得弓形虫ESA。15只C57BL/6小鼠随机分为A、B和C三... 目的观察弓形虫排泄分泌抗原(TgESA)对B16F10黑色素瘤接种小鼠CD8+T细胞的影响,以及CD8+T细胞对B16F10黑色素瘤的作用。方法取RH株弓形虫速殖子体外培养12 h后,收集培养液,离心取上清,获得弓形虫ESA。15只C57BL/6小鼠随机分为A、B和C三组(每组5只)。B组和C组每鼠右腋窝皮下接种B16F10黑色素瘤细胞2×105个,A组注射等量无菌PBS。接种后第7天,C组每只小鼠腹腔注射TgESA 100μl。接种后第13天,处死小鼠,无菌取脾。流式细胞仪检测各组小鼠CD3+CD8+T细胞所占脾细胞比例;采用免疫磁珠分选B组和C组脾细胞中的CD8+T细胞,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测两组CD8+T细胞对B16F10细胞的杀伤作用,分别设效靶细胞比为2.5∶1、5∶1和10∶1。另取30只C57BL/6小鼠随机分为E、F和G三组(每组10只),每鼠接种B16F10细胞2×105个。接种同时,F组和G组小鼠分别尾静脉注射分离自B组和C组的CD8+T细胞(2×105个/鼠)。观察小鼠瘤体生长情况,记录各组小鼠死亡数和死亡时间,共观察35 d。结果流式细胞仪检测结果显示,A、B和C组脾脏CD3+CD8+T细胞占脾细胞的比例分别为(13.86±0.13)%、(14.18±0.27)%和(15.74±0.28)%,C组显著高于其他两组(P<0.05)。LDH释放试验结果显示,不同效靶细胞比时,C组的CD8+T细胞杀伤活性均显著高于B组(均P<0.05)。G组的平均出瘤时间[(14.9±1.2)d]晚于F组[(11.9±0.7)d]和E组[(9.4±1.2)d](P<0.05)。3组小鼠自出瘤后瘤体均不断增长,但增长速度无明显差异,G组的瘤体面积始终小于其他两组(均P<0.05)。E、F和G组小鼠分别于B16F10细胞接种后第26、29和30天开始出现死亡,至观察终点(第35天),3组小鼠存活的数量分别为3、5和7只。结论TgESA可上调B16F10黑色素瘤小鼠CD8+T细胞的数量和杀伤功能,上调的CD8+T细胞具有早期延缓肿瘤生长的作用。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 排泄分泌抗原 CD8+ T细胞 黑色素瘤
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弓形虫排泄-分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导的脾与肠相关淋巴组织细胞免疫效应及动态变化 被引量:8
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作者 刘娟娟 殷国荣 +2 位作者 张建红 孟晓丽 陈洁 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第8期580-583,共4页
目的观察弓形虫与Vero细胞共培养提取的排泄-分泌抗原(ESA)鼻内免疫BALB/c小鼠诱导的脾及肠相关淋巴组织(GALT)细胞免疫效应及动态变化。方法84只BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组以ESA(20μg/只)为抗原,对照组用未接种弓形虫... 目的观察弓形虫与Vero细胞共培养提取的排泄-分泌抗原(ESA)鼻内免疫BALB/c小鼠诱导的脾及肠相关淋巴组织(GALT)细胞免疫效应及动态变化。方法84只BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组以ESA(20μg/只)为抗原,对照组用未接种弓形虫的细胞培养上清液(20μl/只),鼻内免疫2次,间隔2周。末次滴鼻后第1、2、3、4、5、6、7周处死小鼠,分离脾、派伊尔结(PP)及小肠上皮内淋巴细胞(IEL)并计数。结果实验组小鼠脾淋巴细胞第3周达高峰,第1、2、3周明显高于对照组;PP淋巴细胞明显增生,第3周达高峰,第1、2、3、4、5周显著高于对照组;IEL第2周增生达高峰,第1~3周显著高于对照组。结论弓形虫ESA鼻内免疫BALB/c小鼠可有效诱导不同黏膜部位及系统特异性的细胞免疫应答,且可持续较长时间。 展开更多
关键词 弓形虫 排泄-分泌抗原 鼻内免疫 细胞免疫应答
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弓形虫排泄-分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导体液免疫应答的动态观察 被引量:6
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作者 殷国荣 周永安 +2 位作者 刘娟娟 孟晓丽 刘红丽 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2007年第3期135-140,共6页
