抗旋毛虫肌幼虫ES抗原IgY的制备及鉴定

目的制备抗旋毛虫肌幼虫排泄-分泌(excretory-secretory,ES)抗原的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),测定其效价及用于检测抗原的敏感性。方法 4只24w龄罗曼母鸡用旋毛虫肌幼虫ES抗原经大腿外侧与胸部肌肉免疫4次(首次剂量为500μg/只,加强剂量为250μg/只),每次间隔10d。取免疫前和首次免疫后42d的鸡蛋卵黄,用水稀释法提取IgY,考马斯亮蓝法测定蛋白含量,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹(Western blot)及间接荧光抗体试验(IFAT)对IgY进行分析,ELISA检测纯化后IgY的效价及检测抗原的敏感性。结果罗曼鸡经ES抗原免疫后,每枚鸡蛋经提纯后均可得到约70mg抗体,SDS-PAGE表明纯化的IgY有2条主要蛋白带,分子量为67kDa、23kDa,Western blot与IFAT发现提纯的IgY可识别肌幼虫虫体与ES抗原。IgY的抗体效价为1∶107,IgY-夹心ELISA检测旋毛虫抗原的敏感性为1.17ng/mL。结论制备的抗旋毛虫ES抗原的IgY具有较高的效价与敏感性。

旋毛虫肌幼虫ES抗原特异性蛋白2个结构基因的分子克隆及其高效表达

旋毛虫肌幼虫排泄－分泌（ＥＳ）抗原来源于体外培养的旋毛虫肌幼虫的排泄－分泌物。为研制具有ＥＳ抗原功能的旋毛虫基因重组抗原，首先用ＡＧＰＣ法提取旋毛虫肌幼虫总ＲＮＡ并进行变性琼脂糖凝胶电泳分析，发现它缺少真核生物所具有的２８ＳｒＲＮＡ。根据编码４５０００和４９０００蛋白的基因结构，设计并合成２对ＰＣＲ引物，用ＲＴ－ＰＣＲ方法分别扩增出了２个目的基因（ＴＳＰＧ和ＴＳＰＧⅡ）。序列分析发现，ＴＳＰＧ在第４５８到５０５位之间的核苷酸编码框架与结构基因Ｐ４５的不同，此外，还有多处出现与Ｐ４５不同的碱基。在ＴＳＰＧⅡ核苷酸序列中只有１个碱基与Ｐ４９不同。根据可识别的糖基化位点判定，ＴＳＰＧ和ＴＳＰＧⅡ各含有１个Ｎ－型连接的糖基化位点。将构建的３个重组质粒转化大肠杆菌，通过温度诱导培养，分别在大肠杆菌中表达出３７０００、４６０００和３４０００的重组蛋白，三者的表达水平分别为２２％、１０％和８％；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析和ＥＬＩＳＡ检测表明，它们均可被猪旋毛虫病阳性血清和单克隆抗体识别，但特异性有所不同。将ＴＳＰＧⅡ克隆至Ｅ．ｃｏｌｉ－Ｙｅａｓｔ穿梭载体ｐＨＩＬ－Ｓ１上，经内切酶消化和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交鉴定后，?

6株旋毛虫49 ku ES抗原基因克隆及序列分析

应用RT-PCR方法从不同来源的6株旋毛虫肌幼虫总RNA中克隆49 ku ES抗原基因序列,与GenBank中T.spiralis相应序列进行比对分析。结果表明,旋毛虫49 ku ES基因具有相当强的保守性,不同虫株核苷酸和氨基酸序列的同源性分别达97.2%和94.0%以上,序列间差异很小,不能较好地区分各旋毛虫种;该基因编码蛋白的抗原性很稳定,不同旋毛虫49 ku ES抗原性几乎没有差别,只要获得一个虫株的重组49 ku ES蛋白,即可用于其他不同种株旋毛虫病的免疫诊断及预防。

猪旋毛虫不同发育时期虫体49ku ES抗原基因的克隆与序列分析

根据GenBank中已登录的猪旋毛虫49 ku ES抗原基因序列设计了1对引物,用SDS裂解液配合蛋白酶K方法从猪旋毛虫不同发育时期(成囊前期幼虫、肌幼虫、成虫)虫体中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增49 ku ES抗原基因,将目的基因定向克隆入pMD18-T载体,转化大肠埃希氏菌TG1。用PCR、限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ进行单、双酶切鉴定,阳性质粒的测序结果表明,成功克隆了猪旋毛虫不同发育时期虫体49 ku ES抗原基因。序列分析结果显示:49 kuES抗原基因大小为948 bp,基因的保守性很强,序列同源性比较高,不同发育时期之间的差异很小。

旋毛虫ES抗原对小鼠腹腔巨噬细胞NOD1受体通路影响的研究

为了解旋毛虫ES抗原对宿主巨噬细胞NOD1受体通路的影响,本研究通过体外实验将旋毛虫ES抗原作用于小鼠腹腔巨噬细胞,观察NOD1受体及其信号通路中关键分子及相关细胞因子的表达动态。应用荧光定量PCR监测细胞内NOD1、RIP2和NF-κB m RNA的转录水平,western blot测定NOD1、RIP2、NF-κBp65、NF-κB p-p65蛋白表达量,ELISA测定细胞培养上清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量变化。结果显示,在一定的ES抗原作用浓度和时间范围内,巨噬细胞中各目的基因的转录水平均先增高,当作用时间和作用浓度超过一定值时则开始下降,作用24 h时NOD1 m RNA转录水平显著低于对照组(p<0.01);ES抗原浓度15μg/mL作用时间9 h时,巨噬细胞中NOD1、RIP2和NF-κB p-p65蛋白量显著增加(p<0.01),此时巨噬细胞培养上清中TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著增高(p<0.01)。结果表明,旋毛虫ES抗原在一定的作用时间和浓度范围内,可以激活并调节小鼠腹腔巨噬细胞中NOD1受体通路,上调NOD1受体通路中关键分子RIP2和下游分子NF-κB的表达,可以促进细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌;并且超过一定时间和浓度的ES抗原刺激可以导致小鼠腹腔巨噬细胞出现免疫耐受。本研究证明了宿主NOD1受体参与了旋毛虫引起的宿主免疫应答,为旋毛虫病防治和理解旋毛虫对宿主的感染机制提供新的思路。

旋毛虫ES抗原对DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1 mRNA表达的影响

目的探讨旋毛虫ES抗原对小鼠DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1表达的影响。方法以实时荧光定量PCR(Real-time FQ-PCR)技术对空白对照组、LPS组、ES抗原组、ES抗原+LPS/ES抗原组和LPS+LPS/ES抗原组,检测TLR4、NF-κB和AP-1基因mRNA表达水平变化。结果 ES抗原和LPS单作用组的TLR4、NF-κB和AP-1mRNA相对表达量分别是6.14/4.09/3.63和4.68/4.71/4.11,是ES抗原和LPS预作用组的各基因相对表达量的2倍以上,差异有统计学意义(P<0.05)。结论实验证实,DC2.4细胞受ES抗原和LPS持续作用或者双重作用均可诱导小鼠DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1表达的降低,可能诱致DC2.4细胞免疫耐受。

旋毛虫ES抗原结构基因TSPG Ⅱ 重组表达质粒构建

用限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ，从克隆载体ｐＵＴＳⅡ中切出一个０．９８８ｋｂＴＳＰＧⅡ基因，经ＥｃｏＲＩ和ＢｓｔＸＩ酶切鉴定，同时表达载体也用相同的酶进行酶切，经琼脂糖凝胶电泳，分别回收ＴＳＰＧⅡ基因和ｐＳＶ·ＳＰＯＲＴⅠ表达载体，用Ｔ４ＤＮＡ连接酶定向连接，转化大肠杆菌感受态细胞，挑取重组子，经ＥｃｏＲⅠ，ＢｓｔＸⅠ和ＨｉｎｄⅢ酶切鉴定，构建了重组表达质粒ｐＳＶ·ＴＳⅡ．