观察从Vero细胞与弓形虫速殖子共培养液分离的排泄-分泌抗原(Excreted-secreted antigens,ESA)鼻内免疫小鼠诱导的体液免疫应答及动态变化,为弓形虫复合黏膜疫苗候选抗原提供实验依据。BALB/c小鼠84只随机分为实验组和对照组,实... 观察从Vero细胞与弓形虫速殖子共培养液分离的排泄-分泌抗原(Excreted-secreted antigens,ESA)鼻内免疫小鼠诱导的体液免疫应答及动态变化,为弓形虫复合黏膜疫苗候选抗原提供实验依据。BALB/c小鼠84只随机分为实验组和对照组,实验组以ESA为抗原(20μg/只),对照组用未接种弓形虫的细胞培养上清液20μL(μg/只),滴鼻免疫2次(间隔2周)。分别于2次免疫后第1、2、3、4、5、6、7周颈椎脱位处死小鼠。ELISA法测定血清IgG、IgA,粪便sIgA及肠液sIgA。结果表明,免疫组小鼠血清IgG、IgA和粪便sIgA及肠液sIgA均增高。血清IgG、IgA水平分别第5周、第4周达高峰,免疫后第1~7周(P〈0.05)显著高于对照组。粪便sIgA第4周即达高峰,之后逐渐降低,至第7周仍(P〈0.05)显著高于对照组。肠液sIgA第4周达高峰,第2、3、4周(P〈0.05)高于对照组。可见,弓形虫ESA鼻内免疫BALB/c小鼠可有效诱导体液免疫应答,特异性抗体生成明显且可持续较长时间。 展开更多
关键词 弓形虫 排泄-分泌抗原 鼻内免疫 黏膜免疫 IgA
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小鼠腹水中弓形虫排泄分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导的免疫应答 被引量:6
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作者 刘娟娟 殷国荣 +3 位作者 管志玉 石蓉 张宇斌 孟晓丽 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第2期110-114,共5页
目的观察弓形虫感染小鼠腹水中分离的排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens,ESA)鼻内免疫小鼠对不同粘膜部位和系统的免疫效应。方法将5~6周龄BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只,实验组分别用从感染弓形虫后24、48、72 h小鼠腹... 目的观察弓形虫感染小鼠腹水中分离的排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens,ESA)鼻内免疫小鼠对不同粘膜部位和系统的免疫效应。方法将5~6周龄BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只,实验组分别用从感染弓形虫后24、48、72 h小鼠腹水中提取的ESA 20μg/只鼻内免疫小鼠2次,间隔2周;对照组用20μl/只PBS滴鼻。观察小鼠健康和死亡情况,记录体重。末次免疫后第3周处死小鼠,计数PP(Peyer’s patches)个数;分离PP淋巴细胞、脾淋巴细胞、小肠上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocyte,IEL)及肠系膜淋巴结细胞(mesenteric lymph node lympho-cyte,MLNL)并计数。眼眶采血和收集直肠内粪便,ELISA检测血清特异性IgG水平及粪便sIgA。结果72 h ESA组小鼠免疫后健康状况较差,体重逐渐降低,死亡4只;其他组小鼠体重仍呈增高趋势。各实验组小鼠IEL、MLNL、脾淋巴细胞以及PP淋巴细胞的增殖活性均高于对照组(P〈0.05),72 h和48 h ESA组高于24 h ESA组(P〈0.01)。免疫后第3周,各实验组小鼠血清IgG、粪便sIgA水平均高于对照组(P〈0.05),72 h和48 h ESA组高于24 h ESA组(P〈0.01)。结论感染后不同时间提取的腹水弓形虫ESA鼻内免疫小鼠均可诱导不同粘膜部位及系统特异性的免疫应答,48 h ESA的免疫效果最好。 展开更多
关键词 弓形虫 排泄-分泌抗原(ESA) 粘膜免疫 鼻内免疫 粘膜疫苗
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用弓形虫代谢分泌抗原制备间接血凝诊断试剂的研究 被引量:8
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作者 张德林 李学瑞 杜重波 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第9期15-18,共4页
用弓形虫代谢分泌抗原 (E/SA)致敏绵羊红细胞制备间接血凝诊断试剂 ,进行人和动物弓形虫病血清抗体检测 ,并用弓形虫虫体抗原致敏的红细胞间接血凝诊断试剂进行对照试验。结果表明 ,在弓形虫阴性、阳性血清检测中 ,弓形虫E/SA间接血凝... 用弓形虫代谢分泌抗原 (E/SA)致敏绵羊红细胞制备间接血凝诊断试剂 ,进行人和动物弓形虫病血清抗体检测 ,并用弓形虫虫体抗原致敏的红细胞间接血凝诊断试剂进行对照试验。结果表明 ,在弓形虫阴性、阳性血清检测中 ,弓形虫E/SA间接血凝诊断试剂与弓形虫虫体抗原间接血凝诊断试剂的符合率为 10 0 % ;在人工感染兔血的检测中 ,E/SA致敏的间接血凝诊断试剂比虫体抗原致敏的间接血凝诊断试剂的阳性检出时间提前 2d 。 展开更多
关键词 弓形虫 代谢分泌抗原 间接血凝诊断试剂 制备 血清抗体检测
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STAg联合ESA鼻内免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用 被引量:3
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作者 王海龙 唐旭 +2 位作者 殷国荣 孟晓丽 马广源 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2008年第4期205-209,共5页