旋毛虫53kDa ES抗原蛋白二级结构及B细胞表位预测

目的 分析旋毛虫 5 3kDaES抗原蛋白二级结构及B细胞表位。方法 应用生物信息分析软件DNASTAR和Anthep ro5 .0 ,按照Kyte -Doolittle氨基酸亲水性标准对旋毛虫 5 3kDaES抗原的亲水性基序、二级结构及B细胞表位进行分析预测。结果 在旋毛虫 5 3kDaES抗原蛋白中 ,第 1 9- 2 5、4 0 - 5 1、6 1 - 6 7、99- 1 0 5、1 1 1 - 1 1 9、1 2 6 - 1 34、1 37- 1 5 2、1 79- 1 85、1 91 - 2 0 0、2 1 9- 2 38、2 6 1 - 2 6 7、2 81 - 2 95、31 2 - 32 3、331 - 343、36 7- 372、2 90 - 393位氨基酸残基具有较强的抗原性 ,第 1 9- 2 5、4 0 - 5 1、6 1 -6 7、99- 1 0 5、1 1 1 - 1 1 9、1 2 6 - 1 34、1 37- 1 5 2、1 79- 1 85、1 91 - 2 0 0、2 1 9- 2 38、2 6 1 - 2 6 7、2 81 - 2 95、31 2 - 32 3、331 - 343、36 7- 372、390- 393位氨基酸残基可能是B细胞的表位。结论 对旋毛虫 5

多头绦虫抗原特性的研究──多头绦虫节片抗原及原头节ES抗原的SDS-PAGE分析

为了探明多头绦虫成虫节片抗原及多头蚴原头节排泄分泌（ES）抗原的多肽组分，以供今后在免疫诊断与预防脑多头蚴病的应用，本试验应用SDS-PAGE首次分析了多头绦虫成虫节片抗原及多头蚴原头节ES抗原的多肽组分。应用12．5％凝胶的连续系统，垂直板型电泳，考马斯亮兰R－250染色的结果表明，成虫节片抗原共有16条多肽带，其分子量范围29～154kD，其中主带4条，分别为73、88、128、134kD，原头节ES抗原共6条多肽带，分子量范围33～132kD，其中主带2条，分别为33和108kD。本试验初步阐明多头绦虫成虫节片抗原和原头节ES抗原的多肽组分，为进一步研究多头绦虫抗原的特性奠定了基础。

肌幼虫可溶性抗原与ES抗原检测抗旋毛虫抗体效果的比较

目的比较旋毛虫肌幼虫可溶性抗原(SAg)与ES抗原(ESAg)检测抗旋毛虫抗体的效果。方法应用SAg-ELISA和ESAg-ELISA对旋毛虫病患者血清、感染旋毛虫的小鼠血清及肉汁、其他寄生虫感染人及动物血清进行抗旋毛虫抗体的检测。结果SAg-ELISA和ESAg-ELISA对10例旋毛虫病患者血清检测时抗体阳性率均为100%,但对10份正常人血清检测时SAg-ELISA的背景较深,两种抗原的A值相比较具有显著性差异(P<0.05);应用两种抗原对旋毛虫感染小鼠和正常小鼠血清及肉汁的检测结果与对人血清的检测结果相似。SAg与肝吸虫、肺吸虫、血吸虫等寄生虫感染人及动物血清均有交叉反应,而ESAg仅与1例肺吸虫病患者血清有交叉反应。结论旋毛虫肌幼虫SAg和ESAg检测抗旋毛虫抗体的敏感性相同,但ESAg的特异性优于SAg;肉汁也可作为样本进行抗旋毛虫抗体的检测。

旋毛虫肌幼虫ES抗原基因TSPGⅡ在真核细胞中的表达

用限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ从克隆载体ｐＵＴＳⅡ中切出一个０．９８８ｋｂＴＳＰＧⅡ基因，经ＥｃｏＲⅠ和ＢｓｔＸⅠ酶切鉴定；表达载体用相同的酶切，经琼脂糖凝胶电泳，分别回收ＴＳＰＧⅡ基因和ｐＳＶ·ＳＰＯＲＴⅠ表达载体，用Ｔ４ＤＮＡ连接酶定向连接，转化大肠杆菌感受态细胞，挑取重组子，经ＥｃｏＲⅠ，ＢｓｔＸⅠ和ＨｉｎｄⅢ酶切鉴定，构建了重组表达质粒ｐＳＶ·ＴＳⅡ。利用脂质体作载体，将重组表达质粒转染ｃｏｓ７细胞，４８～６０ｈ后用酶联免疫吸附试验检测，显示表达产物能与猪旋毛虫病的阳性血清反应。

IL-25在旋毛虫ES抗原刺激小鼠小肠中的影响

目的观察IL-25在旋毛虫ES抗原刺激小鼠小肠中的影响。方法30只BALB/c小鼠随机分为3组:空白对照组、旋毛虫排泄-分泌(ES)抗原刺激组与IL-25阻断组。空白对照组小鼠腹腔注射PBS;ES抗原刺激组小鼠腹腔注射旋毛虫ES抗原,每天1次,连续7 d;IL-25阻断组小鼠腹腔注射抗鼠的IL-25单克隆抗体3 d后,给予腹腔注射旋毛虫ES抗原。采用酶联免疫吸附法试验检测小鼠小肠组织匀浆IL-25、IL-13、IL-4、IL-5及IL-33水平变化,HE染色镜下观察小肠病理变化以及用阿尔新蓝-核固红染色观察小肠杯状细胞数量变化情况。结果与空白对照组比较,ES抗原刺激组小鼠小肠组织匀浆IL-25(t=4.675,P<0.05)、IL-13(t=5.392,P<0.05)、IL-4(t=4.275,P<0.05)、IL-5(t=4.675,P<0.05)、IL-33(t=4.644,P<0.05)含量有升高,差异均有统计学意义。与ES抗原刺激组比较,IL-25阻断组小鼠小肠组织IL-25(t=2.821,P<0.05)、IL-13(t=2.344,P<0.05)、IL-4(t=2.647,P<0.05)、IL-5(t=3.268,P<0.05)、IL-33(t=2.780,P<0.05)含量降低,差异均有统计学意义。结论旋毛虫ES抗原刺激小鼠小肠黏膜可能经IL-25/ILC2途径产生免疫作用。

旋毛虫病检测技术及ES抗原的研究进展

论述了旋毛虫病检测技术和ＥＳ抗原研究现状及其存在问题，利用旋毛虫肌幼虫的排泄分泌抗原（ＥＳ抗原）建立酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）可成功地用于旋毛虫病检测。

抗旋毛虫肌幼虫ES抗原单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备分泌抗旋毛虫肌幼虫排泄分泌(ES)抗原单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,并对其及分泌的McAb进行鉴定。方法用旋毛虫肌幼虫ES抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选分泌特异性、高滴度McAb的杂交瘤细胞株,制备腹水,进行纯化。ELISA间接法、夹心法和竞争法分别测定McAb滴度、相对亲和力和相加效应,琼脂双扩散试验鉴定免疫球蛋白类型,检测McAb与其他寄生虫抗原的交叉反应。电镜观察杂交瘤细胞超微结构,计数染色体数目及观察杂交瘤细胞分泌McAb的稳定性。结果筛选出2株(B2C12和E11F11)分泌抗旋毛虫肌幼虫ES抗原McAb杂交瘤细胞株。电镜显示,杂交瘤细胞具有肿瘤细胞和浆细胞的特征,胞浆内可见大量分泌颗粒;杂交瘤细胞染色体数目平均为98.6条,均能稳定分泌McAb(属IgM)。B2C12株培养上清液和腹水McAb滴度分别为1∶1280和1∶2.048×104,E11F11株为1∶640和1∶1.024×104,其中前者的相对亲和力较后者稍高。2株McAb识别ES抗原不同的抗原决定簇;且不与其他寄生虫抗原发生交叉反应。结论获得2株抗旋毛虫肌幼虫ES抗原杂交瘤细胞株,均能稳定分泌高滴度、特异性的IgM类McAb,并识别不同的抗原决定簇,为研制旋毛虫病诊断试剂盒和制备基因工程抗体奠定了基础。