观察弓形虫可溶性速殖子抗原(Soluble tachyzoite antigen,STAg)与排泄-分泌抗原(Excreted/secreted antigens,ESA)单独或联合鼻内免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用。分别用PBS 20μL和STAg 20μg、ESA 20μg及联合抗原(STAg 10μg+E... 观察弓形虫可溶性速殖子抗原(Soluble tachyzoite antigen,STAg)与排泄-分泌抗原(Excreted/secreted antigens,ESA)单独或联合鼻内免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用。分别用PBS 20μL和STAg 20μg、ESA 20μg及联合抗原(STAg 10μg+ESA 10μg)鼻内免疫BALB/c处女鼠2次,间隔2周。末次免疫后第13天处女鼠与雄鼠以2∶1同居。妊娠第8天用弓形虫速殖子(8000个/只)灌胃攻击所有孕鼠。妊娠第18天处死,计算活胎率,并测定孕鼠肝、胎盘和胎鼠脑组织弓形虫抗原和孕鼠脾组织内虫荷,同时测定孕鼠小肠冲洗液SIgA、血清IgG水平。结果表明,ESA组和联合抗原组活胎率显著高于PBS组,STAg组、ESA组和联合抗原组胎盘及胚胎感染率均低于PBS组,联合抗原组最低。孕鼠在弓形虫速殖子攻击后,PBS组明显出现竖毛、倦怠、腹部塌陷等异常表现,感染率为100%,死亡率为22.22%,而STAg组、ESA组和联合抗原组有轻微症状,感染率分别为85.71%、57.14%、57.14%,死亡率分别为16.67%、0%、0%。STAg组、ESA组和联合抗原组脾组织内虫荷均显著低于PBS组,减虫率分别为72.19%、72.29%、78.45%,ESA组和联合抗原组小肠冲洗液特异性SIgA均显著高于PBS组,联合抗原组最高,血清特异性IgG抗体水平差异不显著。由此可见,ESA单独或与STAg联合免疫可诱导孕鼠小肠液高水平SIgA,显著降低脾组织虫荷,显著提高胚胎存活率,表现出明显的垂直传播阻断的作用。 展开更多
关键词 弓形虫 可溶性速殖子抗原 排泄分泌抗原 黏膜免疫 垂直传播
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不同剂量弓形虫ESA鼻内免疫小鼠诱导的粘膜及系统免疫应答 被引量:3
8
作者 申金雁 管志玉 +3 位作者 刘红丽 孟晓丽 王海龙 殷国荣 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第3期186-189,共4页
目的观察不同剂量弓形虫排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens,ESA)鼻内免疫小鼠诱导的粘膜及系统免疫应答,确定适宜免疫剂量。方法40只BALB/c小鼠,雌雄各半,随机分为5组,每组8只。分别用5、10、20和30μgESA滴鼻免疫小鼠2次,间隔1... 目的观察不同剂量弓形虫排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens,ESA)鼻内免疫小鼠诱导的粘膜及系统免疫应答,确定适宜免疫剂量。方法40只BALB/c小鼠,雌雄各半,随机分为5组,每组8只。分别用5、10、20和30μgESA滴鼻免疫小鼠2次,间隔14d,对照组用20μl/只PBS滴鼻。于末次免疫后第14d,颈椎脱臼处死小鼠,ELISA法检测鼻咽冲洗液和小肠冲洗液sIgA、血清IgG抗体水平,分离并计数肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepitheliallym-phocytes,iIEL)、肠系膜淋巴结淋巴细胞(mesenteric lymph node lymphocytes,MLNL)及脾淋巴细胞。结果实验期间,小鼠健康状况良好。随鼻内免疫ESA剂量的增加,特异性抗体水平不同程度的升高,MLNL、iIEL及脾淋巴细胞也显示不同程度的增生性应答。其中,30μg组小鼠血清IgG、脾淋巴细胞数量与10μg组、5μg组和PBS组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);30μg组小肠冲洗液sIgA、鼻咽冲洗液sIgA、iIEL和MLNL数量,20μg组小肠冲洗液sIgA和MLNL数量与5μg组及PBS组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);20μg组血清IgG与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论20μg和30μgESA鼻内免疫能有效诱导粘膜及系统免疫应答。 展开更多
关键词 弓形虫 排泄分泌抗原 鼻内免疫 粘膜疫苗
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Vero细胞无血清培养制备弓形虫排泄-分泌抗原适宜条件的筛选 被引量:2
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作者 吴静 刘娟娟 +3 位作者 殷国荣 孟晓丽 刘红丽 王海龙 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第10期903-905,共3页