旋毛虫与伪旋毛虫肌幼虫抗原的SDS-PAGE和双向电泳分析

目的鉴定旋毛虫(Trichinella spiralis,T1)与伪旋毛虫(T.pseudospiralis,T4)肌幼虫的差异蛋白。方法应用SDS-PAGE和双向电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)对T1、T4肌幼虫的可溶性抗原与培养24h的ES抗原的蛋白组分进行分析。结果SDS-PAGE显示,T1肌幼虫可溶性抗原有22条蛋白带(221.62kDa～14.88kDa),其中6条为T1特异性蛋白带(59.72、44.37、23.66、22.36、18.26、16.34kDa);T4可溶性抗原蛋白有18条带(185.28kDa～14.27kDa),其中4条为T4特异性蛋白带(132.60、119.30、35.26、31.02kDa)。T1的ES抗原有10条蛋白带(113.21kDa～14.37kDa),T4的ES抗原有9条蛋白带(104.71kDa～14.51kDa),T1、T4肌幼虫ES抗原的蛋白带均不相同。2-DE显示,T1可溶性抗原有193±12个蛋白点,分子量主要为11kDa～22kDa、25kDa～64kDa及100kDa～144kDa,所对应的等电点(pI)分别为4.7～8.2、4.5～6.5及5～7;T4可溶性抗原有175±9个蛋白点,分子量主要为12kDa～21kDa及25kDa～90kDa,所对应的pI分别为4～9.5与4.5～9.6。T1的ES抗原具有82±6个蛋白点,分子量主要为13kDa～16kDa、18kDa～22kDa及40kDa～55kDa,所对应的pI分别为4～7、3.8～6.2及5～9;T4的ES抗原具有69±5个蛋白点,分子量主要为10kDa～15kDa、17kDa～25kDa及29kDa～55kDa,所对应的pI分别为4.7～6.5、4.6～6及5～7。结论旋毛虫肌幼虫可溶性抗原及ES抗原的蛋白组分与伪旋毛虫的明显不同。

曼氏裂头蚴感染小鼠血清IgG抗体动态变化

目的观察小鼠实验感染曼氏裂头蚴后不同时间血清IgG抗体水平的变化。方法 40只小鼠随机分为5组,每组8只,1-5组小鼠采集尾静脉血后分别经口感染裂头蚴1、2、4、6及8条。感染后1周开始每周尾静脉采血,分离血清,至感染后18周。应用裂头蚴排泄分泌（excretory-secretory,ES）抗原ELISA检测血清中抗裂头蚴IgG抗体水平。结果 2条裂头蚴感染小鼠感染后2周的血清抗体阳性率为87.5%（7/8）,感染后3周升至100%（8/8）;1、4、6及8条裂头蚴感染小鼠感染后2周抗体阳性率即达100%（8/8）。5组小鼠均是在感染2~4周后血清抗体水平快速升高,感染后5~7周达峰值,之后抗体水平稍有下降,至感染后第18周抗体阳性率仍均为100%。5组小鼠感染裂头蚴后1~18周血清抗体水平间的差异有统计学意义（F=245.296,P〈0.05）,且抗体水平随感染剂量的增加而升高。结论小鼠感染不同剂量裂头蚴后2周即可检出血清抗裂头蚴抗体,ES抗原ELISA对不同感染度小鼠均有早期诊断价值。

抗大片吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体制备及其生物学特性鉴定

【目的】制备大片吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体,为大片吸虫病的免疫诊断、防治等研究奠定基础。【方法】利用杂交瘤技术,以大片吸虫分泌排泄抗原为免疫原制备单克隆抗体,并用ELISA、硫氰酸盐洗脱法等方法鉴定其生物学特性。【结果】通过间接ELISA筛选及3次亚克隆后,共获得5株大片吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为6D3、6B4、7D2、7D1和7D4。经鉴定,发现5株杂交瘤细胞染色体数为90～110条,均大于亲本细胞,其亚类鉴定分别属于IgG2b、IgM、IgM、IgG1和IgM,其轻链均为κ型;5株单克隆抗体(6D3、6B4、7D2、7D1、7D4)的上清效价分别为1:400、1:3200、1:25600、1:6400和1:6400,腹水效价分别为1:104、1:104、1:105、1:107和1:106;而表位测定结果表明,5株单克隆抗体中,6D3与7D1、7D2以及7D4与7D1、7D2作用于不同表位,6D3与6B4可能识别同一表位或重叠表位,或同一表位有空间位阻,7D4与6D3以及6B4与7D4、7D1、7D2可能具有空间位阻;5株单克隆抗体的相对亲和力为:6B4>7D4>7D1>6D3>7D2;5株杂交瘤细胞株均能稳定地分泌单克隆抗体。【结论】制备获得的分泌排泄抗原单克隆抗体可用于大片吸虫病的诊断和免疫机理等方面的进一步研究。