目的筛选Vero细胞无血清培养制备弓形虫排泄-分泌抗原(ESA)的适宜条件。方法采用拉丁方析因设计。第一部分:在血清浓度为0.5%、1.0%、2.0%、4.0%的培养基中,共培养Vero细胞与弓形虫速殖子,分别于培养3、6、12、24h时,改为无血清培养基,... 目的筛选Vero细胞无血清培养制备弓形虫排泄-分泌抗原(ESA)的适宜条件。方法采用拉丁方析因设计。第一部分:在血清浓度为0.5%、1.0%、2.0%、4.0%的培养基中,共培养Vero细胞与弓形虫速殖子,分别于培养3、6、12、24h时,改为无血清培养基,继续培养至第7天,收集培养上清液,制备ESA,并检测蛋白含量。第二部分:在含1.0%血清培养基中共培养Vero细胞与弓形虫速殖子,分别于培养12、24、48、72h时,改为无血清培养基,继续培养至第7、9、11、13天,收集培养上清液,制备ESA,并检测蛋白含量。结果Vero细胞与弓形虫速殖子在1.0%血清浓度培养基中培养12或24h时,无血清培养基继续培养7d,制备的ESA蛋白含量显著高于其他血清浓度(0.5%、2.0%、4.0%)及含血清培养时间(3、6h)。Vero细胞与弓形虫速殖子在含1.0%血清培养基中共培养12、24h,无血清培养基继续培养至第13天,制备的ESA蛋白含量显著高于其他培养时间(48、72h)和无血清培养基继续培养时间(7、9、11d)。结论培养基的血清浓度以及含血清和无血清培养时间是影响体外制备ESA的重要因素。Vero细胞与弓形虫速殖子在1.0%血清浓度培养基中培养12h,无血清培养基继续培养13d,为制备ESA的适宜条件。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 排泄-分泌抗原 VERO细胞 无血清培养
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ESA与STAg联合滴鼻免疫小鼠诱导的特异性免疫应答 被引量:2
10
作者 刘红丽 管志玉 +2 位作者 殷国荣 马晓明 韩惠瑛 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第12期910-912,923,共4页
目的观察弓形虫排泄分泌抗原(ESA)与可溶性速殖子抗原(STAg)联合或单独滴鼻免疫小鼠的免疫应答效果,筛选弓形虫黏膜疫苗候选抗原。方法将40只BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只。实验组分别用20μgSTAg、30μgESA及二抗原联合(15μgESA与1... 目的观察弓形虫排泄分泌抗原(ESA)与可溶性速殖子抗原(STAg)联合或单独滴鼻免疫小鼠的免疫应答效果,筛选弓形虫黏膜疫苗候选抗原。方法将40只BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只。实验组分别用20μgSTAg、30μgESA及二抗原联合(15μgESA与10μgSTAg)滴鼻免疫2次,间隔14d,对照组用PBS以20μl/只滴鼻。于末次免疫后第14天,取血清,收集小肠冲洗液,检测特异性抗体,分离肠上皮内淋巴细胞(iIEL)和脾淋巴细胞并计数。结果整个实验期间,各组小鼠健康状况良好,体重逐渐增加。STAg组、ESA组及联合抗原组小鼠黏膜、血清中特异性抗体水平依次升高,脾淋巴细胞和iIEL增殖反应逐渐增强。联合抗原组和ESA组血清IgG抗体和小肠冲洗液sIgA升高尤为显著。同时,联合抗原组、ESA组脾淋巴细胞和iIEL增生显著高于对照组。结论ESA单独或联合STAg滴鼻免疫小鼠均能激发弓形虫特异性黏膜及系统免疫应答。两种抗原联合免疫的研究,将有助于制定更加完善的弓形虫疫苗研究策略。 展开更多
关键词 弓形虫 排泄分泌抗原 可溶性速殖子抗原 联合抗原 鼻内免疫 黏膜免疫
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刚地弓形虫STAg鼻内免疫小鼠诱导小肠IgA分泌细胞数量及sIgA水平动态变化 被引量:2
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作者 申金雁 殷国荣 +3 位作者 刘红丽 殷丽天 孟晓丽 王海龙 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期411-415,共5页
目的动态观察刚地弓形虫(简称弓形虫)可溶性速殖子抗原(STAg)鼻内免疫小鼠对小肠IgA分泌细胞(IgASCs)数量和分泌型IgA(sIgA)水平的影响。方法 5~6周龄BALB/c小鼠96只,随机均分为免疫组和对照组。免疫组小鼠用STAg(20μg/只,悬... 目的动态观察刚地弓形虫(简称弓形虫)可溶性速殖子抗原(STAg)鼻内免疫小鼠对小肠IgA分泌细胞(IgASCs)数量和分泌型IgA(sIgA)水平的影响。方法 5~6周龄BALB/c小鼠96只,随机均分为免疫组和对照组。免疫组小鼠用STAg(20μg/只,悬于20μl PBS)滴鼻免疫2次,间隔2周;对照组用等量PBS代替。末次免疫后1周,灌胃感染RH株弓形虫速殖子(1×10~4个/只,溶于0.5 ml PBS),记录小鼠健康状况及体重。于感染后6、7、8、9、10和1 1 d随机处死每组小鼠各8只,免疫组化检测小鼠的十二指肠、空肠和回肠黏膜IgASCs数量,ELISA测定小肠冲洗液sIgA水平。结果感染后所有小鼠均发病,但免疫组症状较轻,体重增加幅度明显高于对照组(P〈0.05),感染后第7天对照组小鼠死亡2只。两组小鼠小肠冲洗液sIgA水平均呈升高趋势,但免疫组高于对照组(P〈0.05)。十二指肠IgASCs数量,对照组的略有增加,而免疫组持续升高至9 d后维持较高水平为20.65±1.67,对照组为12.30±2.67,对照组和免疫组十二指肠IgASCs数量与小肠液sIgA水平的相关性分别为r=0.378(P〈0.05)和r=0.566(P〈0.05)。空肠IgASCs数量,对照组的呈下降趋势,免疫组的持续升高至9 d后略下降。对照组和免疫组空肠IgASCs数量与小肠液sIgA水平的相关性分别为r=-0.557(P〈0.05)和r=0.218(P〉0.05)。对照组回肠IgASCs数量持续下降,免疫组的始终保持较高水平,对照组和免疫组回肠IgASCs数量与小肠液sIgA水平的相关性分别为r=-0.685(P〈0.05)和r=-0.053(P〈0.05)。结论 STAg鼻内免疫能使经口感染弓形虫小鼠空肠和回肠IgASCs数量增加,小肠黏膜免疫屏障功能增强。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 可溶性速殖子抗原 鼻内免疫 抗体分泌细胞 SIGA