小鼠实验感染不同种旋毛虫后血清IgG抗体水平的变化

目的观察小鼠感染不同种旋毛虫后血清IgG抗体水平的变化。方法将50只小鼠随机分成5组(每组10只),分别感染旋毛虫(T1)、乡土旋毛虫(T2)、布氏旋毛虫(T3)、伪旋毛虫(T4)及纳氏旋毛虫(T7),每只感染300条幼虫,感染后1～6周每周尾部静脉采血,6周后每2周尾部静脉采血,至感染后20周,用旋毛虫肌幼虫ES抗原ELISA检测血清中抗旋毛虫IgG抗体水平。结果小鼠感染旋毛虫、乡土旋毛虫、布氏旋毛虫及纳氏旋毛虫后3～5周,血清IgG抗体水平快速升高,至感染后第8周达高峰,此后旋毛虫和乡土旋毛虫感染小鼠的血清IgG抗体水平缓慢下降,布氏旋毛虫及纳氏旋毛虫感染小鼠的血清IgG抗体水平迅速下降;小鼠感染伪旋毛虫后3～5周血清IgG抗体水平快速升高,至第16周达高峰,之后缓慢下降。5种旋毛虫感染小鼠的血清IgG抗体水平差异具有显著性(P<0.05)。结论5种旋毛虫感染小鼠的血清IgG抗体水平和动态变化不同;旋毛虫肌幼虫ES抗原可用于其他4种旋毛虫(乡土旋毛虫、布氏旋毛虫、伪旋毛虫、纳氏旋毛虫)感染的血清学诊断及流行病学调查。

外周血sCTLA-4作为晚期非小细胞肺癌患者的预后因子

目的：通过检测晚期非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer，NSCLC）患者外周血可溶性细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（soluble cytotoxic T lymphocyte associated antigen- 4，sCTLA-4）的表达，探讨其与晚期NSCLC患者生存期的关系。方法：采集2010年8月至2013年6月上海中医药大学附属龙华医院肿瘤科经病理证实的58例晚期NSCLC患者和30例正常人的外周血，运用ELISA法检测血中sCTLA-4含量，通过电话随访或上海市疾控中心获得患者生存期数据，分析sCTLA-4表达与NSCLC生存期的关系。结果：NSCLC患者外周血sCTLA-4表达率高于正常人（70.7% vs 6.7%， χ2=32.44，P〈0.01）,外周血sCTLA-4增高的患者中位生存期（MST）较短（41.63个月vs 31.57个月， χ2=7.765，P〈0.01），死亡风险高于其他患者（RR=305， χ2=8.01, P〈0.01）。结论：NSCLC患者外周血中sCTLA-4高表达，sCTLA-4可能成为晚期NSCLC患者的预后因子之一。

不同方法及材料检测大片吸虫感染的比较试验

为片形吸虫病诊断提供高效、简便的新技术，以大片吸虫分泌排泄抗原（ES抗原），用于斑点酶联免疫吸附试验（Dot－ELISA）、琼脂扩散酶联免疫吸附试验（Dig－ELISA）、免疫胶体金滴渗法（DIGFA）检测动物体内的大片吸虫（Fasciolagigantica）感染。通过检测血清、血纸、牛奶等几种材料，多重试验比较，结果三种方法均具有敏感性高、特异性强、准确性可靠等优点，并各有特长，如操作简便快速、费用低廉，易于在基层推广应用等，同时证明用血纸和牛奶检测抗体效果同样可靠。本试验首次报道用Dot－ELISA、DIGFA在奶中检测片形吸虫抗体，为该寄生虫病普查提供一种新思路。