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刚地弓形虫排泄-分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导的免疫应答 被引量:3
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作者 刘娟娟 殷国荣 +1 位作者 周永安 孟晓丽 《国际医学寄生虫病杂志》 CAS 2007年第2期66-69,共4页
目的 观察刚地弓形虫排泄-分泌抗原(ESA)鼻内免疫小鼠后对不同黏膜部位和系统的免疫效应。方法 用Vero细胞培养刚地弓形虫,提取ESA抗原;将5—6周龄BALB/c小鼠随机分为6组,每组10只,实验组分别用培养5、7、9、11和14d提取的ESA20... 目的 观察刚地弓形虫排泄-分泌抗原(ESA)鼻内免疫小鼠后对不同黏膜部位和系统的免疫效应。方法 用Vero细胞培养刚地弓形虫,提取ESA抗原;将5—6周龄BALB/c小鼠随机分为6组,每组10只,实验组分别用培养5、7、9、11和14d提取的ESA20μg/只鼻内免疫小鼠2次,间隔为2周;对照组用无攻虫的细胞培养上清液滴鼻。观察小鼠健康和死亡情况,记录体重。在末次免疫后第3周处死小鼠,分别分离派伊尔结(PP)、脾淋巴细胞、肠上皮内淋巴细胞(IEL)、肠系膜淋巴结淋巴细胞(MLNL),并加以计数。收集粪便和眶血样本,ELISA检测粪内sIgA水平及血清IgG特异抗体。结果 实验期间小鼠健康状况良好,对照组和实验组小鼠体重均不同程度增加;末次免疫后第3周,实验组粪便sIgA、血清IgG、PP细胞、脾淋巴细胞、MLNL、IEL的数量均高于对照组,14d组(P〈0.01)的抗体滴度和各淋巴细胞计数最高。结论 用刚地弓形虫速殖子与Vero细胞共培养5—14d提取的ESA鼻内免疫小鼠均可诱导黏膜及系统特异性的免疫应答,共培养第14天提取的ESA免疫效果优于其他时间组。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 ESA 鼻内免疫 黏膜免疫
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利用弓形虫病人血清筛选弓形虫速殖子特异性抗原 被引量:1
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作者 张影 张瑾 +3 位作者 杨英超 薄淑英 辛晓芳 王国治 《中国药事》 CAS 2011年第6期550-553,共4页
目的筛选能引起人体免疫反应的弓形虫抗原标记。方法利用实验室保存的9份弓形虫病人血清标准品、6份阴性血清标准品,以及2份弓形虫病人血清国际标准品作为一抗,分别与刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株的可溶性速殖子抗原(soluble tach... 目的筛选能引起人体免疫反应的弓形虫抗原标记。方法利用实验室保存的9份弓形虫病人血清标准品、6份阴性血清标准品,以及2份弓形虫病人血清国际标准品作为一抗,分别与刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株的可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)和排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens,ESA)进行免疫印迹反应。结果发现STAg中有10条蛋白带与所用阳性血清均发生免疫反应;ESA中有4条蛋白带能与所有阳性血清发生免疫反应,这些蛋白与阴性血清均不发生免疫反应。其中分子量为30、35、49、50、54kDa的STAg抗原以及分子量为23、24、28kDa的ESA抗原能与所用阳性血清发生较强免疫反应。结论本实验结果将有助于寻找在弓形虫病人体内能够引起免疫反应的弓形虫诊断抗原和免疫保护性抗原,为弓形虫诊断试剂以及疫苗开发奠定初步基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 可溶性速殖子抗原 排泄-分泌抗原 血清标准品 免疫印迹
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弓形虫排泄/分泌抗原的免疫保护性研究进展 被引量:4
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作者 吴静 殷国荣 《国际医学寄生虫病杂志》 CAS 2006年第6期309-312,共4页
弓形虫排泄/分泌抗原(ESA)是虫体在黏附、侵入宿主细胞及在纳虫泡中寄生过程中分泌、排泄的抗原物质。近期的研究主要通过体外培养法获取ESA,并对其进行分子生物学及免疫学特性研究。ESA中的多种成分具有较强的免疫原性,可诱导细胞及体... 弓形虫排泄/分泌抗原(ESA)是虫体在黏附、侵入宿主细胞及在纳虫泡中寄生过程中分泌、排泄的抗原物质。近期的研究主要通过体外培养法获取ESA,并对其进行分子生物学及免疫学特性研究。ESA中的多种成分具有较强的免疫原性,可诱导细胞及体液免疫应答并产生抗弓形虫感染的保护作用。研究ESA的免疫保护作用对揭示弓形虫带虫免疫及免疫逃避机制有重要意义,对弓形虫病的诊断及免疫预防、疫苗候选抗原的制备具有重要价值。 展开更多
关键词 弓形虫 排泄分泌抗原 保护性免疫
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弓形虫代谢分泌抗原对猪T细胞亚群的影响
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作者 蔡志杰 王艳华 +5 位作者 付宝权 李文卉 芦赟 张燕丽 曹丽艳 张德林 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期753-758,共6页
为了研究弓形虫代谢分泌抗原对仔猪T细胞亚群及抗体的影响,将仔猪随机分为6组,每组5只,分别为E/SA组、E/SA+CPG(未乳化)组、E/SA+CPG组、E/SA+IL-2组、E/SA+IL-2+CPG组及对照组。分别于免疫前、免疫后第2周、免疫后第4周、感染后第1周... 为了研究弓形虫代谢分泌抗原对仔猪T细胞亚群及抗体的影响,将仔猪随机分为6组,每组5只,分别为E/SA组、E/SA+CPG(未乳化)组、E/SA+CPG组、E/SA+IL-2组、E/SA+IL-2+CPG组及对照组。分别于免疫前、免疫后第2周、免疫后第4周、感染后第1周及感染后第2周采集仔猪外周血,用流式细胞仪对各试验组外周血中CD4+及CD8+T淋巴细胞亚群的动态变化规律进行检测,用IHA对抗弓形虫抗体水平做检测。结果显示,弓形虫代谢分泌抗原免疫仔猪后第4周,免疫组外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞水平和特异性抗体效价与对照组相比均有大幅度升高;感染后第1周,免疫组CD4+T细胞水平及CD4+/CD8+比值较感染前有不同程度降低,感染后第2周,免疫组CD4+T细胞水平及CD4+/CD8+比值上升至免疫后水平,CD8+水平下降,感染后特异性抗体效价进一步升高。表明,弓形虫代谢分泌抗原能够提高仔猪外周血CD4+及CD8+T淋巴细胞水平和特异性抗体水平。 展开更多
关键词 弓形虫 代谢分泌抗原 T细胞亚群 抗体水平
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弓形虫ESA鼻内免疫小鼠诱导的黏膜及系统免疫应答
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作者 管志玉 孟晓丽 +2 位作者 殷国荣 刘红丽 王海龙 《山西医科大学学报》 CAS 2007年第10期868-871,共4页
目的观察弓形虫排泄-分泌抗原(excreted-secreted antigen,ESA)鼻内免疫小鼠诱导黏膜和系统免疫应答的效果。方法将64只BALB/c小鼠随机分为8个组,每组8只。实验组小鼠分别用腹腔感染弓形虫小鼠第0,6,12,24,36,48和60小时无菌收集的腹腔... 目的观察弓形虫排泄-分泌抗原(excreted-secreted antigen,ESA)鼻内免疫小鼠诱导黏膜和系统免疫应答的效果。方法将64只BALB/c小鼠随机分为8个组,每组8只。实验组小鼠分别用腹腔感染弓形虫小鼠第0,6,12,24,36,48和60小时无菌收集的腹腔液中获取的ESA 20μg/只滴鼻免疫小鼠2次,间隔14 d,以PBS 20μl/只滴鼻为对照。逐日观察小鼠状况,于末次免疫后第14天颈椎脱位处死小鼠,检测血清特异性IgG、小肠冲洗液sIgA水平,分离肠上皮内淋巴细胞(intesti-nal intraepithelial lymphocytes,iIEL)及肠系膜淋巴结淋巴细胞(mesenteric lymph node lymphocytes,MLNL)并计数。结果60 h组小鼠初次免疫后第8-11天,有倦怠、饮水及采食量减少等表现,体重增长较其他组缓慢(P<0.05),其他组小鼠健康状况良好。不同时相ESA鼻内免疫小鼠后特异性抗体水平升高,MLNLi、IEL发生增殖性应答。48 h组和60 h组各项指标均明显高于0 h组(P<0.01)及PBS组(P<0.05)。结论48 h和60 h弓形虫ESA均能诱导黏膜及系统免疫应答,但60h ESA可能对机体有毒副作用,不适宜直接滴鼻免疫,48 h ESA可作为弓形虫黏膜疫苗的候选抗原。 展开更多
关键词 弓形虫 免疫 黏膜 排泄-分泌抗原 鼻内免疫
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弓形虫排泄分泌抗原对B16F10黑素瘤小鼠CD4^+CD25^+Foxp3^+T细胞和NK细胞的影响 被引量:11
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作者 焦玉萌 章黎 +2 位作者 葛以跃 梁越进 王勇 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期301-306,共6页
目的探讨弓形虫排泄分泌抗原(ESA)对B16F10黑素瘤小鼠CD4+CD25+Foxp3+T细胞和NK细胞数量和功能的影响,观察ESA对肿瘤生长的作用。方法将传代培养的B16F10黑素瘤细胞接种于C57BL/6小鼠右腋窝皮下,建立荷瘤动物模型。采用ESA腹腔注射进行... 目的探讨弓形虫排泄分泌抗原(ESA)对B16F10黑素瘤小鼠CD4+CD25+Foxp3+T细胞和NK细胞数量和功能的影响,观察ESA对肿瘤生长的作用。方法将传代培养的B16F10黑素瘤细胞接种于C57BL/6小鼠右腋窝皮下,建立荷瘤动物模型。采用ESA腹腔注射进行干预,将实验小鼠分为4组:PBS组、B16F10组、PBS+ESA组、B16F10+ESA组,分别于ESA干预后2、4、6d取脾,流式细胞术检测各组小鼠脾脏CD4+CD25+Foxp3+T细胞和NK细胞占脾细胞的比例;WST-8法检测各组小鼠CD4+CD25+T细胞对CD4+CD25-T细胞增殖的抑制功能;LDH法检测NK细胞杀伤B16F10功能;观测荷瘤鼠肿瘤体积动态变化。结果 ESA干预4、6d后,荷瘤鼠脾脏CD4+CD25+Foxp3+T细胞占脾细胞的比例分别为(1.65±0.18)%和(1.56±0.17)%,与荷瘤对照组[分别为(2.47±0.10)%和(2.82±0.12)%]比较差异均有统计学意义(P均<0.05);ESA干预可使CD4+CD25+T细胞对CD4+CD25-T细胞的抑制功能下降。抑制作用以干预后4、6d较明显,抑制率分别为50.03%和50.00%,低于荷瘤对照组的75.03%和78.14%(P均<0.05);荷瘤鼠脾脏NK细胞占脾细胞的比例[(3.58±0.07)%]在ESA干预后6d显著高于荷瘤对照组的(2.61±0.13)%(P<0.05)。同时NK细胞杀伤B16F10细胞功能也增强,不同效靶细胞比(5∶1、10∶1、20∶1)下分别为26.51%、35.25%、60.19%,明显高于荷瘤对照组的16.81%、24.63%、45.62%(P均<0.05);ESA干预后,瘤体出现延缓生长,平均出瘤时间较对照组延迟6d,实验终点荷瘤第35天ESA干预组瘤体体积[(6208.34±443.64)mm3]明显小于荷瘤对照组[(9027.46±1362.01)mm3](P<0.05)。结论弓形虫ESA可通过下调荷瘤鼠CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例并抑制其功能和上调NK细胞比例并增强其杀伤功能,发挥抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 弓形虫 排泄分泌抗原 CD4+CD25+Foxp3+T细胞 NK细胞 黑素瘤
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不同剂量霍乱毒素联合弓形虫ESA小鼠鼻内免疫的佐剂效应 被引量:2
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作者 李润花 孟晓丽 +3 位作者 王海龙 刘红丽 申金雁 殷国荣 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2010年第10期721-724,742,共5页
目的观察不同剂量霍乱毒素(cholera toxin,CT)联合弓形虫排泄-分泌抗原(excreted-secreted antigens,ESA)滴鼻免疫小鼠的佐剂效应,探索CT作为鼻黏膜佐剂的适宜剂量。方法 5~6周龄BALB/c小鼠60只,随机分为5组,每组12只,分别以0、0.5... 目的观察不同剂量霍乱毒素(cholera toxin,CT)联合弓形虫排泄-分泌抗原(excreted-secreted antigens,ESA)滴鼻免疫小鼠的佐剂效应,探索CT作为鼻黏膜佐剂的适宜剂量。方法 5~6周龄BALB/c小鼠60只,随机分为5组,每组12只,分别以0、0.5、1.0、1.5或2.0μg CT联合ESA 20μg滴鼻免疫小鼠,间隔2周进行加强免疫,共2次。末次免疫后30 d,眼静脉丛采血并颈椎脱臼处死小鼠,用ELISA法检测血清IgG和粪便sIgA水平。分离脾、Peyer’s patch(PP)、肠系膜淋巴结(MLN)淋巴细胞。结果 1.5和2.0μg CT组小鼠健康状况下降、存活率降低。免疫后30 d,小鼠粪便sIgA水平随CT剂量的增加而升高,1.0、1.5和2.0μg CT组小鼠粪便sIgA水平显著高于无佐剂组(P〈0.05),3组间差异无统计学意义(P〉0.05)。CT联合ESA鼻内免疫小鼠后MLN、PP和脾淋巴细胞数显著高于无佐剂组(P〈0.05),并均呈现一定的剂量效应,但较高剂量组(1.0、1.5和2.0μg)之间差异无统计学意义(P〉0.05)。结论 1.0μg CT联合ESA鼻内免疫小鼠可诱导较高水平的黏膜和系统免疫应答,且对小鼠的健康无不良影响。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 霍乱毒素 排泄-分泌抗原 鼻内免疫 黏膜佐剂
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弓形虫排泄-分泌抗原和可溶性速殖子抗原免疫原性的观察 被引量:1
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作者 刘娟娟 吴静 +3 位作者 殷国荣 孟晓丽 刘红丽 刘转转 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2009年第1期16-19,23,共5页
目的观察弓形虫速殖子排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigen,ESA)和可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)鼻内免疫小鼠的免疫原性。方法BALB/c小鼠随机分为4组,分别用PBS 20μl/只、体外排泄-分泌抗原(excreted/secre... 目的观察弓形虫速殖子排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigen,ESA)和可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)鼻内免疫小鼠的免疫原性。方法BALB/c小鼠随机分为4组,分别用PBS 20μl/只、体外排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigenin vitro,ESAv)、腹腔排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigen in mice,ESAm)和STAg各20μg/只鼻内免疫2次,间隔14 d。分别于末次免疫后14 d和44 d每组处死8只小鼠,计数肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocytes,iIEL)和脾淋巴细胞,ELISA法检测血清IgG和小肠冲洗液sIgA抗体水平。结果实验期间,ESAm组小鼠于二次免疫后状态欠佳,其他各组小鼠健康状况良好。末次免疫后14 d,各抗原组脾淋巴细胞及iIEL均增殖活跃,细胞数与PBS组比较,差异具统计学意义(P<0.05或P<0.01);至免疫后44 d,两种ESA组脾淋巴细胞及iIEL数与PBS组比较差异具统计学意义(P<0.05)。各抗原组血清IgG水平在免疫后14 d和44 d均明显增高,与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。免疫后14 d肠液sIgA水平ESAv、ES-Am和STAg组与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),ESAm和STAg组与ESAv组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),两种ESA组在免疫后44 d与PBS组比较差异仍具统计学意义(P<0.05)。结论ESAv、ESAm和STAg鼻内免疫均可诱导粘膜及系统的细胞和体液免疫应答,有较强的免疫原性。但ESAm可能对机体有毒副作用,不适宜直接鼻内免疫。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 排泄-分泌抗原 可溶性速殖子抗原 鼻内免疫 免疫原性
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ESA和STAg鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染作用 被引量:1
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作者 杨晓红 吴静 +3 位作者 殷国荣 刘娟娟 孟晓丽 申金雁 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期292-294,共3页
目的观察弓形虫速殖子排泄一分泌抗原(excreted/secreted antigen,ESA)和可溶性速殖子抗原(solubletachyzoite antigen,STAg)鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染作用。方法BALB/c小鼠64只随机分为4组,每组16只,分别用磷酸盐缓冲液(PBS)(对... 目的观察弓形虫速殖子排泄一分泌抗原(excreted/secreted antigen,ESA)和可溶性速殖子抗原(solubletachyzoite antigen,STAg)鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染作用。方法BALB/c小鼠64只随机分为4组,每组16只,分别用磷酸盐缓冲液(PBS)(对照组)20μl/只、体外排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigen in vitro,ESAv)20μg/只、腹腔排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigen in mice,ESAm)20μg/只和STAg20μg/只滴鼻免疫小鼠2次,间隔14 d。末次免疫后14 d每组处死8只小鼠,ELISA法检测血清IgG和小肠冲洗液sIgA。每组剩余8只小鼠用RH株弓形虫速殖子1×104个/只灌胃攻击,记录小鼠健康情况。攻击后30 d处死小鼠,计数脾、脑组织内弓形虫虫荷(速殖子数)。结果ESAm组小鼠于2次免疫后出现轻微竖毛、倦怠等症状,其他各组小鼠健康状况良好。免疫后14 d,各抗原组血清IgG水平均明显高于对照组(P<0.001);ESAv(P<0.05)、ESAm(P<0.001)和STAg(P<0.001)组肠液sIgA水平明显高于对照组,EsAm(P<0.001)和sTAg(P<0.05)组高于EsAv组。弓形虫攻虫后:30 d,各抗原组小鼠脾、脑组织内虫荷显著低于对照组(P<0.01),ESAv、ESAm和sTAg组脾内速殖子减虫率分别为49.2%,49.52%和51.94%,脑内减虫率分别为46.83%,50.81%和51.18%。结论ESAv、ESAm和STAg鼻内免疫均能产生抗弓形虫感染的部分保护,但ESAm可能对机体有毒副作用,不适宜直接鼻内免疫。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 排泄-分泌抗原 可溶性速殖子抗原
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